El aislamiento de ADN genómico de colas de ratón

Resumen

Resumen

Protocolo

1. Corte los pedazos de cola (3 mm) y las orejas marca.
2. Añadir 720 m l STE y 30 m l de proteinasa K (10 mg / ml).
3. Se incuba a 55 ° C en el bloque de calentamiento y agitar cada hora durante 3 horas a la máxima velocidad durante 10 segundos.
4. Inactivar la proteinasa K a 70 ° C durante 5 minutos.
5. Apagar en hielo durante 5 minutos.
6. Centrífuga ADN cola durante 10 minutos a toda velocidad.
7. Decantar en el tubo nuevo que contiene 720 m l de isopropanol.  
8. ADN precipitado invirtiendo el tubo o agitación.
9. Girar el ADN durante 5 minutos a toda velocidad. Eliminar el sobrenadante.
10. Lavar precipitado con etanol al 70%.
11. Girar el ADN genómico 5 minutos a máxima velocidad. Eliminar el sobrenadante.
12. Permitir que el ADN que se seque durante 1-2 minutos.
13. Resuspender el ADN en 100 a 200 l m dependiendo del tamaño del pellet.
14. Colocar el tubo a 55 º C durante 1 hora para facilitar la disolución de ADN.  

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl