크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 분자 배제 또는 겔 투과 크로마토그래피라고도 하며, 분자는 크기에 따라 분리됩니다. 이 기술은 폴리머 및 생체 분자와 같은 대형 분자를 분리하는 데 중요합니다. SEC에서 마주치는 두 가지 종류의 미크론 크기 고정상은 실리카 입자와 가교 폴리머 수지 비드입니다. 두 재료 모두 다공성이지만 기공 크기는 상당히 다릅니다.
실리카 입자는 강성, 안정성 및 다양한 용매와의 호환성과 같은 장점을 제공합니다. 반면 폴리머 비드는 다양한 기공 크기로 제공되며 친수성(물을 좋아함) 또는 소수성(물을 밀어냄)일 수 있습니다. 아가 및 폴리아크릴아마이드와 같은 친수성 겔은 수용액 분리에 사용되는 반면, 폴리스티렌-디비닐벤젠과 같은 소수성 겔은 비극성 용매에 선호됩니다. 크기 배제에 사용되는 실리카 입자는 원치 않는 상호 작용을 방지하기 위해 비활성화되는 반면, 폴리머 수지는 교환 사이트 없이 합성됩니다.
작은 용질은 고정상의 기공 내에서 더 많은 시간을 보내므로 컬럼에서 용출 시간이 길어집니다. 용질의 보유 부피는 분배 비율에 따라 달라지며, 배제 한계에서 0에서 포함 한계에서 1까지입니다. 이는 용질이 기공을 얼마나 잘 관통하는지를 반영합니다.
SEC는 단백질 혼합물 분석 및 공식 중량 결정에서 주목할 만한 응용 분야입니다. 배제 한계와 포함 한계 사이에서 교정 곡선을 작성할 수 있지만 정확한 공식 중량 결정에는 모양의 영향을 최소화하기 위해 신중하게 선택된 표준이 필요합니다.
이 기술은 HPLC 컬럼을 적절한 크기 배제 컬럼으로 교체하여 기존 HPLC 기기를 사용하여 수행할 수 있습니다. UV/Vis 검출기는 일반적으로 크로마토그램을 얻는 데 사용됩니다.
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