したがって、妊娠の確立に対する子宮ホルモンと卵巣ホルモンの影響は密接に関連しているため、両方を分離することは困難です。したがって、このプロトコルにより、子宮の寄与を直接調べることができます。卵巣摘出術のようなこれらの技術のいくつかは非常に侵襲的ですが、練習とトレーニングの後に実行するのが比較的簡単であるため、マウスモデルに不慣れな研究者に適しています。
したがって、この方法は、卵巣と子宮の両方がこの軸の調節に重要な役割を果たすため、HPG軸のより広い調節を理解するために利用できます。これまでにこれらの技術を実行したことがない場合は、研究所の獣医チームに相談してトレーニングとサポートを受けてください。まず、麻酔をかけたマウスに、脊椎の予感の下のへこみの小さな領域を剃った後、目に軽くたたき、目の潤滑剤をたっぷりと塗布します。
0.1ミリリットルのカルプロフェンを首筋に皮下注射します。動物が後ろのつま先をつまんで反射をチェックすることによって麻酔をかけられているかどうかをテストします。次に、ベタジンを手術部位に塗布します。
それから外科用ドレープでそれを覆います。ラットの歯の鉗子を使用して、後感で皮膚を上に引き離し、5ミリメートルの縦方向の切開を行います。次に、鈍い鉗子を使用して、皮膚を下の筋肉層から腎臓に向かって片側まで解剖します。
筋肉壁を通して腎臓、卵巣、卵巣の脂肪パッドを特定します。鉗子で筋肉層をつかんで持ち上げます。次に、はさみを使用して、0.5〜1センチメートルの長さの切開を行い、鈍い鉗子で卵巣パッドを切開部から引っ張ります。
次に、湾曲したニードルホルダーを使用して、卵巣と卵管の下を子宮角の遠位端で固定し、ハサミで卵巣を切除します。30秒後、クランプを取り外し、滅菌ガーゼで軽くたたきます。筋肉壁切開を閉じるには、鉗子を使用して切開の上部を持ち上げます。
次に、絹の縫合糸を使用して外科医の結び目で切開を結びます。針を付けずに1ミリリットルの注射器を使用して数滴のブピバカインを局所的に塗布し、滅菌ガーゼで余分なものを軽くたたきます。反対側でも同様に卵巣摘出術を行った後、皮膚の両側を一緒に押し付け、7ミリメートルの手術用クリップを2つ適用して皮膚の切開部を閉じ、創傷の腫れの余地を残します。
必要なすべての機器を層流またはクラスIIバイオセーフティフード内のホイルに置き、20分間UV滅菌します。シラスティックチューブを100%デシノールで洗浄し、フード内で風乾させます。乾いたら、メスを使用してチューブを1センチの長さに切ります。
次に、プランジャーなしで約200マイクロリットルのシーラントをシリンジに絞ります。プランジャーを交換し、少量のシーラントを押し出します。シーラントをチューブの一方の端に塗布し、手袋をはめた指で滑らかにします。
また、シーラントをフード内で一晩またはUV光の下で30分間乾燥させます。次に、プロゲステロン粉末を滅菌したペトリ皿に注ぎます。鉗子の助けを借りてペレットに粉末をすくい取る。
ペレットの密封された端をフード表面に軽くたたいて、粉末を凝縮させます。次に、シーラントで開放端をシールします。ペレットが入っているペトリ皿をホイルで包み、光から保護します。
皮下挿入の約72時間前に、ペレットを木炭で剥ぎ取ったFCSでインキュベートして活性化します。この手順を実演するのは、ハドソン医学研究所の初期のキャリア研究科学者であるフィオナ・カズンズ博士です。皮下エストラジオール注射で動物をホルモンプライミングした後、人工脱落膜化の2日前に皮下プロゲステロンペレットで動物をプライミングします。
手術の前に、マウスに麻酔をかけ、つま先のつまみ反射をチェックして麻酔の深さをテストします。次に、マウスを腹臥位に置き、尾を持ち上げて、6ミリメートルの検鏡を膣にゆっくりと挿入します。利き手でない手の最初の2本の指の間にマウスの下半身を置きます。
次に、人差し指を使用して、尾をゆっくりと上に押して、膣へのアクセスを改善します。20マイクロリットルのゴマ油を非外科的胚移植チップに移し、その先端を膣と子宮頸部を通して子宮角に挿入します。ゆっくりと油を排出します。
完了したら、膣から検鏡を取り除きます。この研究では、マウスの80%が脱落膜化に成功しましたが、20%は成功しませんでした。したがって、すべての手術器具と作業領域を無菌状態に保ち、子宮頸部からマウスの子宮角にNSAIDデバイスを挿入するときは患者がいることが重要です。
人工的な脱落膜化を誘発した後、プロゲステロン口蓋を除去して月経を模倣し、子宮内膜の破壊を研究することができます。この方法を使用すると、卵巣の影響とは無関係に子宮の生物学と調節を研究することができます。これは、一般的に出産と女性の健康の分野で本当にエキサイティングです。
