Bu nedenle, uterus ve yumurtalık hormonal etkilerinin gebelik kuruluşu üzerindeki rolünü ayırmak zordur, çünkü her ikisi de yakından bağlantılıdır. Yani bu protokol uterus katkılarını doğrudan incelememizi sağlar. Ovariektomi gibi bu tekniklerin bazıları oldukça invaziv olsa da, uygulama ve eğitimden sonra gerçekleştirilmesi nispeten basittir, bu da onları fare modellerinde yeni olan araştırmacılar için uygun hale getirir.
Bu nedenle, bu yöntem, HPG ekseninin daha geniş düzenlemesini anlamak için kullanılabilir, çünkü hem yumurtalıklar hem de uterus bu eksenin düzenlenmesinde önemli bir rol oynar. Bu teknikleri daha önce hiç uygulamadıysanız, eğitim ve destek için enstitünüzün veteriner ekibine danışın. Başlamak için, anestezi altındaki küçük bir alanı tıraş ettikten sonra gözün üzerine hafifçe sürerek anestezi altındaki bir fareye cömertçe göz kayganlaştırıcı uygulayın.
0.1 mililitre karprofeni deri altından boynun tırnağına enjekte edin. Hayvanın anestezi uygulanıp uygulanmadığını arka ayak parmağını sıkıştırarak ve bir refleks olup olmadığını kontrol ederek test edin. Ardından, Betadine'i cerrahi bölgeye uygulayın.
Sonra cerrahi bir örtü ile örtün. Sıçan dişli forseps kullanarak, kamburdaki cildi yukarı doğru çekin ve beş milimetre uzunlamasına bir kesi yapın. Daha sonra, künt forseps kullanarak, cildi altta yatan kas tabakasından bir tarafa doğru böbreğe doğru disseke edin.
Böbrek, yumurtalık ve yumurtalık yağ yastığını kas duvarından tanımlayın. Forseps ile kas tabakasını tutun ve kaldırın. Daha sonra, makas kullanarak, 0.5 ila bir santimetre uzunluğunda bir kesi yapın ve yumurtalık pedini bir çift künt forseps ile insizyondan çekin.
Daha sonra, kavisli bir iğne tutucu kullanarak, uterus boynuzunun distal ucundaki yumurtalık ve yumurta kanalının altına kelepçeleyin ve yumurtalığı makasla çıkarın. 30 saniye sonra, kelepçeyi çıkarın ve steril gazlı bezle dablayın. Kas duvarı insizyonunu kapatmak için, forseps kullanarak insizyonun üstünü kaldırın.
Daha sonra ipek dikişler kullanarak kesiyi bir cerrahın düğümü ile bağlayın. Topikal olarak, iğne eki olmayan bir mililitrelik bir şırınga kullanarak birkaç damla bupivakain uygulayın ve fazlalığı steril gazlı bezle temizleyin. Benzer şekilde yumurtalık ameliyatını diğer taraftan da gerçekleştirdikten sonra, cildin iki tarafını birbirine bastırarak ve birkaç yedi milimetrelik cerrahi klips uygulayarak cilt insizyonunu kapatın ve yara şişmesi için yer bırakın.
Gerekli tüm ekipmanı laminer akış veya Sınıf II biyogüvenlik başlığı içindeki bir folyoya yerleştirin ve UV sterilize edin 20 dakika boyunca sterilize edin. Silastik boruyu% 100 desinol içinde yıkayın ve davlumbazın içinde hava kurumasını bekleyin. Kuruduktan sonra, boruyu bir neşter kullanarak bir santimetre uzunluğunda parçalara ayırın.
Daha sonra, yaklaşık 200 mikrolitre sızdırmazlık maddesini pistonsuz bir şırıngaya sıkın. Pistonu değiştirin ve az miktarda sızdırmazlık maddesini dışarı itin. Sızdırmazlık maddesini borunun bir ucuna uygulayın, eldivenli bir parmağınızla düzeltin.
Sızdırmazlık maddesinin gece boyunca veya UV ışığı altında davlumbazda 30 dakika kurumasını bekleyin. Daha sonra, progesteron tozunu sterilize edilmiş bir Petri kabına dökün. Forseps yardımıyla tozu peletlere koyun.
Tozu yoğunlaştırmak için peletin kapalı ucunu davlumbaz yüzeyinden aşağı doğru dokunun. Daha sonra açık ucu sızdırmazlık maddesi ile kapatın. Peletleri içeren Petri kabını ışıktan korumak için folyoya sarın.
Subkutan yerleştirmeden yaklaşık 72 saat önce, peletleri kömürden arındırılmış FCS'de inkübe ederek aktive edin. Bu prosedürü gösteren, Hudson Tıbbi Araştırma Enstitüsü'nden erken kariyer araştırma bilimcisi Dr. Fiona Cousins olacaktır. Hayvanları deri altı östradiol enjeksiyonları ile hormon astarladıktan sonra, hayvanları yapay desidualizasyondan iki gün önce deri altı progesteron peletleri ile hazırlayın.
Ameliyattan önce fareyi uyuşturun ve ayak parmağı sıkışma refleksini kontrol ederek anestezinin derinliğini test edin. Ardından fareyi eğilimli bir konuma getirin, kuyruğunu kaldırın ve yavaşça vajinasına altı milimetrelik bir spekulum yerleştirin. Farenin alt gövdesini baskın olmayan elin ilk iki parmağının arasına yerleştirin.
Ardından, işaret parmağınızı kullanarak, daha iyi vajinal erişilebilirlik sağlamak için kuyruğu yavaşça yukarı doğru itin. 20 mikrolitre susam yağını cerrahi olmayan bir embriyo transfer ucuna aktarın ve ucu vajina ve serviks yoluyla uterus boynuzuna yerleştirin. Yağı yavaşça dışarı atın.
İşiniz bittiğinde, spekulumu vajinadan çıkarın. Bu çalışmada, farelerin% 80'ine başarılı bir ondalıklaştırma yapılırken,% 20'si yapılmamıştır. Bu nedenle, tüm cerrahi ekipmanlarınızı ve çalışma alanlarınızı steril tutmak ve NSAID cihazını rahim ağzından farenin uterus boynuzuna yerleştirirken hastalara sahip olmak önemlidir.
Yapay desidualizasyonu indükledikten sonra, menstrüasyonu taklit etmek ve endometriyal bozulmayı incelemek için progesteron damak çıkarılabilir. Bu yöntemi kullanarak, uterus biyolojisini ve düzenlemesini yumurtalıkların etkisinden bağımsız olarak inceleyebiliriz. Bu, doğurganlık ve genel olarak kadın sağlığı alanında gerçekten heyecan verici.
