通过将标记的拟南芥花粉受体植物侧放开始测定，将阉割的花放在倒置显微镜的载物台上以对柱头进行成像。为了固定被阉割的受体花的位置，使用遮蔽胶带固定茎。从花粉供体植物中取出一朵健康且刚开放的花，并将花粉供体植物置于解剖显微镜下。
使用细尖镊子收集花粉粒。通过将镊子轻轻接触供体花瓣来去除多余的花粉粒，直到形成花粉粒的单层。返回花粉受体植物，使用低倍物镜将倒置显微镜聚焦在柱头上。
沿着镊子臂之间的开口握住镊子，小心地接近和未授粉的柱头细胞。继续接近未授粉的柱头细胞，直到镊子上适当定位的花粉粒与其表面轻接触。确认花粉附着后，慢慢抽出镊子。
将花粉粒定向到可见且清晰聚焦的赤道轴上，并立即切换到更高倍数的物镜，如20倍。将第一个花粉粒图像捕获为T-0，并继续以一分钟的间隔捕获图像，持续10分钟。调整焦点以适应花粉粒或柱头的微小移动。
每两分钟记录一次房间的环境温度和相对湿度，以便将来在实验重复之间进行比较。以无损格式（如ND2）保存图像，然后重复授粉和成像步骤以获取用于控制和实验授粉的数据。使用图像分析软件开始花粉水合测定的数据测量。
使用类似的数字变焦参数和定义数据集中所有测量值的花粉边界的方法。记录数据集中所有时间点的短半轴值。完成数据集的测量后，将每个时间点的原始短半轴值导出到电子表格。
以每个图像堆栈的列形式显示数据，并计算半短轴变化百分比。重复这些步骤并从每个植物系的至少 15 个水合花粉粒中获取数据。一些花粉粒可能无法补水或补水速度明显低于预期。
它们被称为哑弹颗粒。从数据集中排除这些内容。使用专用软件包 GraphPad Prism计算每个工厂每个时间点的平均值。
使用未配对 T 检验和单因子方差分析每个时间点野生型和突变系的水合数据，以比较特定兴趣时间点的均值。若要比较所有时间点的均值，请在多个时间点的野生型和突变线之间执行多个 T 检验。不同日子采集的野生型植物花粉水合时间序列数据显示，所有时间点重复间均值的最小值和最大值均值在3%以内。
