私たちの研究目標は、成体のウシの小腸オルガノイドと大腸オルガノイドに由来するステープル腸単層界面を生成するための堅牢な技術を確立することです。私たちは、確立された単分子膜内の機能的な上皮バリア形成を確認するために、マルチモーダル分析アプローチを採用しました。3次元モデルとは異なり、2D単分子膜は、宿主病原体の相互作用を研究するために重要な、露出したアクセス可能な管腔表面を提供します。
これらの単層は、複数の細胞系譜を持つin vivo腸を反映しており、小腸および大腸のニッチなどの特定の腸切片の病原体を調査するためのカスタマイズされたプロトコルを提供します。私たちの研究では、ウシモールの細胞や大腸オルガノイドの細胞から2D単分子膜を作成し維持するための最適化された培養条件を特定しました。これらの単層内での機能的上皮バリアの形成を、経上皮電気登録者と傍細胞透過性アッセイ、および免疫細胞化学染色技術を使用して確認しました。
私たちのプロトコルは、ウシの腸オルガノイド由来単層モデルの欠如に焦点を当てることで、研究のギャップに対処しました。これらのモデルはマウスとヒトで十分に研究されていますが、深刻な公衆衛生への影響を持つ腸内病原体の主要な貯蔵庫であるウシは十分に調査されていません。私たちの研究は、2Dウシ単層培養システムを確立し、特徴付けています。
この革新的なツールにより、ウシの腸生理学の正常状態と疾患状態の調査が可能になり、公衆衛生上重要な生物医学研究やトランスレーショナル研究に応用できる可能性があります。
