Araştırma amacımız, yetişkin sığır ince ve kalın bağırsak organoidlerinden türetilen temel bağırsak tek katmanlı arayüzleri oluşturmak için sağlam teknikler oluşturmaktır. Kurulan tek tabakalar içinde fonksiyonel epitelyal bariyer oluşumunu doğrulamak için multimodal bir analitik yaklaşım kullandık. Üç boyutlu modellerin aksine, 2D tek katmanlar, konakçı patojen etkileşimlerini incelemek için çok önemli olan açık, erişilebilir bir luminal yüzey sunar.
Birden fazla hücre soyuna sahip in vivo bağırsağı yansıtan bu tek tabakalar, artık ince ve kalın bağırsak nişleri gibi belirli bağırsak bölümlerindeki patojenleri araştırmak için özel protokoller sunmaktadır. Araştırmamız, sığır alışveriş merkezi ve kalın bağırsak organoidlerinin hücrelerinden 2D tek tabakalar oluşturmak ve sürdürmek için optimize edilmiş kültür koşullarını belirledi. Transepitelyal elektriksel kayıt cihazları ve paraselüler geçirgenlik deneylerinin yanı sıra immünositokimya boyama teknikleri kullanarak bu tek tabakalar içinde fonksiyonel epitel bariyeri oluşumunu doğruladık.
Protokolümüz, sığırların bağırsak organoid türevli tek tabakalı modellerinin eksikliğine odaklanarak araştırma boşluğunu ele aldı. Bu modeller farelerde ve insanlarda iyi çalışılmıştır, ancak ciddi halk sağlığı etkileri olan bağırsak patojenleri için ana rezervuarlar olan sığırlar yeterince araştırılmamıştır. Araştırmamız, 2D sığır tek katmanlı bir kültür sistemi kurar ve karakterize eder.
Bu yenilikçi araç, sığır bağırsak fizyolojisinin normal ve hastalık durumlarının araştırılmasına olanak tanır ve potansiyel uygulamalar, halk sağlığı açısından önemli biyomedikal ve translasyonel araştırmalara kadar uzanır.
