Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson ve Clare Doig bizim koloni bakım yöntemleri gelişmesine katkılarından dolayı ve el yazması geliştirmeye yardımcı olan öneriler için üç adsız yorumcular anıyoruz. Bizim araştırma programı hibe ve dostluk tarafından AAH için Ulusal Sağlık desteklenir ve tıbbi araştırma Konseyi ve bir çeviri Wellcome Trust verin. PAR bir Avustralya hükümeti araştırma eğitim programı bursu bir alıcı var.

Sivrisinek insan denekler üzerinde kan besleme University of Melbourne insan Etik Komitesi tarafından onaylanmış (onay #: 0723847). Tüm gönüllüler sağlanan yazılı izni haberdar.
1. larva yetiştirme
Not: Sivrisinekler 26 ± 0,5 ° C ile 50-%70 bağıl nem, 12:12 h (ışık: karanlık) photoperiod bu koloni bakım protokol ile düzenlenen. Bu koşullar Ae. aegypti hayatta kalma ve gelişme44,45</s...

Burada Wolbachiabakım için sunulan protokol sonrası-virüslü Ae. aegypti sağlamak tutarlı bir kalite sağlıklı sivrisinekler deneyler için üretilen ve açık alan bültenleri. (Bkz: başvuru57) sivrisinek miktarda üretim öncelik diğer iletişim kuralları aksine, onların zindelik, hem rahat yetiştirme koşulları uygulayarak ve arasında nesiller içinde en üst düzeye çıkarma yöntemleri odaklı akraba evliliği, seçim ve laboratuvar uyum en aza nesiller. Bu i...

Aedes aegypti sivrisinek Dang, Zika ve chikungunya1de dahil olmak üzere dünyanın en önemli arboviruses bazıları iletmek için sorumludur. 2,3,4genişletmek Ae. aegypti tropikal yaygın dağıtım devam ederken bu virüsler küresel sağlık için artan bir tehdit hale gelmektedir. Kadın Ae. aegypti tercihen insan kanı5 besleme ve böylece insanlar, özellikle kentsel alanlarda nüfusun en yoğun olduğu yakın yaşamak eğilimindedir. İnsanlar ile bu yakın ilişki yoluyla onlar da lastikleri, tencere, oluklar ve su tankları6,7de dahil olmak üzere, yapay yaşam alanları içinde üremek için adapte olması. AE. aegypti da kolayca nerede onlar herhangi bir özel gereksinimleri olmadan doğrudan alanından farklı olarak bazı diğer türler Aedes cins8toplanan sonra korunabilir laboratuvar ortamlarına uyum, 9,10. Bakım kolaylığı onları geniş alanları geniş bir laboratuvarda Okulu'nu gördü, sonuçta hastalıkları sivrisinek kontrolü amaçlayan iletmek.
Geleneksel olarak, arboviral denetim ağır sivrisinek örneğin alınma olasılığını azaltmak için böcek öldürücüler kullanımına dayanıyor. Ancak, değiştirilmiş sivrisinek nereye laboratuvarda yetiştirilen ve sonra doğal nüfus serbest yaklaşımlar artan ilgi vardır. Yayımlanan sivrisinekler11,12,13, biyolojik olarak14,15, ışınlama16, kimyasal arıtma17,18genetik olarak değiştirilmiş, ya da sivrisinek nüfus bastırmak veya bunların yerine arboviral iletim20' ye ateşe dayanıklı sivrisinekler teknikleri-19 ile birlikte.
Wolbachia olan bir biyolojik mücadele ajanı olarak arboviruses. için kullanılmakta olan bakteri Birkaç soy-in Wolbachia son zamanlarda deneysel olarak embriyonik mikroenjeksiyon21,22,23,24kullanarak Ae. aegypti tanıtıldı. Bu suşların yaymak ve onların iletim potansiyel23,25,26,27,28 azalan sivrisinek içinde çoğaltmak için arboviruses kapasitesini azaltmak . Ancak hastalık bulaşmamış tek kadın22ile enfekte erkek dostum zaman belirli suşları kısırlık neden Wolbachia enfeksiyonlar çoluk, anneden iletilir. Wolbachia-virüslü erkekler bu nedenle doğal sivrisinek nüfus, son diğer Aedes türler15,29gösterdi bastırmak için büyük miktarlarda yayınlanacak. Wolbachia da inhibe bu yana arboviral Ae. aegyptiiletimde, ancak, sivrisinekler de yerli nüfus ile yoksul vektörel çizimler yerine yayınlanacak. Deneysel olarak Wolbachia ile enfekte Ae. aegypti are şimdi serbest bırakmak içine alan birçok ülkede bu ikinci yaklaşımı14,30,31kullanarak.
Wolbachia-arboviral denetimi için tabanlı yaklaşımlar itimat Wolbachia, Sivrisinek ve çevre arasındaki etkileşimler ses bir anlayış. Wolbachia ortaya doğal olarak çok çeşitli böcekler ve sivrisinekler tanıttı suşları onların etkileri32çeşitlidir. Yeni Wolbachia enfeksiyon türü Ae. aegypti24tanıtıldı gibi sivrisinek fitness, üreme ve koşulları bir dizi altında arboviral girişim üzerindeki etkileri için her zor karakterize etmek gereklidir. Titiz deney Laboratuvarı bu nedenle alanında başarılı olmak Wolbachia suşları potansiyeli değerlendirmek için gereklidir.
Ae. aegypti açık alan bültenleri Wolbachia enfeksiyonları ile kez sivrisinek olmak serbest bölge başına, on binlerce binlerce her hafta14,30,31yetiştirilen gerektirebilir. İlk bültenleri başarısı sivrisinekler onların verimlilik33 ve çiftleşme başarı34,35en üst düzeye çıkarmak için büyük bir boyutta serbest bırakarak geliştirilebilir. Sivrisinekler de alanında, ancak uzun vadeli laboratuvar yetiştirme değişiklikler davranış ve alan performans36,37etkileyen Fizyoloji neden olabilir yaşayacaksınız koşullarına adapte edilmelidir, 38.
Biz Ae. aegypti temel ekipman kullanarak laboratuvar yetiştirme için basit bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı için her iki vahşi türü uygundur ve Wolbachia-enfekte sivrisinekler, ikincisi olan gerektirebilir özel ilgi gibi bazı Wolbachia suşları sivrisinek hayat-Tarih özellikleri39, üzerinde önemli etkileri 40. aşırı kalabalık ve vektör yetkinlik ve fitness deneyler için önemlidir ve sivrisinekler için alan serbest bırakmak41 sağlıklı olmasını sağlar tutarlı bir boyuta sivrisinekler üretmek gıda için rekabet yetiştirme durumlardan kaçınmak . Biz laboratuvar adaptasyon ve akraba evliliği seçici baskıların azaltılması ile en aza indirmek önlemler almak ve yeni nesil sağlamak büyük, rasgele havuzundan örneklenir. Ancak, laboratuvar ortamları alan koşullarından farklı ve rahat koşullarda uzun vadeli bakım yayın içine alan37,42,43 üzerine sivrisinek fitness azaltabilir . Bu nedenle kadın alan toplanan erkeklerin periyodik olarak, laboratuvar satırlarından, deneysel karşılaştırmalar için genetik olarak benzeyen, ve için hedef alan nüfus39adapte olan koloniler sonuçlanan geçeriz. Yöntemleri herhangi bir özel ekipman gerektirmez ve arka on binlerce her hafta alan sürümleri için bireylerin ölçeklendirilebilir. Protokol ayrıca fitness kuruluş doğal nüfus için mukadder böcekler için önemli bir göz sivrisinek içinde ve nesiller arasında öncelik. Protokol sivrisinekler ve relatability alanı için tutarlı bir kalite nerede önemli özellikle deneysel karşılaştırmalar için Ae. aegypti, bakım gerektiren çoğu laboratuarlar için uygundur.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Deneysel olarak Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses Dang, chikungunya ve Zika gibi yayılmasını kontrol programlarında kullanılmaktadır. Wolbachia-virüslü sivrisinekler de nüfus boyutları arasında uyumsuz matings azaltmak veya virüs iletim için ateşe dayanıklı sivrisinek ile nüfus dönüştürmek için alana piyasaya sürülmelidir. Bu stratejiler başarılı olmak laboratuvar alanından içine serbest sivrisinek yerli sivrisinek ile rekabetçi olmalı. Ancak, sivrisinekler laboratuvarda Bakımı akraba evliliği, genetik sürüklenme ve onların zindelik alanını azaltabilir ve deneylerin sonuçlarını yıkmak laboratuvar adaptasyon neden olabilir. Farklı Wolbachia enfeksiyonlar dağıtımı için uygunluğu sahada test için sivrisinek kontrollü laboratuvar ortamında birden çok nesiller boyunca korumak gereklidir. Her iki Wolbachiaiçin uygundur laboratuvarında Ae. aegypti sivrisinek korumak için basit bir protokol tanımlayan-virüslü ve vahşi-türü sivrisinekler. Yöntemler laboratuvar adaptasyon en aza indirmek ve deneyler alaka alan sivrisinekler için artırın için outcrossing uygulamak. Ayrıca, koloniler onların zindelik açık alan sürümleri için en üst düzeye çıkarmak için en uygun koşullarda korunur.

Şekil 4 Ae. aegypti larva gelişimine suboptimal beslenmenin etkisi gösterir. Ne zaman kapsayıcı gıda larva günlük başına 0,25 mg ile sağlanır veya daha az, hem kadın ve erkek için Geliştirme süresini artırır, ve daha az kaplar içinde zaman uyumlu gıda 0.5 mg ile sağlanır. Yeterli gıda larva geliştirme süresi boyunca sağlanmazsa, bu bakım planı üzerinde olumsuz bir etkisi olabilir. Yavaş gelişen bireylerin karşı seçil...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses iletimini bastırmak için doğal nüfus serbest edilmektedir. Biz laboratuvar adaptasyon ve seçimi en aza indirmek önlemler alarak deneyler ve alan açıklaması, arka Ae. aegypti laboratuvarda Wolbachia enfeksiyonları ile yöntemleri açıklanmaktadır.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Bayan A. aegypti Sivrisinek içine dsRNA enjeksiyon

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Transgenik Sivrisinekler Edinme A. aegypti Embriyolar Mikroenjeksiyon

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

Dang Enfeksiyonlar Sivrisinekler (A. aegypti) ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi için protokol

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

Hücre Orta Wolbachia bakımı

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Ae midgut ve Tükürük Bezlerinin Diseksiyon. aegypti Sivrisinekler

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

Bina daha iyi Sivrisinek: Sıtma ve Dang Ateşi Direnç A. gambiae ve A. aegypti Sivrisinekler etkinleştirilmesi Genler belirlenmesi

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-aracılı Gene Nakavt ve<em&gt; In Vivo</emYetişkin Kadınlar&gt; diürez Testi<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Sivrisinekler

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fizyolojik Kayıtlar ve Sarı-ateş Sivrisinek Tat Çıkıntılara RNA Sıralama<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Yağ vücut Organ kültür sistemi içinde Aedes Aegypti, bir vektör Zika virüs

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...