وإصابة العصب تنج (SNI) موديل Allodynia الميكانيكية المستحثة في الفئران

Summary

وصفت إصابة العصب يدخر نموذج حيواني هنا كنموذج الماوس من آلام الأعصاب الطرفية التالية إزالة التعصيب جزئي للعصب الوركي بواسطة lesioning للقصبي ومشتركة فروع العصب الشظوي ، وترك ما تبقى العصب الربلي سليمة. وكميا التعديل السلوكي الناتج عن allodynia الميكانيكية بواسطة خيوط فراي فون.

Abstract

آلام الأعصاب الطرفية وخيم حالة الألم المزمن الذي قد يؤدي إلى صدمة من الأعصاب الحسية في الجهاز العصبي المحيطي. اصابة العصب تنج (SNI) نموذج يدفع أعراض آلام الأعصاب مثل أي ألم الميكانيكية allodynia بسبب محفزات اللمس التي لا تثير عادة استجابة مؤلمة [1].

نموذج الفأر SNI ينطوي ربط اثنين من الفروع الثلاثة للعصب الوركي (العصب قصبي والعصب الشظوي المشترك) ، بينما يتم ترك العصب الربلي سليمة [2]. نتائج الآفة في فرط الملحوظ في مجال الجانبي للمخلب ، وهو معصب بواسطة عصب الربلي يدخر. ويمكن استخدام الجانب غير المشغلة للفأرة كمجموعة تحكم. مزايا طراز SNI هي قوة للاستجابة ، وأنها لا تتطلب مهارات المجهرية الخبراء.

يتم تحديد الحد الأدنى للاستجابة الميكانيكية الألم عن طريق اختبار مع شعيرات فراي فون الانحناء للقوة المتزايدة ، التي ضغطت بشكل متكرر على منطقة الجانبي للمخلب [3] ، [4]. ويعرف الألم رد فعل إيجابي والانسحاب المفاجئ مخلب وكان يصرخ و / أو مخلب لعق الناجمة عن خيوط. يتم تعريف استجابة إيجابية في ثلاثة من أصل خمسة والمنبهات المتكررة عتبة الألم.

كما هو موضح في بروتوكول الفيديو ، C57BL / 6 فئران التجارب allodynia عميق في وقت مبكر من اليوم التالي لعملية جراحية ، والحفاظ على هذا لعدة أسابيع.

Protocol

1. القياسات الأساسية فراي فون قبل الجراحة

لإجراء اختبار فون فراي ، يرجى الرجوع إلى القسم 5.

2. التخدير / التحضير

1. تخدير الحيوانات (الحقن داخل الصفاق من خليط من 100mg/kg الكيتامين و 15 زيلازين ملغ / كلغ).
2. وضع الحيوانات في مكان هادئ حتى تخدير بالكامل (على سبيل المثال تغطية بمنشفة ورقية).
3. فحص ردود الفعل التي معسر غيض من الذيل والكفوف ومع زوج من ملاقط. تأكد من أن الحيوانات لا تستجيب قبل المتابعة.
4. حقن تحت الجلد (عودة منطقة الكتف) متساوي التوتر المالحة 0.5ml بالمضادات الحيوية ، مثل الأمبيسيلين (لتجنب الجفاف ومنع العدوى ، وعلى الرغم من أن هذا هو إجراء العمليات الجراحية البسيطة).
5. ماكينة حلاقة كهربائية باستخدام ، حلق مجال المنطوق من أقل قليلا من منطقة الركبة إلى منطقة الورك (اليد اليمنى لشخص ينصح الطرف الأيسر الخلفيتين).
6. تطبيق مرهم للعين للعيون مع برعم القطن أو الصوف.
7. وضع الحيوانات على جانبها الأيمن والأيسر hindlimb وضع على منصة صغيرة للحفاظ على ارتفاع. تأمين المحطة بشريط لاصق.
8. تطهير الحقل من المنطوق بالتناوب مع الدعك من الإيثانول وbetadine من خارج موقع الجراحية.

3. جراحة

1. تحديد موقع الركبة مع إبهام يدك اليسرى واستخدام مشرط لجعل التطبيق. 1 سم شق طولي في الاتجاه الأقرب إلى الركبة.
2. فتح الجلد عن طريق تشريح حادة استخدام غيض من مقص العقيمة.
3. فصل طبقة العضلات عن طريق تشريح كليل بجوار الأوعية الدموية واضحة للعيان ، على مقربة من عظم الفخذ (فخذ). إذا فعلت بشكل صحيح ، فإن طبقات منفصلة العضلات بسهولة من دون أي نزيف ، وكشف عن الحق العصب الوركي تحت العضلات.
   إذا كان النزيف يحدث مثلا تلف الاوعية الدموية بالقرب من الركبة ، واستخدام معقم براعم القطن أو الصوف أو قطعة من نظرات لامتصاص الدم. الصحافة حتى يتوقف النزيف.
4. مكان الماوس تحت المجهر ستيريو ومنفصلة بعناية العضلات مع زوج من ملاقط معقمة (nr. 2) لتصور العصب الوركي. ويمكن أيضا أن يطبق الكامشات.
5. تحديد المنطقة التي فروع العصب الربلي من العصب الوركي. العصب الربلي هو أصغر من الفروع الثلاثة ، تتفرع إلى اليمين في الساق اليسرى.
6. تطبيق خياطة (6-0 خياطة) حول الفرعين الآخرين التي لا تزال تشغل في نفس الوقت (للأعصاب وعظام الساق الشظوي المشترك) ، ويجري حريصا جدا على عدم لمس فرع الربلي. هذا هو خطوة حاسمة على العصب الربلي يجب أن يكون ترك سليمة تماما.
7. جعل عقدة ضيقة الجراحية. إذا كانت العقدة الأولى هي ضيق ، سوف يلاحظ تقلصات في الاطراف.
8. الاستيلاء على الأعصاب إلى أن تقطع دون خياطة مع زوج من ملاقط (nr. 5) وقطع الاعصاب فوق وتحت ملاقط مع زوج من مقص صغير. أولا عن طريق قطع فوق زوج من ملاقط ، وسحب الأعصاب هو تجنبها.
9. قطع خياطة ينتهي مع زوج من مقص الصغرى وإغلاق برفق طبقة العضلات. إضافة قطرة من يدوكائين لخياطة الجرح ومع عقدة الجراحية.

4. بعد الجراحة

1. تحقق مما إذا مرهم العين لا يزال كافيا.
2. ضع الماوس في قفص نظيفة تحت منشفة ورقية في وضعية مريحة. إذا كانت الغرفة الباردة ، ووضع وسادة تحت حرارة جزء من القفص (فقط تحت جزء من القفص والحيوان يجب أن تكون قادرة على الهروب إلى برودة المنطقة إذا فضلت).
3. ضمان المياه للوصول بسهولة وطعام.

5. اختبار فون فراي (خط الأساس ، واعتبارا من اليوم بعد عملية جراحية)

1. وضع الفئران في أحمر الاسطوانات البلاستيكية الملونة الموضوعة على طاولة سلك شبكة يومين ويوم واحد قبل الجراحة. روض لمدة 15 دقيقة في اسطوانات قبل الاختبار. اللون الأحمر من اسطوانات يساعد على الاسترخاء الفئران بسرعة لأنها لا يمكن أن نرى بعضنا البعض ونحن في منطقة مظلمة.
2. تحقق من أن الفئران هي الهدوء وتطبيق فون شعيرات فراي إلى الجزء الجانبي من مخلب : بدءا من خيوط ز 0.02 في تطبيق أول قوة إلى مخلب ترك خمس مرات خلال الفترة ما مجموعه 30 ثانية (حوالي 2 ثانية لكل التحفيز) و قياس رد فعل الفأر بعد كل تطبيق. مع تكرار نفس الخيط ومخلب ترك أي الفئران الأخرى ، ومن ثم تبدأ من جديد مع مخلب الأيمن للفأرة أولا قبل الانتقال الى خيوط القادم ، على سبيل المثال :
   
   • الماوس 1 : مخلب اليسار 5 مرات مع خيوط 0.02 ز
   • الماوس 2 : مخلب اليسار 5 مرات مع خيوط 0،02 ز الخ.
   • الماوس 1 : مخلب الحق 5 مرات مع خيوط 0.02 ز
   • الماوس 2 : 5 مرات مخلب الحق مع خيوط 0،02 ز الخ.
   • الماوس 1 : مخلب اليسار 5 مرات مع خيوط 0.04 ز
   • الماوس 2 : مخلب اليسار 5 مرات مع خيوط 0،04 ز الخ.
3. وتعتبر استجابة في ثلاثة من أصل خمسة المحفزات كرد فعل إيجابية. خيوط أعلاه thresholويمكن تطبيق د للتحقق من مستوى العتبة.
   استجابة = مخلب انسحاب مفاجئ ، المفاجئة الجفل ، مخلب لعق المفاجئ.

6. ممثل النتائج

أنجز الشكل 1. فراي فون اختبار على C57BL / 6 عمر الفئران 8-10 أسابيع من العمر يوم 1 قبل وبعد العملية مرارا وتكرارا لعملية جراحية. وقد أدرجت 4-8 الحيوانات في كل مجموعة. ويمثل فراي فون اختبار على الجانب المماثل التي تديرها ويمثل الجانب السيطرة غير تشغلها المقابل. في اليوم التالي للجراحة الحيوانات تطوير فرط مخلب كبير على تشغيلها في حين أن عدم تشغيلها فقط تأثرت بصورة طفيفة بالنسبة للفئران صورية تشغلها. (* <0.05 ، ** <0.01 ، *** <0.001 ، نسبة إلى المقابل المماثل).

Discussion

خطوات حاسمة

وينبغي تجنب الأضرار التي لحقت العصب الربلي من أجل دراسة التغيرات المرضية في العصب الربلي سليمة التالي لاصابة الاعصاب الشظوية الظنبوبية والمشتركة. قد يؤدي إلى تلف في العصب الجانبية الربلي يؤدي إلى الشلل ، ويمكن بالتالي تصور ما جره من أطرافهم هند تشغلها.

معصب هو فقط الجانب الوحشي من مخلب بواسطة عصب الربلي يدخر ، وبالتالي ، لا يتطور هذا المجال الاعتلال العصبي. اختبار مناطق أخرى ، معصب من الأعصاب يمكن مقطوع ، والتحيز بشدة تقييم عتبة الميكانيكية تغييرها.

التعديلات الممكنة

أنواع أخرى من عملية ربط قد تكون تكميلية من حيث دراسة الظروف المرضية آلام التالية إصابة العصب المحيطي ، مثل الاصابة المزمنة انقباض [5] أو جزئية ربط العصب [6]. كل النتائج الإجراء التجريبي في التغيرات المظهرية المتميزة التي ينبغي النظر فيها قبل ما بعد الجراحة الاختبار.

وعلاوة على ذلك ، قد يتم تطبيق الاختبارات الحسية الأخرى ، مثل فرط التألم الحراري [7] ، رغم أن هذا النمط الظاهري هو SNI التالية أقل قوة.

التطبيقات المستقبلية

ويمكن استخدام هذه التقنية لاختبار العقاقير تغيير وضع أو صيانة ميكانيكية allodynia [8]. تحليل العصب الوركي ، والعقد الجذرية الظهرية (DRG) و / أو النخاع الشوكي القطني يسمح للبحث عن الآليات الجزيئية المسؤولة عن النمط الظاهري المستحث.

وقد أجريت التجارب على الحيوانات المختبرية وفقا للممارسة الجيدة في الامتثال الكامل لوائح الدانمركية والأوروبية. تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل المفتشية التجارب الحيوانية الدنماركية تحت إشراف وزارة العدل (رقم إذن 2006/561-1206).

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
التخدير : الكيتامين وزيلازين	مشرط
المرهم العيني	زوج من ملاقط NR. 2
الحلاقة الكهربائية	زوج من ملاقط NR. 5
قفازات	مقص لتشريح كليل
70 ٪ (V / V) الايثانول	المقص الصغير
براعم القطن أو الصوف / البصر	6.0 Prolene غير قابل للامتصاص خياطة
ستيريو المجهر	2 خ أصحاب الإبرة
شريط لاصق	الحرارة الوسادة
فون شعيرات فراي (،02-2،0 ز بالنسبة للفئران) (Stoelting)