Isolement de l'ADN génomique de souris Tails

Résumé

Résumé

Protocole

1. Couper des morceaux de la queue (3mm) et les oreilles marque.
2. Ajouter 720 m l STE et 30 m de l protéinase K (10 mg / ml de stock).
3. Incuber à 55 ° C sur le bloc de chauffage et de vortex toutes les heures pendant 3 heures à la vitesse supérieure pendant 10 secondes.
4. Inactiver la protéinase K à 70 ° C pendant 5 minutes.
5. Quench sur la glace pendant 5 minutes.
6. Centrifugeuse ADN de queue pendant 10 minutes à pleine vitesse.
7. Décanter dans un nouveau tube contenant 720 m l Isopropanol.  
8. Précipiter l'ADN en inversant le tube ou vortex.
9. Isoler l'ADN pendant 5 minutes à pleine vitesse. Retirer le surnageant.
10. Laver le culot à l'éthanol 70%.
11. Isoler l'ADN génomique 5 minutes à pleine vitesse. Retirer le surnageant.
12. Laisser sécher l'ADN pendant 1-2 minutes.
13. Remettre en suspension dans l'ADN 100-200 L m selon la taille des granulés.
14. Placer le tube à 55 ° C pendant 1 heure pour faciliter la dissolution de l'ADN.  

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl