Yazarlar HealthPartners&#39;ın Kurumsal Hayvan Bakım teşekkür ve Bölgeler Hastanesi&#39;nde Komitesi kullanın istiyorum.

1. Uyanık Fare için İntranazal Doz Handling için Acclimation Giriş Fare intranazal doz başlangıcından önce iki-dört hafta süreyle işleme acclimated olmalıdır. Uyanık intranazal ilaç dağıtım maksimum etkinliği için doğru vücut pozisyonu sağlamak yardımcı olarak kullanım için Acclimation önemlidir. Buna ek olarak, doğru bu süreci alışık henüz fareler uygulamadan sonra şiddetli bir anksiyete reaksiyonu olabilir. Fare elliyor hayvanın rahatlık bağlı olarak, sonraki adıma ilerlemeden önce dokuz adımın her biri için 2-3 gün kadar harcamak gerekir. Farenin stres düzeyi ilerlemenin bir ölçüsü olarak kullanılmalıdır. Bu, idrar, dışkı miktarı / frekans fare hareketlerini izleme titreyerek ve ısırma anlamına gelir. Bir fare bir yüksek stres yanıtı varsa, yanıtı azalır kadar sonraki ilerlemeden önce bu adım kalır. Örnek bir alışma schedule Tablo 1 &#39;de görülmektedir. Farelerin Acclimation aşağıdaki kez bir gün adım adım ilerlemesi gerekir. , Alışma hızlandırmak amacıyla, günde bir kereden fazla bu adımları Sahne tavsiye edilmez. <ol><li> Hayvanlar sık ​​sık bu tanıtım adımı sırasında atlamak gibi, fazla bir ayak kafes üst üstte, iki üç dakika boyunca avucunun içinde fare yerleştirin. Fare yandan dışarı sürün ve bir kolunu yukarı, sadece kuyruk tabanı tarafından fare kaldırın ve bir elinde geri yerleştirmek için çalışırsa. </li><li> Üç dakika avucunuzun içinde fare yerleştirin ve yavaşça hayvan hayvan. Hayvan hakkında serbestçe hareket için izin verirken, kuyruk baş yönde fareyi Pet. </li><li> Kulaklar (hafifçe başparmak ve işaret parmağınızı kullanarak boyun arkasındaki deri birlikte pinching) arkasında masaj yaparken üç dakika avucunuzun içinde fare yerleştirin. </li><li> Li / TutTekrar beklemeye tekrarlanmadan önce 30 saniye boyunca kafesin üstünde fareyi kalanını icar, 30 saniye boyunca da boyun ense tarafından fare ft. </li><li> Bölüm 2&#39;de açıklanan intranazal tutuş kullanarak fare tutun, ama (2.4 adıma kadar tamamlayın) hayvan invert yok. 30 sn bir süre için bu gibi hayvan tutun ve üst kafesine geri bırakın. Bir dakikalık dinlenme döneminden sonra ikinci kez tekrarlayın. </li><li> Onun ventral tarafta tavana doğru yukarı bakacak şekilde ters hayvan dahil, Bölüm 2&#39;de açıklandığı gibi intranazal kavrama ile fare tutun. Hayvanın boynuna yere paralel olduğundan emin olun. 30 saniye bu şekilde tutun. Bu bir dakikalık dinlenme döneminden sonra ikinci kez tekrarlayın. Bazı farelerde alışma bu aşamada inversiyon ile ilk kez kullanıldığında, özellikle diğerlerinden daha intranazal kavrama karşı olacaktır. Fare kavrama sıyrılıp ise, üst kafesine ve yeniden kavrama geri fare koymak. Gerekirse yeniden kavrama tekrarlayınAma fare stres düzeyini izlemek ve kafes gerekirse iade. Alışma sürecinde bu noktada yitiriyorum bir rol oynayabilir diğer faktör intranazal teslimat tekniği ile hayvan işleyicileri tecrübesizlik olduğunu. </li><li> Intranazal kavrama ile fare tutun, invert, kısaca her burun üzerinde boş ucu ile bir pipet koyun ve 30 saniye boyunca hayvanların konumda tutun. Bir dakikalık dinlenme süresinden sonra bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Intranazal kavrama ile fare tutun, onu çevirin, ve bölüm 3 (adım 3.7) aracılığıyla açıklandığı gibi intranazal sağ ve sol nare içine salin 6 ul yönetmek. </li><li> Bu ters, intranazal kavrama ile fare tutun ve intranazal 3. bölümde açıklandığı gibi sol ve sağ nare kez, aralarında üst kafesine geri hayvan yerleştirerek içine salin 6 ul yönetmek. </li></ol> 2. Uyanık Fare hareketsiz İntranazal Tutuş <ol><li> Fareyi o yerleştirinn üst kafesine. </li><li> Sizin dominant elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk tarafından fare tutun. Göbek, halka, ve pembemsi parmaklar kullanılarak, hafifçe üst kafesine (Şekil 1A) için vücudun alt kısmına tutturmak. Eğer hafifçe fare germek ve daha berduş kapmak gibi fare çubuklar üzerine kapmak edelim. </li><li> Sizin dominant olmayan taraftan başparmak ve orta parmak kullanarak, boyun ve omuz arkasında berduş (aşırı cilt) sıkıca fare çimdik. Omuz bıçakları (Şekil 1B) boyunca deri bir çadır yapmak için gevşek cilt üzerinde yukarı çekin. Mümkün olduğunca fazla cilt olarak götürün, ama bu fare rahatsızlığa neden olur gibi kas yukarı çekmek için dikkatli olun. Dikkatli olun, böylece hayvanın göğüs kafesi ve omurga çok fazla baskı uygulamak değildir. Cildin aşırı basınç ve çekme bazı durumlarda solunum inhibisyonu yol açabilir. </li><li> Çabuk olarak fare başınızın üzerine baskın olmayan elin parmağı yerleştirinmümkün olduğunca burun yakın ve deri (Şekil 1C, 1D) geri çekin. Aynı zamanda, en uygun pozisyon için baş doğru başparmak ve orta parmak slayt. İdeal olarak, fareyi dikey veya yatay başını taşımak mümkün olmamalıdır. </li><li> Ense üzerindeki tutuş korurken, sırtüstü fare çevirin. Farenin geri avucunuzun içinde olmalıdır. Sıkıca fare stabilize etmek için son iki parmak (yüzük ve serçe) ile palmiye karşı fare kuyruğu (baz istasyonunun yakınında) tutun, ya da alt vücut (Şekil 1E, 1F) genelinde parmaklarınızı sarılabilir. </li><li> Bu noktada fare boyun ve çene düz ve yere paralel olduğundan emin olun. Çene boyun mümkün olduğu kadar intranazal teslim yardımcı olmak için olan bir 180 derecelik bir açı ile yakın olması gerekir. Açıda hafif değişiklikler yanlış sitedeki sonuna kadar ilaç neden olabilir. Fare karın izleyerek nefes mümkün olduğundan emin olun. Fare Should hareket edebilmek, ancak herhangi bir ağrı ve rahat değil, olmamalı. Eğer bir &quot;V&quot; yapma fare boyun ve çene görürseniz, o zaman yeniden kavrama gerek. </li></ol> 3. Uyanık Fare ile İlaç İntranazal Teslim Giriş Intranazal kavrama kullanarak, her bir fare iki kere bağlanmış ve sıvı 20-30 ul bir hacim uygulanır iken zemine paralel onların boyun ile yapılır. Bu hacim güvenli ve küçük-büyük fareler için etkili olduğunu, biz genellikle 24 ul kullanın ve bu protokolü açıklanan olduğunu. Uyanık intranazal yöntem gelişim nörolojik araştırma için yeni doğmuş farelerin, örneğin, herhangi bir yaştaki farelerde de kullanılabilir. Yeni doğmuş farelerin, daha küçük bir toplam hacim (8 ul) ve damlacık boyutu (1 ul) burun boşluğu daha küçük hacim yerleştirmek için kullanılır. İlaç genellikle zamanın en verimli şekilde kullanılmasını sağlamak ve o tutmak için dinlenme süreleri, alternatif bir seferde iki fareler teslim edilirn zamanlama. Set-up grubu yerleştirilmiş fareler veya tek başına tutulmuş farelerde dozaj eğer bağlı biraz farklı olacaktır. Tek başına tutulmuş fareler ile, diğer üst kafesine yanına geçmesini fareler önlemek için kafesleri arasında da malzemelerin tüm yerleştirmek yararlı olur. Birlikte sadece kafesinden grup ev sahipliği farelerin, doz. Bu bir grup yer alır kafes içinde her bir fare için, aynı intranazal tedavi aldığı iki farklı tedavilerin kontaminasyon potansiyel olarak hava içine ya da deri teması ile ilaç expelling dolayı mevcut olması önemlidir. Oldukça her hayvanın genel sağlık, vb unutmayın, cevapsız damla herhangi bir not kaydetmek için, tedavi atamaları teknisyenleri hatırlatmak için, bir dozaj levha önceden basılmış olması tavsiye edilir Adımlar <ol><li> Onlar dozaj için olabilir, ve bir dozlama istasyonu (Şekil 2) kurmalıyım kafesleri ayarlayın. </li><li> Kafes fareyi çıkarın ve dozlama sırasında kafesin üstünde tutmak. </li><li> Bölüm 2&#39;de tarif edilen intranazal kavrama kullanılarak fare al. </li><li> Sizin baskın el kullanarak, ilaç ya da araç 6 ul pipet yükleyin. Genellikle 45 derecelik bir açıyla (Şekil 1G, 1H) de farenin sol burun deliği yakınında dolu pipet ucu yerleştirin. Eğer bir viskoz çözelti varsa ilaç yerine bir damla yapma pipet yan çalıştırabilirsiniz çünkü 90 derece açınızı artırmanız gerekebilir. Çok yapışkan, sıvı kovma önce bir doku ile pipet silerek yardımcı olabilir. Yavaş yavaş hacminin yaklaşık yarısına (3 ul) ile küçük bir damlacık oluşturmak üzere ilaç veya çıkarın. </li><li> Fare damlacık teneffüs böylece damlacık yeterince yakın fare burun deliğine konulmalıdır. Fare bu küçük bir damla soluduğu hemen sonra, daha sonra yaklaşık 2-3 saniye aynı burun deliğinden teneffüs etmek için fare için başka bir küçük damlacık oluşturmak üzere pipet ucu içinde ilaç geri kalan çıkarır. Ağzına izlemek emin olun. Eğer orada is ağız içinde herhangi bir sıvı, damla burun içine tam olarak yapmak değildi ve bu not edilmelidir. </li><li> 15 saniye bu pozisyonda fare tutun. Oldukça bir zamanlayıcı Bu 15 saniye beklemeye standardize etmek için kullanılması tavsiye edilir. </li><li> 3.6 sağ burun için - adımları 3.3 tekrarlayın. Herhangi bir damla dışarı homurdandı ise, o damla değiştirilmiş ya da not edilmelidir. </li><li> 2 dakika kafesinden üstüne geri fare yerleştirin. 2 dk başlayarak tüm işlemi tekrarlayın. ilk damla teslim edilmesinden sonra. Bu, fare 6 ul solüsyon için 24 ul, her biri toplam dört damla verir. Bir kerede bir tane ya da iki fare dozlama için örnek bir zamanlama Tablo 2&#39;de görülebilir. </li><li> Fare tüm damlaları aldıktan sonra, onun kafes için fareyi dönün. </li></ol> 4. Uyanık Fare için Acclimation ve İlaç İntranazal Teslimat için Genel Hayvan Taşıma Teknikleri Her alışma veya intranazal dozlama seansından sonra, fareler vermek olmalıdırna gibi pozitif takviye olarak Cheerio veya soyulmuş ayçiçeği tohumu gibi davranın. İkramlar bir ödül ve potansiyel kendilerini yaralanmaya neden burunlarını çizilmemesi onları rahatsız etmek olarak verilmiştir. Grup ev fare ile çalışırken, yeterince davranır her fare için düştü olmalıdır. Onların kafeslere hayvanları dönmeden önce stresi azaltmak için orijinal ülkelerine yuvalar geri emin olun. Grup ev hayvanları dozlama sırasında, eldiven birbirlerine karşı saldırgan olacak gibi kafes dozaj böylece, kafes koloniden kafesi koloni kokusu aktarmak değil arasında değiştirilmelidir.

<ol>
	<li>Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+to+the+central+nervous+system:+mechanisms+and+experimental+considerations.">Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations.</a> J. Pharm Sci. 99, 1654-1673 (2010).</li><li>Thorne, R. G., Pronk, G. J., Padmanabhan, V., Frey, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+insulin-like+growth+factor-I+to+the+rat+brain+and+spinal+cord+along+olfactory+and+trigeminal+pathways+following+intranasal+administration.">Delivery of insulin-like growth factor-I to the rat brain and spinal cord along olfactory and trigeminal pathways following intranasal administration.</a> Neuroscience. , 127-481 (2004).</li><li>Benedict, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+insulin+as+a+therapeutic+option+in+the+treatment+of+cognitive+impairments.">Intranasal insulin as a therapeutic option in the treatment of cognitive impairments.</a> Exp. Gerontol. 46, 112-115 (2011).</li><li>Francis, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+insulin+prevents+cognitive+decline,+cerebral+atrophy+and+white+matter+changes+in+murine+type+I+diabetic+encephalopathy.">Intranasal insulin prevents cognitive decline, cerebral atrophy and white matter changes in murine type I diabetic encephalopathy.</a> Brain. 131, 3311-3334 (2008).</li><li>Francis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+insulin+ameliorates+experimental+diabetic+neuropathy.">Intranasal insulin ameliorates experimental diabetic neuropathy.</a> Diabetes. 58, 934-945 (2009).</li><li>Marks, D. R., Tucker, K., Cavallin, M. A., Mast, T. G., Fadool, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Awake+intranasal+insulin+delivery+modifies+protein+complexes+and+alters+memory,+anxiety,+and+olfactory+behaviors.">Awake intranasal insulin delivery modifies protein complexes and alters memory, anxiety, and olfactory behaviors.</a> J. Neurosci. 29, 6734-6751 (2009).</li><li>Hanson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+of+deferoxamine+reduces+spatial+memory+loss+in+APP/PS1+mice.">Intranasal delivery of deferoxamine reduces spatial memory loss in APP/PS1 mice.</a> Drug Delivery and Translational Research. 2, 160-168 (2012).</li><li>Danielyan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+intranasal+losartan+in+the+APP/PS1+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer+disease.">Protective effects of intranasal losartan in the APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer disease.</a> Rejuvenation Research. 13, 195-201 (2010).</li><li>Fine, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+deferoxamine+improves+performance+in+radial+arm+water+maze,+stabilizes+HIF-1alpha,+and+phosphorylates+GSK3beta+in+P301L+tau+transgenic+mice.">Intranasal deferoxamine improves performance in radial arm water maze, stabilizes HIF-1alpha, and phosphorylates GSK3beta in P301L tau transgenic mice.</a> Exp. Brain Res. 219, 381-390 (2012).</li><li>Lochhead, J. J., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+of+biologics+to+the+central+nervous+system.">Intranasal delivery of biologics to the central nervous system.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 64 (11), 614-628 (2012).</li><li>Hanson, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+deferoxamine+provides+increased+brain+exposure+and+significant+protection+in+rat+ischemic+stroke.">Intranasal deferoxamine provides increased brain exposure and significant protection in rat ischemic stroke.</a> J. Pharmacol. Exp Ther. 330, 679-686 (2009).</li><li>Reger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+intranasal+insulin+on+cognition+in+memory-impaired+older+adults:+modulation+by+APOE+genotype.">Effects of intranasal insulin on cognition in memory-impaired older adults: modulation by APOE genotype.</a> Neurobiol. Aging. 27, 451-458 (2006).</li><li>Kim, C. H., Song, H. y. u. n., M, E. u. n. A. h. n., Lee, Y., G, J., Yoon, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hypo-,+iso-+and+hypertonic+saline+irrigation+on+secretory+mucins+and+morphology+of+cultured+human+nasal+epithelial+cells.">Effect of hypo-, iso- and hypertonic saline irrigation on secretory mucins and morphology of cultured human nasal epithelial cells.</a> Acta Otolaryngol. 125, 1296-1300 (2005).</li><li>Greiff, L., Andersson, M., Wollmer, P., Persson, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+increases+secretory+and+exudative+responsiveness+of+human+nasal+airway+in+vivo.">Hypertonic saline increases secretory and exudative responsiveness of human nasal airway in vivo.</a> Eur. Respir. J. 21, 308-312 (2003).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu yöntem, fareler anestezi verilmeden beyin hedeflemek için burun içi ilaç düzenli dozlarda verilebilir gösterir. İntranazal ilaç az çaba ile uzun süre için farelerin büyük gruplara teslim edilebilir. 20 fareler kadar tek bir grup intranazal az bir saat içinde tek bir kişi tarafından tedavi edilebilir. Küçük demir şelatlar gelen mezenkimal kök hücreleri büyüme faktörleri kadar moleküllerin geniş bir dizi, hızlı MSS hedef gösterilmiş ve kemirgenler modellerinde etkinliğini göstermiştir....

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Materials</td>
 <td>Company</td>
 <td>Cat #</td>
 <td>Comment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>P20 pipettor set at 6 &mu;l</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gel loading pipette tips</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Timer</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Waste receptacle for tips</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dosing sheet for notes</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pen</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Drug and vehicle</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Container to hold drug vials</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Animals to be dosed</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spare gloves</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Paper towels to wipe urine</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Table 3. Materials Needed</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

intranasal administration of cns therapeutics to awake mice

İntranazal uygulama merkezi sinir sistemi (CNS) terapötik maddeler sunma yöntemidir. Bu non-invaziv ve MSS kan-beyin bariyerini erişim geçmez büyük moleküller sağlar. İlaçlar doğrudan sistemik maruziyet ve böylece istenmeyen sistemik yan etkiler 1 azaltarak, intranazal teslimat ile MSS hedeflenir. Burun MSS Teslim ekstraselüler yolla koku ve trigeminal sinir yolları hem birlikte birkaç dakika içinde ortaya çıkar ve herhangi bir reseptör veya aksonal transport 2 bağlamak için ilaç gerektirmez. İntranazal teslim yaygın olarak bilinen adıyla bir yöntem olup şu anda insan klinik denemeleri 3 kullanılmaktadır. Hayvan modellerinde ilaç teslim intranazal farmakokinetik dağıtım ve etkinliği ilk değerlendirilmesi yapılır. Fareler ile, bir specia kullanarak düzenli bir şekilde uyanık (non-anestezi) hayvanlara karşı ilaçların verilmesi mümkün olmaklaintranazal kavrama lized. Anestezi gerektirmeden uzun süreli kronik dozlama için izin verir, çünkü Awake teslimat faydalıdır, anestezi ile daha az zaman alır, ve birçok insan tarafından öğrenilen ve yapılabilir, böylece kısa sürede farelerin teknisyen ekipleri can dozu büyük sayılar. Fareler için, bu şekilde burun içinden uygulanan terapötik etkinliği, diyabetik fare modelleri Alzheimer fare modellerinde 4-6 ve deferoksamin insülin içeren bir dizi çalışma içinde olduğu gösterilmiştir. 7,8 Fareler için intranazal kavrama öğrendim, ama kolay değildir ve uygulama, beceri, ve etkili bir beyne ilaç teslim ve akciğer ve mide boşalmasını önlemek için kesin bir kavrama gerektirir. Fare ilaç dominant el kullanarak bir pipet ile teslim ederken, yere paralel düzenlenen boyunlu non-dominant elden değiştirilmiş bir berduş kullanarak el ile sınırlanmıştır. Genellikle farelerin önce işleme için acclimating 3-4 hafta sürerbir stres yanıtı olmadan bu tutuş ile tutulabilir. Biz bu intranazal teslimat tekniği daha erişilebilir hale getirmek için bu Jüpiter Video hazırladık.

Ilaç dağıtım etkinliğini belirlemek için çeşitli yollar vardır. İlk intranazal tür çini mürekkebi veya metilen mavisi gibi bir boya, yönetmek ve olfaktör epitel içindeki hayvan ötenazi sonra ve sonra beyinde kribriform plate yoluyla MSS girerek kaldırılır boya görselleştirmek için. İkinci bir radyo-etiketli etiketini kullanarak veya etiketsiz molekülün ELISA algılama kullanarak ya teslim ilaç ölçmektir. Uyanık farelerde tatbikattan sonra, merkezi sinir sistemi içinde ilaç dağıtım iyi ...

Watch this Scientific Journal Video about Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice at JoVE.com

Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice

Intranazal beyin hedefleme amacıyla uyanık farelerde için ilaç uygulamak için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, uzun anestezi olmadan ilacın intranazal uygulama kullanarak dönemleri, ve minimal sistemik maruz kalma ile burun-için-beyin teslimi üzerinde dozaj tekrar sağlar.

Uyanık Fare CNS Therapeutics İntranazal İdaresi

Intranasal administration is a method of delivering  therapeutic agents to the central nervous system (CNS). It is  non-invasive and allows large ...

intranasal-administration-of-cns-therapeutics-to-awake-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

58.1K Görüntüleme.  HealthPartners Institute for Education and Research. Intranazal beyin hedefleme amacıyla uyanık farelerde için ilaç uygulamak için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, uzun anestezi olmadan ilacın intranazal uygulama kullanarak dönemleri, ve minimal sistemik maruz kalma ile burun-için-beyin teslimi üzerinde dozaj tekrar sağlar.

Video: Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain barrier1. The barrier selectively excludes molecules from crossing between the blood and the brain based upon their size and charge. This function can impede the delivery of therapeutics for neurological disorders. A number of chemotherapeutic drugs, for example, will not effectively cross the blood-brain barrier to reach tumor cells2. Thus, improving the delivery of drugs across the blood-brain barrier is an area of interest.
The most prevalent methods for enhancing the delivery of drugs to the brain are direct cerebral infusion and blood-brain barrier disruption3. Direct intracerebral infusion guarantees that therapies reach the brain; however, this method has a limited ability to disperse the drug4. Blood-brain barrier disruption (BBBD) allows drugs to flow directly from the circulatory system into the brain and thus more effectively reach dispersed tumor cells. Three methods of barrier disruption include osmotic barrier disruption, pharmacological barrier disruption, and focused ultrasound with microbubbles. Osmotic disruption, pioneered by Neuwelt, uses a hypertonic solution of 25% mannitol that dehydrates the cells of the blood-brain barrier causing them to shrink and disrupt their tight junctions. Barrier disruption can also be accomplished pharmacologically with vasoactive compounds such as histamine5 and bradykinin6. This method, however, is selective primarily for the brain-tumor barrier7. Additionally, RMP-7, an analog of the peptide bradykinin, was found to be inferior when compared head-to-head with osmotic BBBD with 25% mannitol8. Another method, focused ultrasound (FUS) in conjunction with microbubble ultrasound contrast agents, has also been shown to reversibly open the blood-brain barrier9. In comparison to FUS, though, 25% mannitol has a longer history of safety in human patients that makes it a proven tool for translational research10-12.
In order to accomplish BBBD, mannitol must be delivered at a high rate directly into the brain's arterial circulation. In humans, an endovascular catheter is guided to the brain where rapid, direct flow can be accomplished. This protocol models human BBBD as closely as possible. Following a cut-down to the bifurcation of the common carotid artery, a catheter is inserted retrograde into the ECA and used to deliver mannitol directly into the internal carotid artery (ICA) circulation. Propofol and N2O anesthesia are used for their ability to maximize the effectiveness of barrier disruption13. If executed properly, this procedure has the ability to safely, effectively, and reversibly open the blood-brain barrier and improve the delivery of drugs that do not ordinarily reach the brain 8,13,14.

Blood-brain barrier disruption aids the delivery of certain drugs to the brain. Mannitol delivered intra-arterially shrinks cells surrounding blood vessels in order to physically disrupt the barrier.

Kan-beyin bariyer bozulması arasında Rat Modeli Nörovasküler Therapeutics Hedefli izin ver için

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

Tıp

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

Rat Karotis Balon Yaralanma Modeli Anti-vasküler Tadilat Therapeutics Test

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Through the Looking Glass: Time-lapse Microscopy and Longitudinal Tracking of Single Cells to Study Anti-cancer Therapeutics

The response of single cells to anti-cancer drugs contributes significantly in determining the population response, and therefore is a major contributing factor in the overall outcome. Immunoblotting, flow cytometry and fixed cell experiments are often used to study how cells respond to anti-cancer drugs. These methods are important, but they have several shortcomings. Variability in drug responses between cancer and normal cells, and between cells of different cancer origin, and transient and rare responses are difficult to understand using population averaging assays and without being able to directly track and analyze them longitudinally. The microscope is particularly well suited to image live cells. Advancements in technology enable us to routinely image cells at a resolution that enables not only cell tracking, but also the observation of a variety of cellular responses. We describe an approach in detail that allows for the continuous time-lapse imaging of cells during the drug response for essentially as long as desired, typically up to 96 hr. Using variations of the approach, cells can be monitored for weeks. With the employment of genetically encoded fluorescent biosensors numerous processes, pathways and responses can be followed. We show examples that include tracking and quantification of cell growth and cell cycle progression, chromosome dynamics, DNA damage, and cell death. We also discuss variations of the technique and its flexibility, and highlight some common pitfalls.

Here, we describe a method of long-term time-lapse microscopy to longitudinally track single cells in response to anti-cancer therapeutics.

Looking Glass sayesinde: Time-lapse Mikroskopi ve Tek Hücre Boyuna izleme Anti-kanser Therapeutics Eğitim için

The response of single cells to anti-cancer drugs contributes significantly in determining the population response, and therefore is a major contributing ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular plasticity or damage occurring overtime and in relation to neuronal activity or blood flow. In vivo two-photon microscopy allows the study of the structural and functional plasticity of large cellular units in the living brain. In particular, the thinned-skull window preparation allows the visualization of cortical regions of interest (ROI) without inducing significant brain inflammation. Repetitive imaging sessions of cortical ROI are feasible, providing the characterization of disease hallmarks over time during the progression of numerous CNS diseases. This technique accessing the pial structures within 250 &#956;m of the brain relies on the detection of fluorescent probes encoded by genetic cellular markers and/or vital dyes. The latter (e.g., fluorescent dextrans) are used to map the luminal compartment of cerebrovascular structures. Germane to the protocol described herein is the use of an in vivo marker of amyloid deposits, Methoxy-O4, to assess Alzheimer&#39;s disease (AD) progression. We also describe the post-acquisition image processing used to track vascular changes and amyloid depositions. While focusing presently on a model of AD, the described protocol is relevant to other CNS disorders where pathological cerebrovascular changes occur.

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

This manuscript describes a procedure to track the remodeling of the cerebrovasculature during amyloid plaque accumulation in vivo using longitudinal two-photon microscopy. A thinned-skull preparation enables the visualization of fluorescent dyes to assess the progression of cerebrovascular damage in a mouse model of Alzheimer&#39;s disease.

uzunlamasına<em&gt; İn Vivo</em&gt; Cerebrovasculature Görüntüleme: MSS Hastalıkları uygunluk

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of therapeutic stem cells via the intranasal route is a recently discovered alternative strategy, with strong potential for clinical translation, due to its non-invasive nature compared to intracranial implantation or delivery via systemic routes. The lack of blood brain barrier further strengthens the therapeutic potential of stem cells undergoing intranasal brain entry. This article summarizes the essential techniques utilized in our studies and outlines the basic principles of intranasal strategy for stem cell delivery using a mouse model of intracranial glioma xenografts. We demonstrate the optimized procedures that generate consistent and reproducible results with specific predetermined experimental parameters and offer guidelines for streamlined work flow that ensure efficient execution and reliable experimental outcome. The article is designed to serve as a baseline for further experimental customization based on hypothesis, stem cell types, or tumor specifics.

Stem cells are promising therapeutic carriers to treat brain tumors due to their intrinsic tumor tropism. Non-invasive intranasal stem cell delivery bypasses the blood brain barrier and demonstrates strong potential for clinical translation. This article summarizes the basic principles of intranasal stem cell delivery in a mouse model of glioma.

Bir Fare Modelinde Tedavi Edici Kök Hücrelerin Glioblastomaya İntranazal Dağıtımı

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Novel Methods for Intranasal Administration Under Inhalation Anesthesia to Evaluate Nose-to-Brain Drug Delivery

Intranasal administration has been reported to be a potential pathway for nose-to-brain delivery of therapeutic agents that circumvents the blood-brain barrier. However, there have been few reports regarding not only the quantitative analysis but also optimal administration conditions and dosing regimens for investigations of nose-to-brain delivery. The limited progress in research on nose-to-brain pathway mechanisms using rodents represents a significant impediment in terms of designing nose-to-brain delivery systems for candidate drugs.
To gain some headway in this regard, we developed and evaluated two novel methods of stable intranasal administration under inhalation anesthesia for experimental animals. We also describe a method for the evaluation of drug distribution levels in the brain via the nose-to-brain pathway using radio-labeled [14C]-inulin (molecular weight: 5,000) as a model substrate of water-soluble macromolecules.
Initially, we developed a pipette-based intranasal administration protocol using temporarily openable masks, which enabled us to perform reliable administration to animals under stable anesthesia. Using this system, [14C]-inulin could be delivered to the brain with little experimental error.
We subsequently developed an intranasal administration protocol entailing reverse cannulation from the airway side through the esophagus, which was developed to minimize the effects of mucociliary clearance (MC). This technique led to significantly higher levels of [14C]-inulin, which was quantitatively detected in the olfactory bulb, cerebrum, and medulla oblongata, than the pipette method. This appears to be because retention of the drug solution in the nasal cavity was substantially increased by active administration using a syringe pump in a direction opposite to the MC into the nasal cavity.
In conclusion, the two methods of intranasal administration developed in this study can be expected to be extremely useful techniques for evaluating pharmacokinetics in rodents. The reverse cannulation method, in particular, could be useful for evaluating the full potential of nose-to-brain delivery of drug candidates.

Here, we describe two novel methods of stable intranasal administration under inhalation anesthesia with minimal physical stress for experimental animals. We also describe a method for quantitative evaluation of drug distribution levels in the brain via the nose-to-brain pathway using radiolabeled [14C]-inulin as a model substrate of water-soluble macromolecules.

Burun beyin ilaç dağıtım değerlendirmek için inhalasyon anestezi altında burunici yönetim için yeni Yöntemler

Intranasal administration has been reported to be a potential pathway for nose-to-brain delivery of therapeutic agents that circumvents the blood-brain ...

Intratracheal Administration of Dry Powder Formulation in Mice

In the development of inhalable dry powder formulations, it is essential to evaluate their biological activities in preclinical animal models. This paper introduces a noninvasive method of intratracheal delivery of dry powder formulation in mice. A dry powder loading device that consists of a 200 &#181;L gel loading pipette tip connected to an 1 mL syringe via a three-way stopcock is presented. A small amount of dry powder (1-2 mg) is loaded into the pipette tip and dispersed by 0.6 mL of air in the syringe. Because pipette tips are disposable and inexpensive, different dry powder formulations can be loaded into different tips in advance. Various formulations can be evaluated in the same animal experiment without device cleaning and dose refilling, thereby saving time and eliminating the risk of cross-contamination from residual powder. The extent of powder dispersion can be inspected by the amount of powder remaining in the pipette tip. A protocol of intubation in mouse with a custom-made light source and a guiding cannula is included. Proper intubation is one of the key factors that influences the intratracheal delivery of dry powder formulation to the deep lung region of the mouse.

Dry powder formulations for inhalation have great potential in treating respiratory diseases. Before entering human studies, it is necessary to evaluate the efficacy of the dry powder formulation in preclinical studies. A simple and noninvasive method of the administration of dry powder in mice through the intratracheal route is presented.

Farelerde Kuru Toz Formülasyonunun Intratrakial Yönetimi

In the development of inhalable dry powder formulations, it is essential to evaluate their biological activities in preclinical animal models. This paper ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts and complications such as primary graft dysfunction and graft rejection. The recent clinical use of an ex vivo perfusion device in cardiac transplantation introduces a unique opportunity for treating cardiac allografts with therapeutic interventions to improve function and avoid deleterious recipient responses. Establishing a translational, large-animal model for therapeutic delivery to the entire allograft is essential for testing novel therapeutic approaches in cardiac transplantation. The porcine, heterotopic heart transplantation model in the intraabdominal position serves as an excellent model for assessing the effects of novel interventions and the immunopathology of graft rejection. This model additionally offers long-term survival for the pig, given that the graft is not required to maintain the recipient's circulation. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach for achieving ex vivo delivery of a therapeutic to the entire cardiac allograft prior to transplantation and provide technical details to perform a survival heterotopic transplant of the ex vivo perfused heart.

We present a protocol for utilizing a normothermic ex vivo sanguinous perfusion system for the delivery of therapeutics to an entire cardiac allograft in a porcine heterotopic heart transplant model.

Terapötiklerin Kardiyak Allogrefte Verilmesi için Domuz Heterotopik Kalp Transplantasyonu Protokolü

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...