Выделение геномной ДНК из хвостов мышей

Резюме

Аннотация

протокол

1. Вырезать хвост штук (3 мм) и отметьте уши.
2. Добавить 720 мкл STE и 30 мкл протеиназы К (10 мг / мл акций).
3. Инкубировать при 55 ° С на блоке отопления и вихревые каждый час в течение 3 часов при максимальной скорости в течение 10 секунд.
4. Деактивировать протеиназы К при 70 ° С в течение 5 минут.
5. Quench на льду в течение 5 минут.
6. Центрифуга хвост ДНК в течение 10 минут на полной скорости.
7. Декантировать в новую пробирку, содержащую 720 мкл изопропанола.  
8. Осадок ДНК путем обращения трубки или вортексе.
9. Спином вниз ДНК в течение 5 минут на полной скорости. Удалить супернатант.
10. Вымойте гранул с 70% этанола.
11. Спином вниз геномной ДНК 5 минут на полной скорости. Удалить супернатант.
12. Разрешить ДНК, чтобы высохнуть в течение 1-2 минут.
13. Ресуспендируют ДНК в 100-200 л м в зависимости от размера гранул.
14. Место трубке при 55 ° С в течение 1 часа для облегчения растворения ДНК.  

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl