בידוד של הדנ"א הגנומי של זנבות עכבר

Summary

Abstract

Protocol

1. חותכים חתיכות הזנב (3mm) והאוזניים סימן.
2. הוספת 720 מ 'אני STE ו 30 מ' אני proteinase K (10 מ"ג / מ"ל המלאי).
3. לדגור על 55 מעלות צלזיוס על בלוק חימום מערבולת כל שעה במשך 3 שעות במהירות שיא עבור 10 שניות.
4. להשבית proteinase K ב 70 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
5. דובדבני על הקרח במשך 5 דקות.
6. צנטריפוגה DNA הזנב במשך 10 דקות בשיא המהירות.
7. למזוג לתוך שפופרת חדשה המכילה 720 מ 'אני Isopropanol.  
8. משקע ה-DNA על ידי צינור vortexing או היפוך.
9. ספין למטה DNA במשך 5 דקות במהירות מלאה. הסר supernatant.
10. לשטוף גלולה עם אתנול 70%.
11. ספין למטה הדנ"א הגנומי 5 דקות במלוא המהירות. הסר supernatant.
12. אפשר DNA להתייבש במשך 1-2 דקות.
13. Resuspend דנ"א l מ 100-200 תלוי בגודל של גלולה.
14. צינור מקום ב 55 מעלות צלזיוס במשך שעה 1 כדי להקל על פירוק של דנ"א.  

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl