Floem, organik bileşiklerin uzun mesafelerden translokasyonunu gözlemlemek için doğrudan bitkilerden toplanırken, bitki fidelerinden floem elde etmek zordur. Basit ve etkili bir yöntem olan bölünmüş kök tekniği, PFAA'ların bitkilerde translokasyonunu incelemek için, nispeten kısa süreli maruz kalma sırasında tanıtıldı. Bu yöntem aynı zamanda bitkilerdeki farklı bileşiklerin uzun mesafeli taşınmasını da açıklayabilir.
Hedef PFAA'ların verilen konsantrasyonu, gerçek ortamdaki konsantrasyonlarından nispeten daha yüksek olmalı ve buğdaydaki hedef PFAA'ların çivisiz çözeltide izlenmesini sağlamalıdır. Benzer büyüklükteki Triticum aestivum veya buğday tohumlarını seçerek başlayın ve% 8'lik bir hidrojen peroksit çözeltisi ile 15 dakika boyunca dezenfekte edin. Dezenfekte edilmiş tohumları deiyonize suyla iyice durulayın.
Tohumları nemli filtre kağıdına çimlenme için 5 gün boyunca oda sıcaklığında karanlıkta yerleştirin. Düzgün büyüklükte yaklaşık 9 çimlenmiş fide seçin ve bunları 250 mililitre Hoagland çözeltisinin 1/4 mukavemetine sahip plastik beherlere aktarın. İşlemden önce, fideleri 7 gün boyunca büyüme odalarında 22 santigrat derecede 14 saat ve 27 santigrat derecede 10 saatlik bir döngü ile yetiştirin.
Fide yetiştiriciliği için, her biri Hoagland çözeltisinin 50 mililitre 1/4 mukavemetini içeren 2 santrifüj tüpü, A ve B hazırlayın. Ticari perflorooktan asidi veya PFOA'yı ve perflorooktansülfonik asidi veya PFOS'u metanol içinde çözün ve stok çözeltisi olarak steril besin çözeltisi ile seyreltin, ardından stok çözeltisini litre PFOA ve PFOS başına 100 mikrogramda B tüpüne ekleyin. Daha sonra, bir buğday fidesinin tüm köklerini, kökleri aynı sürgüne bağlı cımbız kullanarak 2 eşit parçaya ayırın, ardından sırasıyla A ve B tüplerine yerleştirin.
2 tüpü, 22 santigrat derecede 14 saatlik bir döngü ve 27 santigrat derecede 10 saatlik bir döngü ile 7 gün boyunca bir inkübatörde kültüre almadan önce alüminyum folyo ile kapatın. 7 gün sonra, buğday fidelerini toplayın ve çivisiz çözelti içinde perfloroakil asitlerin çivili çözeltisinde veya PFAA'larda kültürlenmiş sürgünler ve kökler gibi makas kullanarak 3 parçaya ayırın. Bitki örneklerini 48 saat boyunca eksi 55 santigrat derecede bir liyofilizatörde dondurarak kurutun.
2 gün sonra homojenize edin. Kökü tartın ve numuneleri çekin. Çivili ve çivisiz çözelti örneklerini toplayın.
15 mililitrelik bir polipropilen tüpte, 2 mililitre sodyum karbonat tamponu, 1 mililitre tetrabütilamonyum hidrojen sülfat, 5 mililitre metil tert-bütil eter ve homojenize edilmiş kök veya sürgün ekleyin. Tamamlandığında, süpernatant organik fazı elde etmek için oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 2000 g'da santrifüjlemeden önce tüpü 20 dakika boyunca 250 RPM'de çalkalayın. İkinci ekstraksiyondan sonra, benzer işlem ekstraktlarını bir araya getirin ve yumuşak bir azot akışında kuruluğa buharlaştırın, daha sonra 5 mililitre metanol ile yeniden oluşturun ve yaklaşık 30 saniye boyunca aynı hızı koruyarak vorteksleyin.
PestiCarb kartuşunu metanol içinde 5 mililitre% 0.1 amonyum hidroksit, 5 mililitre su ve 5 mililitre metanol ile şartlandırın. Pigmenti çıkarmak için PestiCarb kartuşundan 5 mililitre ekstraksiyon metanol çözeltisi ekleyin. Kartuşu 5 mililitre metanol ile etkisiz hale getirin ve numune tüplerinde toplayın.
Toplanan 10 mililitre metanol çözeltisini kuruluğa buharlaştırın ve vorteksten önce 200 mikrolitre metanol ile yeniden oluşturun, ardından numuneyi oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 10.000 g'da santrifüj edin. Polar olarak geliştirilmiş polimer ekstraksiyon kartuşunu etkinleştirmek için 5 mililitre metanol ve 5 mililitre su ile şartlandırın. Kartuştan 1 mililitre çivili çözelti veya 50 mililitre çivili çözelti numunesi ekleyin.
Hedef PFAA'lardan 10 mililitre metanol ile kaçın. Ekstraktı yumuşak bir azot akışı ile buharlaştırın ve daha sonra buharlaştırılmış ekstraktı analiz için 200 mikrolitre metanol ile yeniden oluşturun. Bölünmüş kök deneyi, PFAA'ların buğdaydaki uzun mesafeli taşınmasını araştırdı.
PFOA ve PFOS'un buğday kökü tarafından çivili çözeltide sırasıyla gram başına 11.94 nanogram ve gram kuru ağırlık başına 30.67 nanogram konsantrasyonda alındığı ve gram kuru ağırlık başına 5.01 nanogram ve gram kuru ağırlık başına 4.17 nanogram konsantrasyonu ile sürgünlere aktarıldığı gözlenmiştir. PFOA ve PFOS'un, çivisiz çözeltide kültürlenmiş buğday köklerinde sırasıyla gram başına 0.26 nanogram ve gram kuru ağırlık başına 0.64 nanogram konsantrasyonunda tespit edildiği bulunmuştur. PFOA ve PFOS'un floem boyunca sürgünden köke uzun mesafeli taşıma yaşayabileceğini öne sürdü.
PFOA ve PFOS'un, litre başına sırasıyla 17.8 nanogram ve litre başına 28.5 nanogram konsantrasyonuna sahip çivisiz besin çözeltisinde de bulunduğu, PFOA ve PFOS'un kök Casparian şeridinden geçebileceğini düşündürdüğü belirtildi. B tüpündeki çivili çözeltinin, A tüpündeki çivisiz çözeltiyi kirletmemesini sağlamak için önlem alınmalıdır.Bu yöntemin görsel gösterimi, PFAA'ların buğdaydaki uzun mesafeli taşınmasını ifşa etmek için basit bir işlem sağlayabilir.
