Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Vi erkjenner Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson og Clare Doig for sine bidrag til utviklingen av våre kolonien vedlikehold metoder og tre anonyme vurderinger for deres forslag som bidro til å forbedre manuskriptet. Vår forskning støttes av programmet stipend og fellesskap å AAH fra National Health og Medical Research Council og en oversettelse grant fra Wellcome Trust. PAR er en mottaker av en australsk regjeringen forskning Training Program stipend.

Blod fôring av mygg på mennesker ble godkjent av University of Melbourne menneskelige etikk (godkjenning #: 0723847). Alle frivillige gitt informert skriftlig samtykke.
1. larver oppdrett
Merk: Mygg holdes på 26 ± 0,5 ° C og 50-70% relativ fuktighet, med en 12:12 h (lys: mørk) fotoperiode for denne kolonien vedlikeholdsprotokollen. Disse betingelsene er lik de gjennomsnittlige klimatiske forholdene i Cairns, Australia og med optimal varmeavgivelse for Ae. ae...

Følger protokollen presenteres her for vedlikehold av Wolbachia-infiserte Ae. aegypti sikrer at sunn mygg av en gjennomført kvalitet er produsert for eksperimenter og åpne feltet utgivelser. I motsetning til andre protokoller som prioritere produksjon av masse mengder mygg (se referanse57), er metodene fokusert på å maksimere deres egnethet, både innen generasjoner ved å implementere avslappet oppdrett forhold, og over generasjoner ved å minimere inbreeding, utvalg og lab...

Aegypti Aedes mygg er ansvarlig for overføring av noen av de viktigste arboviruses i verden, inkludert dengue, Zika og chikungunya1. Disse virusene er blitt en økende trussel mot global helse som det alminnelig utbredte distribusjonen av Ae. aegypti i tropene fortsetter å utvide2,3,4. Kvinnelige Ae. aegypti feed fortrinnsvis på menneskelig blod5 og dermed en tendens til å bo i nærheten av mennesker, særlig i urbane områder der befolkningen er mest tett. Gjennom denne nært samarbeid med mennesker har de også tilpasset for å rase i kunstig habitater, inkludert dekk, Potter, takrenner og vann tanker6,7. AE. aegypti tilpasse også lett seg laboratorium miljøer der de kan vedlikeholdes uten noen spesielle krav etter samles direkte fra feltet, i motsetning til noen andre arter i Aedes slekten8, 9,10. Deres enkelt vedlikehold har sett dem mye studert i laboratoriet i et bredt spekter av felt, til slutt satsing å kontrollere sykdommer myggen kan overføre.
Tradisjonelt avhenger arboviral kontroll svært mye på bruk av insektmidler å redusere mygg populasjoner. Det er imidlertid økende interesse tilnærminger der endret mygg er oppdratt i laboratoriet og deretter ut i naturlige populasjoner. Utgitt mygg kan endres genetisk11,12,13, biologisk14,15, gjennom bestråling16, kjemisk behandling17,18, eller med kombinert teknikker19 å undertrykke bestander av mygg eller erstatte dem med mygg som er ildfaste til arboviral overføring20.
Wolbachia er bakterier som for tiden blir brukt som en biologisk kontroll til arboviruses. Flere stammer av Wolbachia ble nylig introdusert i Ae. aegypti eksperimentelt bruker embryonale microinjection21,22,23,24. Disse stammer redusere kapasiteten til arboviruses til å spre og gjenskape i myggen, redusere deres overføring potensielle23,25,26,27,28 . Wolbachia infeksjoner overføres fra mor til avkom, men enkelte stammer indusere sterilitet når infiserte menn kompis med infisert kvinner22. Wolbachia-infiserte menn kan derfor bli utgitt i store mengder til å undertrykke naturlig mygg befolkninger, som nylig demonstrert i andre Aedes arter15,29. Men siden Wolbachia også hemme arboviral overføring i Ae. aegypti, kan mygg også befridd for å erstatte innfødte befolkningsgrupper med dårligere vektorer. Ae. aegypti infisert eksperimentelt Wolbachia gis nå ut til feltet i flere land bruker denne sistnevnte tilnærming14,30,31.
Wolbachia-baserte tilnærminger for arboviral kontroll stole på en god forståelse av samspillet mellom Wolbachia, mosquito og miljø. Wolbachia forekommer naturlig i et bredt spekter av stammene introdusert i mygg er forskjellige i deres effekter32. Som nye Wolbachia infeksjon typer innføres i Ae. aegypti24, er det nødvendig å karakterisere hver stamme for deres virkninger på mygg fitness, reproduksjon og arboviral forstyrrelser under en rekke forhold. Strenge eksperimentering i laboratoriet er derfor nødvendig å vurdere potensialet for Wolbachia stammer å lykkes i feltet.
Åpen versjoner av Ae. aegypti med Wolbachia infeksjoner kan ofte kreve tusener eller titusener av mygg per utgivelsen sone å være Steilet hver uke14,30,31. Suksessen til første utgivelser kan forbedres ved å slippe mygg med en stor størrelse å maksimere deres fruktbarhet33 og parring suksess34,35. Mygg bør også være tilpasset forholdene de vil oppleve i feltet, men langsiktig laboratorium oppdrett kan forårsake endringer i atferd og fysiologi som kan påvirke feltet ytelse36,37, 38.
Vi beskriver en enkel protokoll for oppdrett Ae. aegypti i laboratoriet ved hjelp av grunnleggende utstyr. Denne protokollen er egnet for både vill-type og Wolbachia-infisert mygg, som kan kreve spesiell oppmerksomhet som noen Wolbachia stammer har stor innvirkning på mygg livshistorie trekk39, 40. oppdrett betingelsene unngå overbefolkning og konkurranse for mat til å produsere mygg til en enhetlig størrelse, som er avgjørende for vektor kompetanse og fitness eksperimenter, og sikrer at myggen er sunt for feltet utgivelsen41 . Vi også ta forholdsregler for å minimere laboratorium tilpasning og inbreeding ved å redusere selektive presset og sikrer at neste generasjon samples fra et stort, tilfeldig utvalg. Men laboratorium miljøer er utpreget annerledes fra feltforhold, og langsiktig vedlikehold under avslappet forhold kan redusere egnethet av mygg ved løslatelse i feltet37,42,43 . Vi krysser derfor kvinner fra laboratoriet linjer til feltet samlet menn regelmessig resulterer i kolonier som er genetisk like for eksperimentell sammenligninger og som er tilpasset mål feltet befolkningen39. Metodene krever ikke noen spesialisert utstyr, og kan skaleres baksiden titalls tusenvis av personer per uke for feltet utgivelser. Protokollen prioriterer også egnethet av mygg innen og over generasjoner, en viktig faktor for insekter til etablering i naturlige populasjoner. Protokollen er egnet for de fleste laboratorier som krever vedlikehold av Ae. aegypti, spesielt for eksperimentell sammenligninger der en gjennomført kvalitet av mygg og relatability til feltet er viktig.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Aedes aegypti mygg eksperimentelt infisert med Wolbachia benyttes i programmer for å kontrollere spredningen av arboviruses som dengue, chikungunya og Zika. Wolbachia-infiserte mygg kan bli sluppet inn i feltet enten redusere befolkningen størrelser gjennom inkompatible parring eller transformere populasjoner med mygg som er ildfaste til virus smitte. For disse strategier for å lykkes, må myggen sluppet inn feltet fra laboratoriet være konkurransedyktig med innfødt mygg. Men, opprettholde mygg i laboratoriet kan føre i inbreeding, genetisk drift og laboratoriet tilpasning som kan redusere deres egnethet i feltet og kan forvirre resultatene av eksperimenter. For å teste hensiktsmessigheten av forskjellige Wolbachia infeksjoner for distribusjon i feltet, er det nødvendig å opprettholde mygg i et kontrollert laboratoriemiljø over flere generasjoner. Vi beskriver en enkel protokoll for å opprettholde Ae. aegypti mygg i laboratoriet, som er egnet for både Wolbachia-infiserte og vill-type mygg. Metodene minimere laboratorium tilpasning og implementere outcrossing for å øke relevansen av eksperimenter til feltet mygg. I tillegg vedlikeholdes koloniene under optimale forhold å maksimere deres egnethet for åpne-feltet utgivelser.

Figur 4 demonstrerer effektene av suboptimal ernæring på utvikling av Ae. aegypti larver. Når beholdere leveres med 0,25 mg av mat per Larven per dag eller mindre, øker utbyggingen tid for både menn og kvinner, og mindre synkron enn i beholdere leveres med 0,5 mg av mat. Hvis tilstrekkelig mat ikke er angitt under hele larver utvikling, kan dette ha en negativ innvirkning på vedlikeholdsplan. Langsom utvikling individer er i fare for å bli val...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Opprettholde Aedes aegypti mygg infisert med Wolbachia

Aedes aegypti mygg infisert med Wolbachia blir utgitt i naturlige populasjoner undertrykker overføring av arboviruses. Vi beskriver metoder baksiden Ae. aegypti med Wolbachia infeksjoner i laboratoriet for eksperimenter og feltet utgivelse, tar forholdsregler for å minimere laboratorium tilpasning og utvalg.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediert Gene knockdown og<em&gt; In Vivo</em&gt; Diurese Assay i voksen hunn<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Mygg

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologiske Recordings og RNA sekvensering av Gustatory vedheng av Yellow-feber Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fett kroppen Organ kultur-systemet i Aedes Aegypti, en vektor av Zika Virus

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...