JoVE Logo

Sign In

11.22 : كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي

في كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC)، والمعروفة أيضًا باسم كروماتوغرافيا الاستبعاد الجزيئي أو كروماتوغرافيا نفاذية الهلام، يتم فصل الجزيئات بناءً على أحجامها. هذه التقنية مهمة لفصل الجزيئات الكبيرة مثل البوليمرات والجزيئات الحيوية. الفئتان الرئيسيتان من المراحل الثابتة بحجم الميكرون المستخدمة في الـ SEC هما جزيئات السيليكا وحبيبات راتنج البوليمر المترابطة. كلتا المادتين مساميتان، لكن أحجام مسامهما تختلف بشكل كبير.

توفر جزيئات السيليكا مزايا مثل الصلابة والاستقرار والتوافق مع المذيبات المختلفة. على النقيض من ذلك، تأتي حبيبات البوليمر بأحجام مسام متنوعة ويمكن أن تكون محبة للماء أو كارهة للماء. تُستخدم المواد الهلامية المحبة للماء مثل الأجار والبولي أكريلاميد للفصل في الأوساط المائية، بينما تُفضل المواد الهلامية الكارهة للماء مثل البوليسترين ديفينيل بنزين للمذيبات غير القطبية. يتم تعطيل جزيئات السيليكا المستخدمة في استبعاد الحجم لمنع التفاعلات غير المرغوب فيها، بينما يتم تصنيع راتنجات البوليمر بدون مواقع تبادل.

تقضي المواد المذابة الأصغر وقتًا أطول داخل مسام الطور الثابت، مما يؤدي إلى وقت إفلات أطول من العمود. يعتمد حجم الاحتفاظ بالمذاب على نسبة توزيعه، والتي تتراوح من 0 عند حد الاستبعاد إلى 1 عند حد التضمين. يعكس هذا مدى قدرة المذاب على اختراق المسام.

يُعد الـ SEC تطبيقًا بارزًا في تحليل مخاليط البروتين وتحديد أوزان الصيغة. يمكن إعداد منحنيات المعايرة بين حدود الاستبعاد والتضمين، لكن تحديد وزن الصيغة بدقة يتطلب معايير مختارة بعناية لتقليل تأثير الشكل.

يمكن تنفيذ هذه التقنية باستخدام أجهزة HPLC التقليدية عن طريق استبدال عمود HPLC بعمود استبعاد حجم مناسب. يستخدم كاشف الأشعة فوق البنفسجية/المرئية عادةً للحصول على مخططات الكروماتوغرام.

Tags

Size exclusion ChromatographySECMolecular exclusion ChromatographyGel permeation ChromatographyStationary PhasesSilica ParticlesPolymer Resin BeadsHydrophilic GelsHydrophobic GelsElution TimeRetention VolumeDistribution RatioProtein MixturesFormula WeightsHPLC InstrumentationUV Vis Detector

From Chapter 11:

article

Now Playing

11.22 : كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي

Principles of Chromatography

457 Views

article

11.1 : طرق الكروماتوغرافيا: المصطلحات

Principles of Chromatography

874 Views

article

11.2 : طرق الكروماتوغرافيا: التصنيف

Principles of Chromatography

1.0K Views

article

11.3 : امتصاص وتوزيع المحلل

Principles of Chromatography

548 Views

article

11.4 : الانتشار على أعمدة الكروماتوغرافيا

Principles of Chromatography

395 Views

article

11.5 : الدقة الكروماتوغرافية

Principles of Chromatography

320 Views

article

11.6 : كفاءة العمود: نظرية اللوحات

Principles of Chromatography

433 Views

article

11.7 : كفاءة العمود: نظرية المعدل

Principles of Chromatography

229 Views

article

11.8 : تحسين الفصل الكروماتوغرافي

Principles of Chromatography

305 Views

article

11.9 : كروماتوغرافيا هلام السيليكا: نظرة عامة

Principles of Chromatography

925 Views

article

11.10 : التحليل الكروموتوغرافي ذو الطبقة الرقيقة (TLC)

Principles of Chromatography

991 Views

article

11.11 : الكروماتوغرافيا الغازية: مقدمة

Principles of Chromatography

780 Views

article

11.12 : الكروماتوغرافيا الغازية: أنواع الأعمدة ومواد الأطوار الثابتة

Principles of Chromatography

411 Views

article

11.13 : أنظمة حقن العينات

Principles of Chromatography

325 Views

article

11.14 : كروماتوغرافيا الغاز: نظرة عامة على أجهزة الكشف

Principles of Chromatography

335 Views

See More

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved