Il nostro obiettivo di ricerca è quello di stabilire tecniche robuste per generare interfacce monostrato intestinali di base derivate da organoidi adulti di bovini di intestino tenue e crasso. Abbiamo impiegato un approccio analitico multimodale per confermare la formazione di barriera epiteliale funzionale all'interno dei monostrati stabiliti. A differenza dei modelli tridimensionali, i monostrati 2D offrono una superficie luminale esposta e accessibile, fondamentale per lo studio delle interazioni ospite-patogeno.
Questi monostrati che riflettono l'intestino in vivo con più linee cellulari ora forniscono protocolli su misura per lo studio di agenti patogeni in sezioni intestinali specifiche, come le nicchie intestinali piccole e grandi. La nostra ricerca ha identificato condizioni di coltura ottimizzate per creare e sostenere monostrati 2D da cellule di organoidi bovini mall e intestinali crasso. Abbiamo confermato la formazione di barriera epiteliale funzionale all'interno di questi monostrati utilizzando registranti elettrici transepiteliali e saggi di permeabilità paracellulare, nonché tecniche di colorazione immunocitochimica.
Il nostro protocollo ha affrontato il divario di ricerca concentrandosi sulla mancanza di modelli monostrato di bovini derivati da organoidi intestinali. Questi modelli sono stati ben studiati nei topi e nell'uomo, tuttavia, i bovini, che sono i principali serbatoi di agenti patogeni intestinali con gravi implicazioni per la salute pubblica, non sono stati adeguatamente esplorati. La nostra ricerca stabilisce e caratterizza un sistema di coltura monostrato bovina 2D.
Questo strumento innovativo consente l'esplorazione degli stati normali e patologici della fisiologia intestinale bovina, con potenziali applicazioni che si estendono alla ricerca biomedica e traslazionale di rilevanza per la salute pubblica.
