Nosso objetivo de pesquisa é estabelecer técnicas robustas para gerar interfaces de monocamada intestinal básica derivadas de organoides do intestino delgado e grosso bovinos adultos. Empregamos uma abordagem analítica multimodal para confirmar a formação de barreira epitelial funcional dentro das monocamadas estabelecidas. Ao contrário dos modelos tridimensionais, as monocamadas 2D oferecem uma superfície luminal exposta e acessível, crucial para estudar as interações do patógeno hospedeiro.
Essas monocamadas que refletem o intestino in vivo com várias linhagens celulares agora fornecem protocolos personalizados para investigar patógenos em seções intestinais específicas, como nichos intestinais delgado e grosso. Nossa pesquisa identificou condições de cultura otimizadas para criar e sustentar monocamadas 2D a partir de células de organoides bovinos e do intestino grosso. Confirmamos a formação de barreira epitelial funcional dentro dessas monocamadas usando registrantes elétricos transepiteliais e ensaios de permeabilidade paracelular, bem como técnicas de coloração imunocitoquímica.
Nosso protocolo abordou a lacuna de pesquisa, concentrando-se na falta de modelos de monocamada derivados de organoides intestinais de bovinos. Esses modelos foram bem estudados em camundongos e humanos, no entanto, os bovinos, que são os principais reservatórios de patógenos intestinais com sérias implicações para a saúde pública, não foram adequadamente explorados. Nossa pesquisa estabelece e caracteriza um sistema de cultura de monocamada bovina 2D.
Esta ferramenta inovadora permite a exploração de estados normais e patológicos da fisiologia intestinal bovina, com aplicações potenciais que se estendem à pesquisa biomédica e translacional de importância para a saúde pública.
