Isolierung genomischer DNA aus Maus-Tails

Zusammenfassung

Zusammenfassung

Protokoll

1. Cut Schwanz Stück (3mm) und markieren den Ohren.
2. Add 720 m l STE und 30 m l Proteinase K (10 mg / ml Stammlösung).
3. Inkubation bei 55 ° C auf Heizblock und Wirbel jede Stunde für 3 Stunden bei Höchstgeschwindigkeit für 10 Sekunden.
4. Inactivate Proteinase K bei 70 ° C für 5 Minuten.
5. Quench auf Eis für 5 Minuten.
6. Centrifuge tail DNA für 10 Minuten bei voller Geschwindigkeit.
7. Dekantieren in neue Röhrchen mit 720 m l Isopropanol.  
8. Niederschlag DNA durch Invertieren des Röhrchens oder Vortexen.
9. Spin down DNA für 5 Minuten bei voller Geschwindigkeit. Überstand entfernen.
10. Wash-Pellet mit 70% Ethanol.
11. Spin down genomische DNA 5 Minuten bei voller Geschwindigkeit. Überstand entfernen.
12. Lassen DNA für 1-2 Minuten trocknen lassen.
13. Resuspendieren DNA in 100-200 m l je nach Größe der Pellets.
14. Das Röhrchen bei 55 ° C für 1 Stunde zu erleichtern Auflösung der DNA.  

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl