このプロトコルは、温水洗浄の消毒効果をテストします。これは、洗濯機と乾燥機がウイルスで汚染された衣類の洗浄に適しているかどうかを評価するのに役立ちます。このロンダリング技術の主な利点は、品質保証プロセスを経た手順を使用して、他のラボで小規模に複製できることです。
手順を実演するのは、微生物学者のアーメド・アブデル・ハディ、研究科学者のマリエラ・モンジュとジョナサン・ソーヤー、および私たちの研究室の他の人々です。はじめに、本文に記載されているように脱イオン水中で成分を計量して混合することにより、改質トリプシン大豆寒天を調製します。次に、1ミリリットルの希釈されていない濃縮Phi6アリコートを軟寒天培地に加え、100マイクロリットルの対数相シュードモナス・シリンガエ培養液を加えます。
次に、直径100ミリの固化した変性トリプシン大豆寒天プレートの表面に軟寒天を注ぐ。プレートを穏やかに回転させ、柔らかい寒天を固体寒天表面に均等に分配することにより、気泡やこぼれを防ぎます。室温で一晩インキュベートした後、滅菌セルスプレッダーで3枚のプレートの内容物を、15ミリリットルのSMバッファーを含む滅菌50ミリリットルのクロニクルチューブに静かにこすり落とします。
チューブを最大設定で 1 〜 2 分間ボルテックスして寒天を破り、7 、 000 回 G で 15 分間遠心分離し、上清を収集し、0.2 ミクロンのシリンジフィルターでろ過します。ろ過した上清を、さらに使用するまで、摂氏80度のクライオバイアルに1ミリリットルのアリコートとして保管します。さまざまな場所で、洗っていない個人用保護具またはPPEアイテムの長さと幅を測定および記録することにより、テスト前の視覚的評価を実行します。
接種は、1X PBSの総量10ミリリットルに牛肉エキス1グラムを溶解して10%牛肉エキス溶液を調製します。フィルターは、0.2ミクロンのシリンジフィルターを使用して溶液の全量を滅菌します。次に、バイオ安全キャビネット内で、10マイクロリットルの溶液を複数の液滴としてPPEアイテムにピペッティングし、ピペットの先端を使用して液滴を広げることにより、サンプルあたり約10〜7番目のプラーク形成単位をテストおよびポジティブコントロールクーポンに接種します。
ホットプレートと攪拌子を使用して、洗濯液を摂氏50度に温めます。次に、洗濯液のpHと温度を測定および記録し、無菌チェックのために10ミリリットルの溶液を収集します。次に、3.25リットルの洗濯液を滅菌洗浄機に注ぎます。
PPEアイテム、接種されたフェイスカバー1枚、およびクーポンなしの汚染されていないフィルムマスク4枚を洗濯機に入れます。PPEアイテムを18分間洗浄した後、洗濯機を排水し、毎回5リットルの室温の水道水で三度すすぎ、泡を取り除きます。3.25リットルの室温滅菌水道水を洗濯機に加え、9分間のすすぎサイクルを実行します。
次に、PPEアイテムをワッシャースピン側に移動して5分間回転させます。PPEアイテムを乾燥機で摂氏80度の高熱設定で93分間乾燥させます。次に、PPEアイテムを乾燥機から滅菌ワークスペースに移動します。
接種したアイテムからクーポンを無菌的に取り出し、円錐形のチューブに入れます。次に、装置の最大設定で2分間ボルテックスすることにより、10ミリリットルの10%Dey-Engley中和ブロスにクーポンを抽出します。従来のソフトトップ寒天オーバーレイ法を使用して抽出物をプレーティングするには、6ミリリットルのソフト寒天と100マイクロリットルの対数相Pシリンガを含むソフト寒天チューブに試験サンプルアリコートを追加します。
次に、固化した変性トリプシン大豆寒天プレートの表面に軟寒天を注ぎ、プレートを旋回させて軟寒天を固体寒天表面に均一に分配する。室温で一晩インキュベートした後、各プレート上のプラットフォームユニットを手動で列挙します。フルサイズのPPEまたは衣類からのウイルス消毒の洗濯効果を評価するための体系的な実験室試験では、プラットホームユニットまたはPFUプレート数と抽出されたサンプル量により、テストクーポンあたりのプラットフォームユニットの数を計算できることが示されました。
代表的なウイルス回収の結果を顔面被覆試験について得た。洗濯テストでは、衣料品の伸縮などの材料特性に関する情報と、プロトコルの品質管理データが提供されました。Phi6のフェイスカバー、デニム、スクラブPPE材料の消毒における温水洗浄の有効性は、星が完全な消毒を示すこのグラフで実証されました。
クロスコンタミネーションを防ぐために、この手順全体で無菌技術を使用することが重要です。また、クーポンの接種材料の乾燥時間は材料ごとに異なり、テスト前に設定されます。その他の補完的な方法には、材料の劣化を調査するための顕微鏡検査や液体浸透テスト、またはバリア保護が着用者にフィットすることを確認するためのさらなるサイズ評価が含まれます。
この技術は、本格的な衣料品およびPPEアイテムの洗濯効果と材料テストを拡大するための基礎を提供しました。また、別の伝染イベントやパンデミックの際に効果的なロンダリング手順を確立するのにも役立ちます。
