Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Özet

Ayrılan Sinir Sakatlık hayvan modeli kalan sural sinir zedelemeden, siyatik sinirin kısmi denervasyon aşağıdaki tibial ve peroneal sinir dallarının lezyon periferik nöropatik ağrı bir fare modeli olarak burada açıklanmıştır. Mekanik allodini kaynaklanan davranış değişikliği von Frey filamentler miktarı.

Özet

Periferik nöropatik ağrı, travma, periferik sinir sisteminin duyu sinirleri neden olabilir ağır bir kronik ağrı bir durumdur. Ayrılan sinir hasarı (SNI) modeli, nöropatik ağrı, mekanik allodini yani ağrı gibi belirtileri nedeniyle normalde acı bir cevabı provoke dokunsal uyaranlara yol açar [1].

Sural sinir değişmeden kalır ise SNI fare modelinde, siyatik sinir (tibial sinir ve peroneal sinir) üç şube iki ligasyonu içerir [2]. Lezyon sonuçları ayrılan sural sinir tarafından innerve pençe, lateral alanda belirgin aşırı duyarlılık. Fare olmayan çalışan yan bir kontrol olarak kullanılabilir. SNI modelinin avantajları yanıt sağlamlık ve uzman mikrocerrahi beceri gerektirmez.

Tekrarlayan pençe lateral alanına karşı bastırdı artan bükme kuvveti von Frey filamentler, test, mekanik ağrı yanıtı için eşik tarafından belirlenir [3] [4]. Filament tarafından uyarılan yalamaya ve / veya pençe flinching olumlu bir ağrı reaksiyonu, ani bir pençe geri çekilme olarak tanımlanır. Üç beş tekrarlayan uyaranlara olumlu bir yanıt ağrı eşiği olarak tanımlanır.

Video protokolü gösterdiği gibi, C57BL / 6 fareler cerrahi sonrası gün olarak en erken zamanda derin allodini deneyim ve birkaç hafta boyunca bu korumak.

Protokol

1. Ameliyat öncesinde von Frey başlangıç ​​ölçümleri

Von Frey test prosedürü için, bölüm 5'e bakınız.

2. Anestezi / hazırlık

1. Hayvanların anestezi (ketamin ve 15 mg / kg Xylazine 100mg/kg bir karışımı intraperitoneal).
2. Tam anestezi (örneğin, bir kağıt havlu ile örtülü) kadar sakin bir yerde hayvan yerleştirin.
3. Bir cımbız ile kuyruk ucu ve pençeleri pinching refleksleri kontrol edin. Devam etmeden önce hayvanlar tepkisiz emin olun.
4. Deri altına (arka omuz bölgesi), antibiyotikler örneğin ampisilin (bu küçük bir cerrahi işlem olmasına rağmen, dehidratasyonu önlemek ve enfeksiyonu önlemek için) 0.5 ml izotonik tuzlu su enjekte.
5. Bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak, diz, kalça bölgesine hafifçe altında ameliyat alanında tıraş (sol arka bacak sağ elini kullanan kişiler için tavsiye edilir).
6. Pamuk tomurcuk gözleri oftalmik merhem uygulayın.
7. Sağ tarafta hayvan yerleştirin ve sol hindlimb yüksekte tutmak için küçük bir platform üzerine yerleştirin. Bacak yapışkan bant ile sabitleyin.
8. , Cerrahi sitesini etanol ve betadin scrubs alternatif ile ameliyat alanında dezenfekte edin.

3. Cerrahi

1. Sol elin başparmağı ile diz bulun ve bir uygulama yapmak için bir neşter kullanabilirsiniz. 1 cm'lik kesi, diz proksimal boyuna.
2. Bir çift steril makas ucu künt diseksiyon cilt açın.
3. Künt diseksiyon tarafından açıkça görülebilir bir kan damarı yanında kas tabakası ayırın, uyluk kemiği (femur) yakın. Eğer doğru yapılırsa, kas tabakaları kolayca kasları sağ altında siyatik sinir açığa herhangi bir kanama olmadan ayrı olacaktır.
   Kanama örneğin diz yakın bir kan damarı hasar oluşursa, kan emmek için steril pamuk tomurcukları veya bakışın parçaları kullanın. Kanama durana kadar basın.
4. Stereo mikroskop altında fare yerleştirin ve dikkatli bir şekilde steril bir pens (nr. 2) bir çift ile siyatik sinir görselleştirmek için kasları ayrı. Retraktörler de uygulanabilir.
5. Siyatik sinir sural sinir dallarının alanı belirleyin. Sural sinir, sol bacak sağ dallanma, üç şube küçüğüdür.
6. Sütür (6-0 dikiş), hala, (tibial ve peroneal sinirler) paralel olarak çalışan sural şube dokunmak için çok dikkatli olmak diğer iki dal etrafında uygulayın. Sural sinir tamamen bozulmadan bırakılmalıdır Bu önemli bir adım.
7. Sıkı bir cerrahi düğüm olun. Ilk düğümü sıkı ise, bacak kasılmaları görülecektir.
8. Bir cımbız (nr. 5) ile dikiş altında kesilebilir sinirleri alın ve küçük bir çift makas ile cımbız, altında ve üstündeki sinirleri kesmek. Ilk bakışta, cımbız çifti üzerinde kesme, sinirlerin çekerek kaçınılmalıdır.
9. Mikro makas bir çift sütür uçları kesilmiş ve kas tabakası yavaşça kapatın. Lidokain, cerrahi knot ile yara ve dikiş için bir damla ekleyin.

4. Ameliyattan sonra

1. Göz merhemi yine de yeterli olup olmadığını kontrol edin.
2. Fare, rahat bir duruş bir kağıt havlu altında temiz bir kafes yerleştirin. Oda soğuk ise, (sadece hayvan olarak kafesin parçası altında tercih eğer daha soğuk bir alana kaçmak gerekir) bir parçası kafesin altında bir ısı pedi yerleştirin.
3. Kolay erişilebilir su ve chow olun.

5. von Frey testi (bazal ve ameliyattan bir gün sonra)

1. Bir tel örgü tablo, iki gün ve ameliyattan bir gün önce yerleştirilmiş kırmızı renkli plastik silindir fareler yerleştirin. 15 dakika önce silindir test için alıştırarak. Silindir kırmızı renk farelerin birbirlerini görmek ve daha karanlık bir alan olarak hızlı bir şekilde rahatlamak için yardımcı olur.
2. Fareler sakin olduğundan emin olun ve pençe lateral kısmı von Frey filamentler geçerlidir: 0.02 g filament ile başlayarak, ilk 30 saniye (uyaran başına yaklaşık 2 saniye) toplam süre içinde beş kez sol pençe kuvveti uygulamak ve Her uygulamadan sonra farenin tepki ölçmek. Aynı filament ve herhangi bir diğer farelerin sol pençe tekrarlayın ve sonra bir sonraki filament, örneğin geçmeden önce, ilk fare sağ pençe ile tekrar baştan başlamak:
   
   • Fare 1: sol pençe filament 0,02 g 5 kez
   • Mouse 2: sol pençe filament 0,02 g vb 5 kez
   • Fare 1: sağ pençe filament 0,02 g ile 5 kez
   • Mouse 2: sağ pençe filament 0,02 g vb ile 5 kez
   • Fare 1: sol pençe filament 0,04 g 5 kez
   • Mouse 2: sol pençe filament 0,04 g vb 5 kez
3. Üç beş uyaranlara yanıt olumlu bir tepki olarak kabul edilir. Threshol yukarıda filamentlerd eşik düzeyini doğrulamak için uygulanabilir.
   Tepki = ani pençe çekilmesi, yalama ani flinching, ani pençe.

6. Temsilcisi sonuçları

Şekil 1: 8-10 hafta eski C57BL / 6 farelerin yaş Von Frey test çalışması için 1 gün önce yapılmış ve tekrar tekrar ameliyat takip ediyordu . Her bir grupta 4-8 hayvanlar dahil edildi. Ameliyatlı tarafta Von Frey test ipsilateral tarafından temsil edilir ve non-kumanda tarafındaki kontralateral tarafından temsil edilmektedir. Olmayan çalışan sahte çalışan farelere göre sadece biraz etkilenen ise gün ameliyat sonrası hayvanlar çalışan pençe üzerinde önemli bir duyarlılık geliştirmesi. (* <0.05, ** <0.01, *** <0.001, kontralateral için ipsilateral).

Tartışmalar

Kritik adımlar

Sural sinir hasar tibial ve peroneal sinirlerin sağlam sural sinir yaralanma sonrası patolojik değişiklikler araştırmak için kaçınılmalıdır. Kollateral hasar sural sinir felce yol açabilir ve böylece çalışan arka bacak sürükleyerek olarak görünür olabilir.

Sadece pençe lateral tarafında ayrılan sural sinir tarafından innerve ve dolayısıyla, bu alanda sadece nöropati gelişir. Güçlü bir önyargı değişmiş mekanik eşik değerlendirme transeksiyon sinirler tarafından innerve diğer alanlarda Test.

Olası değişiklikler

[5] ligasyonu diğer türleri gibi kronik daralma yaralanma gibi periferik sinir hasarı sonrası patolojik ağrı durumları, eğitim açısından tamamlayıcı olabilir veya kısmi sinir ligasyonu [6]. Önce ameliyat sonrası test düşünülmelidir farklı fenotipik değişiklikler her deneysel işlemin sonuçları.

Ayrıca, termal hiperaljezi gibi diğer duyusal testler, bu fenotip, daha sağlam aşağıdaki SNI olmasına rağmen [7] uygulanan olabilir.

Gelecekteki uygulamalar

Bu teknik, mekanik allodini geliştirme ya da bakım yapıcı ilaçların test edilmesi için kullanılabilir [8]. Analizi siyatik sinir, dorsal kök gangliyon (DRG) ve / veya lomber spinal kord kaynaklı fenotip moleküler mekanizmaları araştırma sorumlu izin verir.

Iyi laboratuvar uygulamaları ile tam bir uyum içinde, Danimarka ve Avrupa yönetmeliklerine uygun olarak hayvan deneyleri yapıldı. Tüm deneyler kapsamında Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği, Adalet Bakanlığı (izin numarası 2006/561-1206) tarafından kabul edildi.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anestezi: Ketamin ve Xylazine	Skalpel
Oftalmik merhem	Cımbız nr eşleştirme. 2
Tıraş makinesi	Cımbız nr eşleştirme. 5
Eldiven	Künt diseksiyon makas
% 70 (v / v) etanol	Mikro makas
Pamuk-yün tomurcukları / bakışları	6.0 Prolen emilmeyen dikiş
Stereo mikroskop	2 x iğnelikler
Yapışkan bant	Isı pedi
von Frey filamentler (0,02 - 2,0 gr, fareler için) (Stoelting)