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11.22 : サイズ排除クロマトグラフィー

サイズ排除クロマトグラフィー (SEC) は分子排除クロマトグラフィーまたはゲル浸透クロマトグラフィーとも呼ばれ、分子はサイズに基づいて分離されます。この技術は、ポリマーや生体分子などの大きな分子を分離するのに重要です。SEC で使用されるミクロンサイズの固定相には、シリカ粒子と架橋ポリマー樹脂ビーズの 2 つの種類があります。どちらの材料も多孔質ですが、細孔サイズは大きく異なります。

シリカ粒子には、剛性、安定性、さまざまな溶媒との適合性などの利点があります。対照的に、ポリマービーズにはさまざまな細孔サイズがあり、親水性または疎水性 (撥水性) になります。寒天やポリアクリルアミドなどの親水性ゲルは水性分離に使用され、ポリスチレン-ジビニルベンゼンなどの疎水性ゲルは非極性溶媒に適しています。サイズ排除に使用されるシリカ粒子は、望ましくない相互作用を防ぐために不活性化されますが、ポリマー樹脂は交換部位なしで合成されます。

より小さな溶質は固定相の細孔内でより長い時間過ごすため、カラムからの溶出時間が長くなります。溶質の保持容量は、排除限界での 0 から包含限界での 1 までの範囲の分配比に依存します。これは、溶質が細孔にどれだけよく浸透するかを反映します。

SEC は、タンパク質混合物の分析と式量の決定における注目すべきアプリケーションです。排除限界と包含限界の間で検量線を作成できますが、正確な式量の決定には、形状の影響を最小限に抑えるために慎重に選択された標準が必要です。

この手法は、HPLC カラムを適切なサイズ排除カラムに置き換えることで、従来の HPLC 機器を使用して実行できます。クロマトグラムを取得するには、通常、紫外可視検出器が使用されます。

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Size exclusion ChromatographySECMolecular exclusion ChromatographyGel permeation ChromatographyStationary PhasesSilica ParticlesPolymer Resin BeadsHydrophilic GelsHydrophobic GelsElution TimeRetention VolumeDistribution RatioProtein MixturesFormula WeightsHPLC InstrumentationUV Vis Detector

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