JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Protocol
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تقدم هذه الورقة مقاربة الجمع بين المسح الضوئي ليزر ضوئي مع تسجيلات خلية كاملة في الفئران المعدلة وراثيا معربا عن GFP في الخلايا العصبية المثبطة محدودة السكان. هذه التقنية تسمح لرسم الخرائط والتحليل الكمي واسعة النطاق للدوائر المحلية متشابك من الخلايا العصبية المثبطة محددة القشرية.

Abstract

الخلايا العصبية المثبطة وظيفة ذات أهمية حاسمة لالقشرية. انهم يشكلون حوالي 20٪ من مجموع السكان العصبية القشرية، ويمكن تقسيمها إلى مزيد من الأنواع الفرعية المختلفة على أساس المورفولوجية الخاصة بهم، مناعى، والخصائص الفسيولوجية 1-4. على الرغم من أن الأبحاث السابقة كشفت الكثير عن الخصائص الذاتية للفرد من أنواع الخلايا العصبية المثبطة والمعرفة عن صلاتهم الدوائر المحلية لا تزال محدودة نسبيا 3،5،6. بالنظر إلى أن تتشكل وظيفة كل عصبون المرء عن طريق مساهمتها متشابك مثير والمثبطة داخل الدوائر القشرية، لقد تم مسح ضوئي باستخدام الليزر (LSPS) لاتصالات خريطة الدوائر المحلية لأنواع الخلايا المثبطة محددة. مقارنة التحفيز الكهربائي التقليدية أو الغلوتامات التحفيز نفخة، LSPS لديه مزايا فريدة تسمح لرسم الخرائط والتحليل الكمي واسعة من المدخلات الفنية المحلية على الخلايا العصبية بشكل فردي سجلت 3،7-9. الليزر الصورةالتحفيز عن طريق uncaging الغلوتامات ينشط الخلايا العصبية بشكل انتقائي perisomatically، دون تفعيل محاور عصبية من التشعبات أو مرور البعيدة، والتي تضمن قرار التعيين الفرعية الصفحي. هي مناسبة تماما لحساسية وكفاءة المدخلات لرسم الخرائط LSPS من مواقع عديدة على مدى التحفيز منطقة كبيرة لتحليل الدوائر القشرية.

هنا نقدم أسلوب LSPS جنبا إلى جنب مع خلية كاملة التصحيح للقط المحلية رسم خرائط الدوائر المثبطة. ومما يسهل من التسجيلات استهدفت أنواع الخلايا المثبطة محددة عن طريق استخدام الفئران المعدلة وراثيا معربا عن البروتينات الفلورية الخضراء (GFP) في الخلايا العصبية المثبطة محدودة السكان في القشرة 3،10، والتي تمكن من أخذ عينات تتفق أنواع الخلايا المستهدفة وتحديد واضح للأنواع الخلايا سجلت . أما بالنسبة لرسم الخرائط LSPS، ونحن الخطوط العريضة لنظام الأجهزة، ووصف الإجراء التجريبي والحصول على البيانات، وتقديم أمثلة على رسم خرائط الدوائر الابتدائية في الماوس somatosensory القشرة. كما هو موضح في تجاربنا، يتم تنشيط الغلوتامات في قفص في منطقة محدودة مكانيا من شريحة الدماغ عن طريق التحلل الضوئي ليزر الأشعة فوق البنفسجية؛ متزامنة الجهد المشبك التسجيلات تسمح كشف ضوئي-استجابات متشابك. يتم إنشاء خرائط لمدخلات متشابك مثير أو المثبطة إما إلى الخلايا العصبية المستهدفة عن طريق المسح الضوئي شعاع الليزر لتحفيز مئات المواقع المحتملة قبل المشبكي. وهكذا، يمكن LSPS بناء خرائط تفصيلية للمدخلات متشابك تؤثر على أنواع معينة من الخلايا العصبية المثبطة من خلال التجارب المتكررة. أخذت معا، هذه التقنية على أساس ضوئي يقدم علماء الأعصاب أداة قوية لتحديد التنظيم الوظيفي للدوائر المحلية القشرية.

Protocol

1. الدماغ شريحة إعداد

  1. تخدير الفئران المعدلة وراثيا هي بعمق مع الصوديوم بنتوباربيتال (> 100 ملغ / كغ، والملكية الفكرية) وقطع رأسه بسرعة، وانتزعت أدمغتهم في حل القطع المجمدة والاوكسيجين.
  2. وتستخدم نظارات GFP لفحص البصر إذا مخ الفأر عن الواقع GFP.
  3. يتم قطع الفروع القشرية الحسية الجسدية الأولية من 400 ميكرون سميكة مع vibratome في السكروز التي تحتوي على السائل المخي الشوكي الاصطناعي (ACSF). يتم تحضين شرائح 1 في ACSF-السكروز التي تحتوي على لمدة 30 دقيقة إلى 1 ساعة عند 32 ° C، وبعد فترة الحضانة الأولية، ونقل إلى ACSF تسجيل في درجة حرارة الغرفة. في جميع أنحاء الحضانة والتسجيل، وانفجر بشكل مستمر مع شرائح 95٪ O 2 -5٪ CO 2.

2. معدات بدء التشغيل

ويتضح تنفيذ نظام شامل في الشكل 1.

  1. نظام التبريد بالليزر ومزود الطاقة turneد على، والحصول على استعداد ليزر.
  2. يتم تشغيل كافة الأجهزة المتصلة بمكافحة ضوئي (بما في ذلك نظام مرآة المسح الضوئي، المغير الضوئي، وهو مصراع الإلكترونية ومكبر للصوت الإدخال الثنائي الضوئي) على.
  3. تشغيل المعدات الكهربية (بما في ذلك مكبر للصوت ل700B Multiclamp وmicromanipulators) على. تتم التسجيلات الكهربية، ضوئي، والتصوير من الأعمال التحضيرية في شريحة شريحة غرفة نضح شنت على المسرح الآلية من المجهر.
  4. يتم تشغيل الكاميرا التصوير (Retiga 2000، Q-التصوير، أوستن، تكساس) على. وتصور شرائح المجهر تستقيم مع (BW51X، أوليمبوس) مع الأشعة تحت الحمراء الفرق المقابل تدخل (DIC) وبرنامج التحصين الموسع، الفلورسنت البصريات من خلال نظام التصوير.
  5. يتم بدء تشغيل برنامج ماتلاب EPHUS القاعدة وQ-برنامج الكاميرا التقاط ما يصل. وهناك نسخة مخصصة معدلة من البرمجيات Ephus (Ephus، متاحة على https://openwiki.janelia.org/ </ A>) يستخدم للسيطرة على بروتوكولات ضوئي والحصول على البيانات ضوئي.
  6. بعد النظام في وضع التشغيل، ينبغي للمرء أن تحقق لمعرفة ما إذا كان نظام ضوئي بالليزر هو في حالة عمل. كما يتم استخدام المجهر الهدف 4X لتقديم ومضات أشعة فوق البنفسجية لuncaging الغلوتامات، يمكن وضع قطعة من الورق الأبيض تحت لمراقبة نمط المسح الضوئي ليزر في حين أن نظام تشغيل.

3. إنشاء شريحة نضح

  1. يتم تشغيل نظام نضح الضغط على لتغذية ACSF تسجيل في غرفة شريحة. والحرص على ضمان مستوى ثابت من السوائل 2.0 مم فوق شريحة في القاعة.
  2. يتم إضافة قسامة من محلول المخزون من MNI-الغلوتامات، في قفص إلى 25 مل من تعميم ACSF لتركيز 0.2 ملم الغلوتامات في قفص. يرجى ملاحظة أن بعد 5-6 ساعات من التجريب، سيتم تحديث الحل حمام وMNI الغلوتامات.
  3. يتم نقل شريحة الدماغ إلى غرفة تسجيل. يمكن للمرء تشغيل ليالي التصويرystem للتحقق من الجودة وتحديد شريحة تشريحيا المنطقة الحسية الجسدية الأولية. ثم يرتكز على شريحة مع عصابة حسب الطلب البلاتين الوترية. يجب الحرص على عدم وضع مرساة على المنطقة المخصصة للتسجيلات الدماغ.

4. كله خلية التصحيح لقط تسجيل

  1. يتم سحب أسلاك الزجاج (4-6 المقاومة MΩ) ومليئة حلا الداخلية التي تحتوي على 0،1٪ biocytin لوضع العلامات وتحديد الخلية المورفولوجية.
  2. لأداء تسجيل التصحيح، وتصور الخلايا في الهدف 60X. وأول من عرف أنواع الخلايا المثبطة واختيارها على أساس التصور التعبير GFP تحت المجهر أوليمبوس DIC / الفلورسنت، و تجرى في وقت لاحق التسجيلات المرئية تحت السيطرة بمساعدة الأشعة تحت الحمراء رصد الفيديو DIC. يرجى ملاحظة أن عدة مرات من التبديل بين أوضاع DIC والفلورسنت ضروري لتأكيد موقع الخلية في حين تقترب GFP القطب إلى الخلية المستهدفة.
    3. التقليدية التصحيح لقط التقنيات. انتقل يتم تعبئة القطب مع ضغط موجب، على مقربة من سطح الخلية لإنشاء الدمل ملحوظ على غشاء الخلية المستهدفة، ويتم تطبيق الضغط بسرعة ثم سلبية لتشكيل gigaseal وكسر في حين رصد ردود حقن الحالي على شاشة فيديو.
  3. على كسر في، يتم أخذ الصور للخلية في 60X تحت سائط DIC والفلورية للتحقق على الخط. قبل جمع البيانات ضوئي، يتم حقن hyperpolarizing وإزالة إستقطاب البقول الحالي لدراسة خصائص كل خلية في الكهربية الأساسية.
  4. وتتحقق مرة واحدة مستقرة تسجيلات خلية كاملة مع المقاومة وصولا جيدا (عادة <20 MΩ)، يتم فيها تشغيل المجهر الهدف من 60X إلى 4x ضوئي ليزر المسح. ويتم الحصول على صورة شريحة 4x وسوف تستخدم لتوجيه وتسجيل مواقع ضوئي.

5. الليزر هيئة السلع التموينيةnning ضوئي

  1. يتم تعيين المعلمات اقتناء ضوئي والبيانات من خلال تفعيل وحدة التبديل تكوين Ephus. عادة، يتم استخدام الليزر 1 مللي ثانية (20 ميغاواط) مع فاصل زمني التحفيز من 1 ثانية لرسم خرائط ضوئي. يتم الحصول على البيانات من 1 ثانية آثار عينات في 10 كيلوهرتز.
  2. يتم تحميل صورة شريحة 4X داخل الوحدة النمطية معين من Ephus. ويعرف موقع سوما الخلية، ويتم تعيين مواقع ضوئي من نمط 16X16 (80 ميكرومتر ميكرومتر تباعد X 80) في كل أنحاء موقع الخلية، التي تغطي جميع الطبقات القشرية.
  3. يتم تعيين الملف استثارة الخلايا العصبية سجلت عن طريق فحص المواقع ارتفاعه ردا على ضوئي في وضع المشبك الحالي. لدينا برنامج إلكتروني سهل الاستخدام مع ميزات عرض على الانترنت يسهل التجارب رسم الخرائط.
  4. يتم تعيين الدائرة المحلية اتصالات مثير من خلال الكشف عن التيارات بعد المشبكي مثير (EPSC) من الخلية بينما سجلت الليزر المسح الضوئي في مختلفالمواقع. يقام الخلية في -70 بالسيارات في وضع المشبك الجهد للكشف عن التيارات مثير الداخل. وتتكرر الخرائط EPSC 2-3 مرات مع استدارة أو انعكاس ضوئي نمط.
  5. اختياري: الدائرة المحلية اتصالات المثبطة يمكن تعيينها أيضا من خلال الكشف عن التيارات بعد المشبكي المثبط (IPSC) من الخلية مسجل عقد في وثيقة إلى 0 بالسيارات في وضع المشبك الجهد للكشف عن التيارات المثبطة الخارج. ملاحظة أنه من الأفضل استخدام القطب الكهربائي الحل الداخلي مع البوتاسيوم السيزيوم استبدال لرسم خرائط IPSC.
  6. بعد الانتهاء من جميع المقايسات الفسيولوجية، تتم إزالة بلطف القطب من الخلية مسجل. يتم أخذ شريحة من الدماغ وإصلاحها في بارافورمالدهيد 4٪ بين عشية وضحاها. اتسخت الخلايا سجلت ضد biocytin. يتم فحص شكل الخلية مع المجهري متحد البؤر أو الفلورسنت برنامج التحصين الموسع، وهو ما يؤكد أيضا أن كل خلية هي في الحقيقة سجلت عصبون، معربا عن GFP استهدفت في الأصل.

6. Photostimulatأيون تحليل البيانات

يتم تطبيق منهجية تم تطويرها حديثا لدينا وتنفيذ البرامج 11 إلى كشف وقياس الأحداث ضوئي-أثار متشابك في خرائط البيانات الخام. كما يتضح في الشكل 2، هي التي شيدت مرمزة الخرائط لتوضيح نمط متشابك من المدخلات إلى الخلايا العصبية المسجلة.

7. ممثل النتائج:

وتظهر النتائج مثال على تسجيل الكهربية ورسم الخرائط ضوئي في الشكل 2. واستهدفت تسجيلات من أنواع الخلايا المثبطة محددة ممكن باستخدام الفئران المعدلة وراثيا معربا عن GFP في أنواع الخلايا المثبطة المعروفة. نظرا لتنوع interneurons المثبطة، يتم الجمع بين تحليلات التعبير GFP، الكهربية الذاتية والصفات المورفولوجية (الشكل 2A) للوصول إلى التصنيف النهائي الخلية نوع. الرقم 2B-C توضيح أن ضوئي ليزر المسح يسمح لرسم خرائط واسعة من cortic المحليةشركة اتصالات الدائرة لالخلايا العصبية المثبطة واحد. يظهر مخطط البيانات الخام في الشكل 2C. ويستثنى من الردود uncaging مباشرة من تحليل البيانات (الشكل 2C). الخرائط الإدخال الكمي ومرمزة، هو موضح في الشكل 2D-F. تلقت سبيل المثال سريع التشويك المثبطة interneurons قوية مدخلات متشابك مثير (EPSCs) من طبقة 4 و الطبقات العميقة. عن طريق ربط المنظمة الخلية المدخلات متشابك لمسارات محددة القشرية، ونحن قادرون على استنتاج دورها ممكن (على سبيل المثال، وردود الفعل وتثبيط feedforward) في معالجة المعلومات القشرية.

figure-protocol-8666
الشكل 1. الأجهزة العامة نظام ليزر ضوئي المسح. لدينا نظام التحكم الشامل يتكون من ضوئي، تصوير الفيديو، وأنظمة تسجيل الكهربية. اعتمدنا في تصميم نظام LSPS سبق وصفها 7،17. يتم استخدام وحدة لتوليد الليزر 355 نانومتر الأشعة فوق البنفسجية لاسإيه لuncaging الغلوتامات. يتم توجيه شعاع الليزر من خلال مسار بصري لنظامنا. يتم التحكم باستخدام المغير الكهربائية الضوئية (أي pockels الخلية) ومفتاح ميكانيكي - فترات قصيرة من ومضات ليزر (3 مللي سبيل المثال، 1). شعاع الليزر الطاقة عن طريق التضمين عجلة التدرج الكثافة محايدة ورصد من خلال تحويل جزء صغير من شعاع الليزر مع ساترة الزجاج إلى الثنائي الضوئي. نظام المسح الضوئي ليزر يتضمن زوج من المرايا XY المسح، مسح العدسة، العدسة أنبوب، وعدسة الهدف. المرايا تسليم شعاع الليزر من خلال عدسة المسح الضوئي، ثم يدخل شعاع المجهر عبر مرآة مزدوج اللون ويتركز بواسطة عدسة مصنوعة خصيصا أنبوب الأشعة فوق البنفسجية الإرسال. شعاع underfills الفتحة الخلفي من الهدف المجهر لتوفير مزيد من عمودي (في مقابل المخروطية) إلقاء الضوء شعاع، والحفاظ على رسم الخرائط ثنائية الأبعاد وممكن عن طريق الحد من القرار المحوري. في إطار الهدف 4X، شعاع الليزر تشكل البقع uncaging، كل approximatiنانوغرام لمحة جاوس مع عرض من 153 ميكرومتر أفقيا في المستوى البؤري (انظر إدراج). ويمكن تحقيق العديد من المناصب تحفيز الليزر من خلال المرايا الجلفانومتر يحركها المسح XY، والمرايا وفتحة الخلفي من الهدف في الطائرات المتقارن، ترجمة مواقع مختلفة في مرآة مواقع المسح في الطائرة عدسة الهدف التنسيق. خلال uncaging، يتم تحفيز عدد متغير من نمط المواقع التي تغطي المجال الكامل بالتتابع في nonraster، اعشوائي تسلسل لتجنب إعادة النظر في محيط مواقع حفز مؤخرا. يرجى الرجوع إلى شو وآخرون (2010) للحصول على معلومات أكثر تفصيلا.

figure-protocol-10439
الشكل 2. رسم الخرائط المحلية الاتصالات الدائرة مثير لعصبون السريعة التشويك، معربا عن GFP في طبقة القشرة 4 من الماوس الحسية الأولية. A1 و A2 عرض الصور وDIC الفلورسنت GFP للخلية المستهدفة تحت 60Xالهدف في شريحة الدماغ المعيشة، في حين A3 يبين شكل الخلية التي كشفت عنها تلطيخ biocytin في شريحة، بعد تسجيل الثابتة. A4 يوضح أنماط إطلاق الخلية GFP مسجل، سمة من عصبون السريعة التشويك المثبطة، واستجابة لحقن الحالي intrasomatic من نقاط القوة مختلفة. B تظهر صورة شريحة فرضه مع 16 موقعا ضوئي بسرعة x16 (*). يشار إلى موقع الخلية بواسطة دائرة حمراء صغيرة. C يظهر مجموعة من آثار استجابة ضوئي-أثار من المواقع التحفيز هو مبين في B، بينما عقدت خلية في -70 بالسيارات للكشف عن التيارات مثير الداخل. ويوضح أشكال مختلفة من الاستجابات ضوئي من آثار في مواقع 1 و 2، والذي يتم توسيع وتظهر بشكل منفصل في إدراج. تتبع 1 هو مثال للردود مباشرة (المشار إليها بواسطة رؤوس سهام الحمراء) إلى الغلوتامات uncaging على جسم الخلية والتشعبات promximal. آثار أخرى في 2 أمثلة نموذجية من متشابك مثير فيوضع استجابات (الأزرق). ويمكن تمييز الاستجابات المباشرة والمدخلات متشابك من سعة والإختفاء الاستجابة. D، E و F هي خرائط ملونة (16X16 المواقع) من متوسط ​​السعة EPSC، الأرقام EPSC، وأول الكمون EPSC الكشف في الموقع، على التوالي، للبيانات الخام هو مبين في الخريطة C. اتساع المدخلات المتوسط ​​من كل موقع التحفيز هو السعة متوسط ​​EPSCs في إطار التحليل، مع استجابة عفوية خط الأساس تطرح من الاستجابة ضوئي من نفس الموقع. كما يتم قياس عدد EPSCs ووقت الوصول أو الكمون من EPSC أول اكتشاف في الموقع وتآمر. يرجى الرجوع إلى (شي وآخرون، 2010) لمزيد من التفاصيل.

Discussion

وقد تم تعيين ضوئي تقنيات القائمة على التطبيق الفعال لتحليل الدوائر القشرية. ليزر ضوئي مسح جنبا إلى جنب مع تسجيل خلية كاملة يسمح رسم الخرائط عالية القرار من توزيعات الصفحي من مصادر إدخال الخلايا العصبية قبل المشبكي إلى واحد، وذلك لأن وقت واحد تسجيل من الخلايا العصبية...

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

نشكر تران هيونه، أندرو سان أنطونيو، لين جيري للحصول على المساعدة التقنية. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح DA023700 وDA023700-04S1 إلى XX

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة كتالوج رقم تعليقات
خطوط الماوس المعدلة وراثيا جاكسون المختبر أو من مصادر أخرى يرجى الرجوع إلى وكلوي شو (2009)
نظارات GFP BLS المحدودة، المجر
vibratome نظم ايكا VT1200S
MNI الغلوتامات في قفص (4-ميثوكسي-7-nitroindolinyl-L-الغلوتامات في قفص) العلوم البيولوجية Tocris، Ellisville، MO القط رقم 1490
biocytin B4261
القطب مجتذب سوتر الصك، نوفاتو، CA P-97
أنابيب الزجاج لصنع أقطاب كهربائية BF150-86-10
Multiclamp مكبر للصوت 700B الجزيئية الأجهزة، سانيفيل، CA Multiclamp 700B
الكاميرا الرقمية CCD Q-التصوير، أوستن، TX Retiga 2000
البحث المجهر أوليمبوس، طوكيو، اليابان BW51X
UV وحدة الليزر DPSS الليزر، سانتا كلارا، كاليفورنيا نموذج 3501
غيرها من معدات ليزر المسح phostimulation يرجى الرجوع إلى شو وآخرون (2010)

الحلول:

  • السكروز التي تحتوي على السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF) لقطع شريحة (في ملي: 85 كلوريد الصوديوم، و 75 السكروز، 2.5 بوكل، 25 الجلوكوز، 1.25 ناه 2 PO 4، 4 MgCl 2، 0،5 CaCl 2، و 24 NaHCO 3).
  • تسجيل ACSF (في ملي: 126 كلوريد الصوديوم، 2.5 بوكل، 26 NaHCO 3، 2 CaCl 2، 2 MgCl 2، 1،25 ناه 2 PO 4، والجلوكوز 10)
  • الحل الكهربائي الداخلي (في ملي: 126 K-غلوكونات، 4 بوكل، 10 HEPES، 4 ATP-المغنيسيوم، 0.3 GTP نا، وفسفوكرياتين 10؛ درجة الحموضة 7.2، 300 الميلي أسمول).

References

  1. Ascoli, G. A. Petilla terminology: nomenclature of features of GABAergic interneurons of the cerebral cortex. Nature. 9, 557-568 (2008).
  2. Markram, H. Interneurons of the neocortical inhibitory system. Nature. 5, 793-807 (2004).
  3. Xu, X., Callaway, E. M. Laminar specificity of functional input to distinct types of inhibitory cortical neurons. J Neurosci. 29, 70-85 (2009).
  4. Xu, X., Roby, K. D., Callaway, E. M. Immunochemical characterization of inhibitory mouse cortical neurons: three chemically distinct classes of inhibitory cells. J Comp Neurol. 518, 389-404 (2010).
  5. Dantzker, J. L., Callaway, E. M. Laminar sources of synaptic input to cortical inhibitory interneurons and pyramidal neurons. Nat Neurosci. 3, 701-707 (2000).
  6. Yoshimura, Y., Callaway, E. M. Fine-scale specificity of cortical networks depends on inhibitory cell type and connectivity. Nat Neurosci. 8, 1552-1559 (2005).
  7. Shepherd, G. M., Pologruto, T. A., Svoboda, K. Circuit analysis of experience-dependent plasticity in the developing rat barrel cortex. Neuron. 38, 277-289 (2003).
  8. Weiler, N., Wood, L., Yu, J., Solla, S. A., Shepherd, G. M. Top-down laminar organization of the excitatory network in motor cortex. Nat Neurosci. 11, 360-366 (2008).
  9. Xu, X., Olivas, N. D., Levi, R., Ikrar, T., Nenadic, Z. High precision and fast functional mapping of cortical circuitry through a combination of voltage sensitive dye imaging and laser scanning photostimulation. J Neurophysiol. 103, 2301-2312 (2010).
  10. Xu, X., Roby, K. D., Callaway, E. M. Mouse cortical inhibitory neuron type that coexpresses somatostatin and calretinin. J Comp Neurol. 499, 144-160 (2006).
  11. Shi, Y., Nenadic, Z., Xu, X. Novel use of matched filtering for synaptic event detection and extraction. PLoS ONE. 5, e15517-e15517 (2010).
  12. Boyden, E. S., Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G., Deisseroth, K. Millisecond-timescale genetically targeted optical control of neural activity. Nat Neurosci. 8, 1263-1268 (2005).
  13. Kuhlman, S. J., Huang, Z. J. High-resolution labeling and functional manipulation of specific neuron types in mouse brain by Cre-activated viral gene expression. PLoS ONE. 3, e2005-e2005 (2008).
  14. Petreanu, L., Huber, D., Sobczyk, A., Svoboda, K. Channelrhodopsin-2-assisted circuit mapping of long-range callosal projections. Nat Neurosci. 10, 663-668 (2007).
  15. Petreanu, L., Mao, T., Sternson, S. M., Svoboda, K. The subcellular organization of neocortical excitatory connections. Nature. 457, 1142-1145 (2009).
  16. Cardin, J. A. Driving fast-spiking cells induces gamma rhythm and controls sensory responses. Nature. 459, 663-667 (2009).
  17. Shepherd, G. M., Svoboda, K. Laminar and columnar organization of ascending excitatory projections to layer 2/3 pyramidal neurons in rat barrel cortex. J Neurosci. 25, 5670-5679 (2005).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

56 uncaging GFP interneurons

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved