11.22 : Размерно-эксклюзионная хроматография

В размерно-эксклюзионной хроматографии (SEC), также известной как молекулярно-эксклюзионная или гель-проникающая хроматография, молекулы разделяются на основе их размеров. Этот метод важен для разделения крупных молекул, таких как полимеры и биомолекулы. Два класса неподвижных фаз, размером порядка микрона, встречающихся в SEC, — это частицы кремния и сшитые полимерные смоляные шарики. Оба материала - пористые, но размеры их пор значительно различаются.

Частицы кремния обладают такими преимуществами, как жесткость, стабильность и совместимость с различными растворителями. Напротив, полимерные шарики имеют разные размеры пор и могут быть гидрофильными (любящими воду) или гидрофобными (отталкивающими воду). Гидрофильные гели, такие как агар и полиакриламид, используются для водного разделения, в то время как гидрофобные гели, такие как полистирол-дивинилбензол, предпочтительны для неполярных растворителей. Частицы кремния, используемые для размерно-эксклюзионной хроматографии, дезактивируются для предотвращения нежелательных взаимодействий, в то время как полимерные смолы синтезируются без обменных участков. Более мелкие растворенные вещества проводят больше времени в порах неподвижной фазы, что приводит к более длительному времени элюирования из колонки.

Объем удерживания для растворенного вещества зависит от его коэффициента распределения, который варьируется от 0 на пределе исключения до 1 на пределе включения. Это отражает, насколько хорошо растворенное вещество проникает в поры.

SEC является достойным внимания методом в анализе белковых смесей и определении веса формулы. Калибровочные кривые могут быть подготовлены между пределами исключения и включения, но точные определения веса формулы требуют тщательно выбранных стандартов, чтобы минимизировать влияние формы.

Этот метод можно реализовать с использованием обычного оборудования ВЭЖХ, заменив колонку ВЭЖХ на соответствующую колонку с исключением по размеру. Для получения хроматограмм обычно используется детектор УФ/видимого диапазона.