Этот протокол проверяет эффективность дезинфекции при стирке горячей воды. Это может помочь оценить, подходят ли стиральная машина и сушилка для чистки одежды, загрязненной вирусом. Основным преимуществом этого метода отмывания является то, что он может быть воспроизведен в других лабораториях в меньших масштабах с использованием процедур, которые прошли через процесс обеспечения качества.
Продемонстрировать процедуру будут Ахмед Абдель-Хади, микробиолог, Мариэла Монж и Джонатан Сойер, ученые-исследователи и другие из нашей лаборатории. Для начала приготовьте модифицированный триптический соевый агар путем взвешивания и смешивания ингредиентов в деионизированной воде, как описано в тексте. Затем добавляют один миллилитр неразбавленной, концентрированной аликвоты Phi6 к мягкому агару и 100 микролитрам культуры сигринговой сиги log phase pseudomonas syringae.
Далее вылейте мягкий агар на поверхность затвердевшей модифицированной триптической соевой агаровой пластины диаметром 100 миллиметров. Предотвратите пузырьки или разлив, осторожно закручивая пластины и равномерно распределяя мягкий агар по твердой поверхности агара. После ночной инкубации при комнатной температуре аккуратно соскоблить содержимое трех пластин стерильным клеточным распределителем в стерильную 50-миллилитровую летопись, содержащую 15 миллилитров буфера СМ.
Вихрьте трубки при максимальной установке в течение одной-двух минут, чтобы разбить агар, а затем центрифугируйте их в течение 15 минут в 7000 раз G. Затем соберите супернатант и отфильтруйте его через 0,2-микронный шприцевой фильтр. Храните фильтрованный супернатант в виде одного миллилитра аликвоты в криовиалах при температуре 80 градусов Цельсия до дальнейшего использования. Выполните предварительную визуальную оценку путем измерения и регистрации длины и ширины немытых средств индивидуальной защиты или предметов СИЗ в различных местах.
Для прививки приготовьте 10%-ный раствор экстракта говядины, растворив один грамм экстракта говядины в общем объеме 10 миллилитров 1X PBS. Фильтр стерилизуют весь объем раствора с помощью шприцевого фильтра 0,2 мкм. Затем внутри шкафа биобезопасности прививайте тестовые и положительные контрольные купоны примерно от 10 до седьмых единиц образования бляшек на образец, пипетируя 10 микролитровое количество раствора на элемент СИЗ в виде нескольких капель и распределяя каплю с помощью кончика пипетки.
Разогрейте раствор для стирки до 50 градусов Цельсия с помощью конфорки и перемешивания. Затем измерьте и запишите рН и температуру раствора для стирки и соберите 10 миллилитров раствора для проверки стерильности. Затем налейте 3,25 литра раствора для стирки в стерилизованную шайбу.
Поместите в стиральную машину предметы СИЗ, одно привитое покрытие лица и четыре незагрязненные пленочные маски без талонов. После мытья предметов СИЗ в течение 18 минут сливайте стиральную машину и трижды ополаскивайте пятью литрами водопроводной воды комнатной температуры каждый раз, чтобы удалить пену. Добавьте 3,25 литра стерилизованной водопроводной воды комнатной температуры в стиральную машину и выполните девятиминутный цикл промывки.
Затем переместите элементы СИЗ в сторону отжима шайбы, чтобы вращаться в течение пяти минут. Высушите элементы СИЗ в течение 80 минут на высокой температуре 93 градуса Цельсия в сушилке. Затем переместите элементы СИЗ из сушилки в стерильное рабочее пространство.
Асептически извлеките купоны из привитых предметов и поместите их в конические трубки. Далее извлекаем купоны в 10 миллилитрах 10%-го нейтрализующего отвара Дея-Энгли путем вихря в течение двух минут при максимальной настройке оборудования. Чтобы наложить экстракты с использованием обычного метода наложения агара с мягким верхом, добавьте в трубку мягкого агара, содержащую шесть миллилитров мягкого агара и 100 микролитров бревенчатой фазы P syringae.
Затем вылейте мягкий агар на поверхность затвердевшей модифицированной триптической соевой агаровой пластины и равномерно распределите мягкий агар по твердой поверхности агара, закрутив пластину. После ночной инкубации при комнатной температуре вручную перечислите блоки платформера на каждой пластине. Систематическое лабораторное тестирование для оценки эффективности отмывания вирусной дезинфекции от полноразмерных СИЗ или одежды показало, что количество платформера или пластины ПФУ и объем извлеченного образца позволили рассчитать количество единиц платформера на тестовый купон.
Результаты репрезентативного вирусного выздоровления были получены для теста на покрытие лица. Тесты на отмывание предоставили информацию о свойствах материала, таких как растяжение или усадка предметов одежды, и данные протокола, контролируемые качеством. Эффективность стирки горячей водой при дезинфекции лицевых покрытий, джинсовых и скрабовых материалов СИЗ из Phi6 была продемонстрирована на этом графике, где звезды обозначают полную дезинфекцию.
Важно использовать асептические методы на протяжении всей этой процедуры, чтобы предотвратить перекрестное загрязнение. Кроме того, время сушки инокулята для купонов уникально для каждого материала и устанавливается перед тестированием. Другие дополнительные методы включают микроскопию и испытания на проникновение жидкости для изучения деградации материала или дальнейшей оценки размера, гарантируя, что барьерная защита по-прежнему подходит владельцу.
Этот метод послужил основой для повышения эффективности стирки и тестирования материалов для полномасштабной одежды и предметов СИЗ. Это также может помочь в установлении эффективных процедур отмывания во время другого случая заражения или пандемии.
