이 프로토콜은 온수 세탁의 소독 효능을 테스트합니다. 세탁기와 건조기가 바이러스에 오염된 의복을 청소하는 데 적합한지 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 세탁 기술의 주요 장점은 품질 보증 프로세스를 거친 절차를 사용하여 다른 실험실에서 더 작은 규모로 복제 할 수 있다는 것입니다.
이 절차를 시연하는 것은 미생물학자인 Ahmed Abdel-Hady, 연구 과학자인 Mariela Monge와 Jonathan Sawyer 및 우리 실험실의 다른 사람들입니다. 시작하려면 텍스트에 설명된 대로 탈이온수에서 성분을 계량하고 혼합하여 변형된 트립신 대두 한천을 준비합니다. 그런 다음 희석되지 않은 농축 Phi6 분취액 1 밀리리터를 연질 한천에 첨가하고 100 마이크로 리터의 로그 상 슈도모나스 주사기 배양물을 첨가합니다.
다음으로, 100 밀리미터의 직경을 갖는 응고 된 변형 된 트립신 대두 한천 플레이트의 표면 상에 부드러운 한천을 붓는다. 플레이트를 부드럽게 소용돌이 치고 부드러운 한천을 단단한 한천 표면에 고르게 분배하여 기포나 유출을 방지합니다. 실온에서 밤새 배양 한 후, 멸균 세포 스프레더로 3 개의 플레이트의 내용물을 15 밀리리터의 SM 완충액이 들어있는 멸균 된 50 밀리리터 크로니클 튜브에 부드럽게 긁어냅니다.
한천을 끊기 위하여 1 2 분 동안 최대 놓기에 관을 소용돌이 치고 그 후에 7, 000 시간 G.에 15 분 동안 그 (것)들을 원심분리하십시오 상청액을 모으고 0.2 미크론 주사기 여과기를 통해서 그것을 여과하십시오. 여과된 상청액을 1밀리리터 분취량으로 추가 사용이 될 때까지 섭씨 80도의 냉동 바이알에 보관하십시오. 다양한 위치에서 세탁하지 않은 개인 보호 장비 또는 PPE 품목의 길이와 너비를 측정하고 기록하여 사전 테스트 육안 평가를 수행합니다.
접종을 위해, 1X PBS의 총 부피 10ml에 쇠고기 추출물 1g을 용해시켜 10% 쇠고기 추출물 용액을 제조한다. 필터는 0.2 미크론 주사기 필터를 사용하여 용액의 전체 부피를 멸균합니다. 다음으로 바이오 안전 캐비닛 내부에서 10 마이크로리터 양의 용액을 PPE 항목에 여러 방울로 피펫팅하고 피펫 팁을 사용하여 액적을 퍼뜨려 샘플당 약 10-7번째 플라크 형성 장치가 있는 테스트 및 양성 대조군 쿠폰을 접종합니다.
핫플레이트와 교반 막대를 사용하여 세탁 용액을 섭씨 50도까지 따뜻하게 합니다. 그런 다음 세탁 용액의 pH와 온도를 측정 및 기록하고 무균 검사를 위해 10ml의 용액을 수집합니다. 그런 다음 3.25 리터의 세탁 용액을 멸균 된 와셔에 붓습니다.
PPE 품목, 접종된 안면 가리개 1개, 오염되지 않은 필름 마스크 4개를 쿠폰 없이 세탁기에 넣습니다. PPE 품목을 18분 동안 세척한 후 세탁기의 물기를 빼고 매번 5리터의 실온 수돗물로 삼중 헹구어 거품을 제거합니다. 3.25리터의 실온 멸균 수돗물을 세탁기에 넣고 9분 동안 긴 헹굼 과정을 수행합니다.
그런 다음 PPE 항목을 와셔 스핀 쪽으로 옮겨 5분 동안 회전시킵니다. 건조기에서 섭씨 80도의 고온 설정에서 PPE 품목을 93분 동안 건조시킵니다. 그런 다음 PPE 항목을 건조기에서 멸균 작업 공간으로 옮깁니다.
접종 된 품목에서 쿠폰을 무균 적으로 제거하고 원추형 튜브에 넣으십시오. 다음으로, 장비의 최대 설정에서 2 분 동안 볼텍싱하여 10 % Dey-Engley 중화 국물 10ml에 쿠폰을 추출합니다. 통상적인 소프트 탑 한천 오버레이 방법을 사용하여 추출물을 플레이팅하기 위해, 6 밀리리터의 연질 한천 및 100 마이크로리터의 로그 상 P 주사기를 함유하는 연질 한천 튜브에 시험 샘플 분취량을 첨가한다.
다음으로, 응고된 변성 트립신 대두 한천 플레이트의 표면에 연질 한천을 붓고 플레이트를 소용돌이치게 하여 고체 한천 표면에 연질 한천을 고르게 분배합니다. 실온에서 하룻밤 배양한 후 각 플레이트의 플랫폼 장치를 수동으로 열거합니다. 전체 크기의 PPE 또는 의류에서 바이러스 소독의 세탁 효과를 평가하기 위한 체계적인 실험실 테스트에 따르면 플랫폼 장치 또는 PFU 플레이트 수와 추출된 샘플 부피를 통해 테스트 쿠폰당 플랫폼 장치 수를 계산할 수 있었습니다.
대표적인 바이러스 회수의 결과는 얼굴 가리개 테스트를 위해 얻어졌다. 세탁 테스트는 의류 품목의 신축 또는 수축과 같은 재료 특성 및 프로토콜의 품질 관리 데이터에 대한 정보를 제공했습니다. Phi6의 얼굴 가리개, 데님 및 스크럽 PPE 재료를 소독할 때 온수 세탁의 효능이 별이 전체 소독을 나타내는 이 그래프에서 입증되었습니다.
교차 오염을 방지하기 위해이 절차 전반에 걸쳐 무균 기술을 사용하는 것이 중요합니다. 또한 쿠폰의 접종 건조 시간은 각 재료마다 고유하며 테스트 전에 설정됩니다. 다른 보완 방법으로는 재료 분해를 탐색하기 위한 현미경 및 액체 침투 테스트 또는 장벽 보호가 착용자에게 여전히 맞는지 확인하는 추가 크기 평가가 있습니다.
이 기술은 본격적인 의류 및 PPE 품목에 대한 세탁 효능 및 재료 테스트를 확대 할 수있는 기반을 제공했습니다. 또한 다른 전염 사건이나 전염병 동안 효과적인 세탁 절차를 수립하는 데 도움이 될 수 있습니다.
