عزل الحمض النووي الجينوم من الذيول ماوس

Summary

Abstract

Protocol

1. قطع قطع الذيل (3mm) وآذان العلامة.
2. إضافة 720 متر و 30 لتر STE م ل ك بروتين (10 ملغ / مل الأسهم).
3. احتضان عند درجة حرارة 55 مئوية على كتلة التدفئة ودوامة كل ساعة لمدة 3 ساعات في سرعة قصوى لمدة 10 ثانية.
4. تعطيل بروتين كاف في 70 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
5. إخماد على الجليد لمدة 5 دقائق.
6. الحمض النووي للطرد المركزي لمدة 10 دقيقة الذيل بأقصى سرعة.
7. صب في أنبوب جديد يحتوي على 720 م ل الأيزوبروبانول.  
8. الحمض النووي يعجل بواسطة أنبوب أو عكس vortexing.
9. تدور باستمرار لمدة 5 دقائق الحمض النووي بأقصى سرعة. إزالة طاف.
10. غسل بيليه مع الايثانول 70 ٪.
11. تدور أسفل الحمض النووي الجيني 5 دقائق بأقصى سرعة. إزالة طاف.
12. الحمض النووي يسمح لتجف لمدة 1-2 دقائق.
13. الحمض النووي في Resuspend ل م 100-200 اعتمادا على حجم بيليه.
14. أنبوب مكان عند درجة حرارة 55 مئوية لمدة 1 ساعة لتسهيل حل من الحمض النووي.  

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl