따라서 자궁과 난소 호르몬이 임신 확립에 미치는 영향의 역할은 밀접하게 연결되어 있기 때문에 분리하기가 어렵습니다. 따라서 이 프로토콜을 통해 자궁 기여도를 직접 검사할 수 있습니다. 난소 절제술과 같은 이러한 기술 중 일부는 매우 침습적이지만 연습 및 훈련 후에 수행하기가 비교적 간단하므로 마우스 모델을 처음 접하는 연구자에게 적합합니다.
따라서 이 방법은 난소와 자궁 모두 이 축의 조절에 중요한 역할을 하기 때문에 HPG 축의 광범위한 조절을 이해하는 데 사용할 수 있습니다. 이전에 이러한 기술을 수행한 적이 없다면 교육 및 지원을 위해 기관의 수의사 팀에 문의하십시오. 시작하려면 척추 직감 아래 움푹 들어간 곳의 작은 부위를 면도한 후 마취된 마우스에 눈 윤활제를 부드럽게 두드려 눈 윤활제를 넉넉히 바릅니다.
0.1 밀리리터의 카르 프로펜을 목덜미에 피하 주사하십시오. 동물의 등 발가락을 꼬집고 반사 신경을 확인하여 동물이 마취되었는지 테스트하십시오. 다음으로 Betadine을 수술 부위에 바릅니다.
그런 다음 수술 용 드레이프로 덮으십시오. 쥐 이빨 집게를 사용하여 직감의 피부를 위쪽으로 당기고 5mm 세로 절개를합니다. 그런 다음 뭉툭한 집게를 사용하여 피부를 밑에 있는 근육층에서 신장 쪽으로 한쪽으로 해부합니다.
근육 벽을 통해 신장, 난소 및 난소 지방 패드를 식별합니다. 집게로 근육층을 잡고 들어 올립니다. 그런 다음 가위를 사용하여 0.5-1 센티미터 길이의 절개를하고 한 쌍의 무딘 집게로 절개 부위를 통해 난소 패드를 당깁니다.
다음으로, 구부러진 바늘 홀더를 사용하여 자궁 뿔의 말단부에서 난소와 난관 아래에 고정하고 가위로 난소를 절제합니다. 30초 후 클램프를 제거하고 멸균 거즈로 두드리십시오. 근육 벽 절개를 닫으려면 집게를 사용하여 절개 부위의 상단을 들어 올리십시오.
그런 다음 실크 봉합사를 사용하여 외과 의사의 매듭으로 절개 부위를 묶습니다. 바늘이 부착되지 않은 1밀리리터 주사기를 사용하여 부피바카인 몇 방울을 국소적으로 바르고 멸균 거즈로 초과분을 두드리십시오. 다른 쪽에서도 유사하게 난소 절제술을 시행한 후 피부의 양쪽을 함께 누르고 7mm 수술 클립 두 개를 적용하여 상처가 부어오를 수 있는 공간을 남겨 피부 절개 부위를 닫습니다.
층류 또는 Class II 생물 안전 후드 내부의 호일에 필요한 모든 장비를 놓고 20분 동안 UV를 살균합니다. 실라스틱 튜브를 100% 데시놀로 세척하고 후드 내부에서 자연 건조시킵니다. 건조되면 메스를 사용하여 튜브를 1cm 길이의 세그먼트로 자릅니다.
다음으로, 약 200 마이크로 리터의 실란트를 플런저없이 주사기에 짜 넣습니다. 플런저를 교체하고 소량의 실런트를 밀어냅니다. 튜브의 한쪽 끝에 실런트를 바르고 장갑을 낀 손가락으로 부드럽게 펴줍니다.
그리고 실런트를 후드에서 밤새 또는 자외선 아래에서 30분 동안 건조시키십시오. 다음으로, 프로게스테론 분말을 멸균 된 페트리 접시에 붓습니다. 집게의 도움으로 분말을 펠릿으로 퍼냅니다.
펠릿의 밀봉된 끝을 후드 표면 아래로 두드려 분말을 응축합니다. 그런 다음 밀봉 제로 열린 끝을 밀봉하십시오. 펠릿이 들어 있는 페트리 접시를 호일로 싸서 빛으로부터 보호합니다.
피하 삽입 약 72시간 전에 펠릿을 숯이 벗겨진 FCS에서 배양하여 활성화합니다. 이 절차를 시연하는 것은 Hudson Institute of Medical Research의 초기 경력 연구 과학자인 Dr.Fiona Cousins가 될 것입니다. 피하 에스트라디올 주사로 동물을 호르몬 프라이밍한 후 인공 탈락 이틀 전에 피하 프로게스테론 펠릿으로 동물을 프라이밍합니다.
수술 전에 마우스를 마취시키고 발가락 핀치 반사를 확인하여 마취 깊이를 테스트합니다. 그런 다음 마우스를 엎드린 자세로 놓고 꼬리를 들어 올리고 천천히 6 밀리미터의 검경을 질에 삽입하십시오. 주로 사용하지 않는 손의 처음 두 손가락 사이에 마우스의 하체를 놓습니다.
그런 다음 집게 손가락을 사용하여 꼬리를 부드럽게 위로 밀어 질에 더 잘 접근할 수 있도록 합니다. 참기름 20마이크로리터를 비수술적 배아 이식 팁에 옮기고 팁을 질과 자궁경부를 통해 자궁 뿔에 삽입합니다. 천천히 기름을 배출하십시오.
완료되면 질에서 검경을 제거하십시오. 이 연구에서 생쥐의 80%는 성공적인 탈락을 겪었지만 20%는 그렇지 않았습니다. 따라서 자궁경부를 통해 마우스의 자궁 뿔에 NSAID 장치를 삽입할 때 모든 수술 장비와 작업 영역을 무균 상태로 유지하고 환자를 두는 것이 중요합니다.
인공 탈락을 유도한 후 프로게스테론 구개를 제거하여 월경을 모방하고 자궁내막 파괴를 연구할 수 있습니다. 이 방법을 사용하여 난소의 영향과 무관하게 자궁 생물학 및 조절을 연구 할 수 있습니다. 이것은 일반적으로 다산과 여성 건강 분야에서 정말 흥미 롭습니다.
