פרוטוקול זה בודק את יעילות החיטוי של הלבנת מים חמים. זה יכול לעזור להעריך אם מכונת כביסה ומייבש מתאימים לניקוי בגדים מזוהמים על ידי וירוס. היתרון העיקרי של טכניקת הלבנה זו הוא שניתן לשכפל אותה במעבדות אחרות בקנה מידה קטן יותר באמצעות נהלים שעברו את תהליך אבטחת האיכות.
מי שידגימו את ההליך יהיו אחמד עבד אל-האדי, מיקרוביולוג, מריאלה מונג' וג'ונתן סוייר, מדעני מחקר ואחרים מהמעבדה שלנו. כדי להתחיל, להכין את אגר סויה טריפטי שונה על ידי שקילה וערבוב החומרים במים deionized כמתואר בטקסט. לאחר מכן, הוסיפו מיליליטר אחד של אליקוט Phi6 מרוכז ולא מדולל לאגר רך ו-100 מיקרוליטרים של תרבית מזרק פסאודומונס בשלב העץ.
לאחר מכן, לשפוך אגר רך על פני השטח של צלחת אגר סויה טריפטית שונה מוצק בעל קוטר של 100 מילימטרים. מנעו בועות או שפיכה על ידי סיבוב הצלחות בעדינות ופיזור האגר הרך באופן שווה על פני משטח האגר המוצק. לאחר דגירה של לילה בטמפרטורת החדר, יש לגרד בעדינות את תכולת שלוש הצלחות בעזרת מפזר תאים סטרילי לתוך צינור כרוניקה סטרילי של 50 מיליליטר המכיל 15 מיליליטר של חיץ SM.
מערבלים את הצינורות בהגדרה מקסימלית במשך דקה עד שתיים כדי לשבור את האגר ולאחר מכן צנטריפוגה אותם במשך 15 דקות ב 7, 000 פעמים G.ואז לאסוף את supernatant ולסנן אותו דרך מסנן מזרק 0.2 מיקרון. אחסנו את הסופרנטנט המסונן כמיליליטר אחד בקריוביאלים בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס עד לשימוש נוסף. בצע הערכה חזותית לפני הבדיקה על ידי מדידה ורישום של האורך והרוחב של ציוד המגן האישי או פריטי ה- PPE שאינם שטופים במקומות שונים.
לחיסון, הכינו תמיסת תמצית בקר 10% על ידי המסת גרם אחד של תמצית בקר בנפח כולל של 10 מיליליטר של 1X PBS. מסנן לעקר את כל נפח התמיסה באמצעות מסנן מזרק 0.2 מיקרון. לאחר מכן, בתוך ארון הבטיחות הביולוגי, חסן את תלושי הבדיקה והבקרה החיוביים עם כ-10 יחידות יוצרות רובד שביעי לכל דגימה על ידי הזרמת כמות של 10 מיקרוליטר של התמיסה על פריט ה-PPE כמספר טיפות ופיזור הטיפות באמצעות קצה הפיפטה.
מחממים את תמיסת הכביסה ל-50 מעלות צלזיוס בעזרת פלטה חמה ומערבבים. לאחר מכן למדוד ולרשום את ה- pH ואת הטמפרטורה של תמיסת הכביסה ולאסוף 10 מיליליטר של תמיסה לבדיקת סטריליות. לאחר מכן, לשפוך 3.25 ליטר של תמיסת כביסה לתוך מכונת כביסה מעוקרת.
הניחו במכונת הכביסה פריטי PPE, כיסוי פנים מחוסן אחד וארבע מסכות סרט לא מזוהם ללא קופונים. לאחר שטיפת פריטי PPE במשך 18 דקות, מסננים את מכונת הכביסה ושוטפים שלוש פעמים בחמישה ליטרים של מי ברז בטמפרטורת החדר כדי להסיר את הקצף. הוסיפו 3.25 ליטר מי ברז מעוקרים בטמפרטורת החדר למכונת הכביסה ובצעו מחזור שטיפה באורך תשע דקות.
לאחר מכן, העבר את פריטי ה- PPE לצד הספין של מכונת הכביסה כדי להסתובב במשך חמש דקות. יבשו את פריטי ה-PPE במשך 80 דקות בחום גבוה של 93 מעלות צלזיוס במייבש. לאחר מכן העבירו את פריטי ה-PPE מהמייבש לסביבת העבודה הסטרילית.
באופן אספטי להסיר את הקופונים מן הפריטים מחוסנים ומניחים אותם צינורות חרוטיים. לאחר מכן, לחלץ את הקופונים ב 10 מיליליטר של 10% Dey-Engley מרק מנטרל על ידי מערבולת במשך שתי דקות בהגדרה המקסימלית של הציוד. כדי לצלוח את התמציות בשיטת כיסוי אגר עליונה רכה קונבנציונלית, הוסיפו אליקוטים לדוגמה לצינור האגר הרך המכיל שישה מיליליטרים של אגר רך ו-100 מיקרוליטרים של מזרק הלוג פאזה P.
לאחר מכן, יוצקים את האגר הרך על פני השטח של צלחת אגר סויה טריפטית מוצקה ומפזרים באופן שווה את האגר הרך על פני משטח האגר המוצק על ידי מערבולת הצלחת. לאחר דגירה של לילה בטמפרטורת החדר, מנה ידנית את יחידות הפלטפורמה בכל צלחת. בדיקות המעבדה השיטתיות להערכת יעילות הכביסה של חיטוי ויראלי מ- PPE או בגדים בגודל מלא, הראו כי יחידת הפלטפורמה או ספירת צלחות ה- PFU ונפח הדגימה שחולץ אפשרו את חישוב מספר יחידות הפלטפורמה לכל קופון בדיקה.
תוצאות ההחלמה הנגיפית המייצגת התקבלו לבדיקת כיסוי פנים. בדיקות הכביסה סיפקו מידע על תכונות החומר כמו מתיחה או התכווצות של פריטי הלבוש ונתונים מבוקרי איכות של הפרוטוקול. היעילות של הלבנת מים חמים בחיטוי כיסויי פנים, ג'ינס וחומרי PPE מ-Phi6 הודגמה בגרף זה שבו הכוכבים מציינים את החיטוי המלא.
חשוב להשתמש בטכניקות אספטיות לאורך הליך זה כדי למנוע זיהום צולב. כמו כן, זמני ייבוש אינוקולום עבור קופונים הם ייחודיים לכל חומר ונקבעים לפני הבדיקה. שיטות משלימות אחרות כוללות בדיקות מיקרוסקופיה וחדירת נוזלים כדי לחקור השפלת חומרים או הערכות גודל נוספות המבטיחות שהגנת המחסום עדיין מתאימה ללובש.
טכניקה זו סיפקה את הבסיס להגברת יעילות הכביסה ובדיקת החומרים עבור פריטי לבוש ו- PPE בקנה מידה מלא. זה יכול גם לסייע בקביעת נהלי הלבנה יעילים במהלך אירוע הדבקה או מגיפה אחרים.
