JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Platelet transfusion and hemostasis was modeled using blood reconstitution and microfluidic flow chambers to investigate the function of blood banking platelets. The data demonstrate the consequences of platelet storage lesion on hemostasis, in vitro.

Abstract

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of (indirect) in vitro experiments, but none of these is as comprehensive as microfluidic flow chambers. In this protocol, the reconstitution of thrombocytopenic fresh blood with stored blood bank platelets is used to simulate platelet transfusion. Next, the reconstituted sample is perfused in microfluidic flow chambers which mimic hemostasis on exposed subendothelial matrix proteins. Effects of blood donation, transport, component separation, storage and pathogen inactivation can be measured in paired experimental designs. This allows reliable comparison of the impact every manipulation in blood component preparation has on hemostasis. Our results demonstrate the impact of temperature cycling, shear rates, platelet concentration and storage duration on platelet function. In conclusion, this protocol analyzes the function of blood bank platelets and this ultimately aids in optimization of the processing chain including phlebotomy, transport, component preparation, storage and transfusion.

Introduction

الارقاء يتطلب النشاط المشترك والمنظم للخلايا وبروتينات وأيونات والأنسجة في سياق الزمانية المكانية محدود 1. النشاط غير المنضبط قد يؤدي إلى نزيف أو تجلط الدم واعتلال أو وفيات في مجموعة من الاضطرابات المتعلقة تخثر الدم. والموائع الدقيقة تجربة غرفة التدفق هي تقنية الصعبة التي يحاكي الارقاء في المختبر. هذا النهج يتيح التحقيق للتفاعل معقدة من العمليات التي تشارك في الارقاء مع الدور القيادي للالصفائح الدموية.

بعد إصابة الأوعية الدموية والصفائح الدموية تلتصق البروتينات يتعرض مصفوفة تحت البطانة (غليكو) لمنع فقدان الدم. وبعد التصاق، الصفائح الدموية تنشط ومجموع ردا على صناعة السيارات وإشارات نظير الصماوي الأمر الذي يؤدي في النهاية إلى تشكيل شبكة الصفائح الدموية، استقرت الفيبرين ومما أدى إلى شركة، جرح ختم خثرة 2. وخلافا لمعظم غيرها من اختبارات وظائف الصفائح الدموية، من experiالإدلاء بالبيانات مع الدوائر تدفق تأخذ بعين الاعتبار المعلمة المادية من تدفق الدم وبالتالي تأثير الريولوجيا على الخلايا والجزيئات الحيوية 3،4 المشاركة.

وقد ولدت التجارب غرفة تدفق الأفكار بارزة في الارقاء وتجلط الدم عن طريق المعايير الأساسية التي تؤثر على وقف نزيف الدم (الفرعية) العمليات بما في ذلك مصفوفة لاصقة، الريولوجيا وتدفق ملامح، وتكوين الخلايا، ووجود السموم والمخدرات، والقوة الأيونية وغيرها الكثير متفاوتة. في العقدين الماضيين، وانخفاض الإنتاجية التجارب غرفة التدفق تتطلب كميات عينة كبيرة (10-100 مل) تطورت إلى غرف الموائع الدقيقة غالبا ما تتكون من غرف موازية لوحة صغيرة ودمج التكنولوجيا الحديثة لperfusing الدم الكامل في الظروف جدار القص تسيطر 5. Microscaling زادت بشكل ملحوظ فحص الإنتاجية لأن معظمهم من إعداد الجهاز ومبسطة ومطلوب أقل (الدم) حجم، مما يجعل تجربة أكثر سهولة وversatiجنيه. على سبيل المثال، والدم من الحيوانات المختبرية الصغيرة يمكن الآن أن تستخدم من دون الحاجة للتضحية الحيوانات. وهكذا ساعد عينات الدم من الفئران المعدلة وراثيا في تحديد الجزيئات الأساسية تعزيز أو إعاقة الارقاء والأفكار الأساسية رواية 6.

مختبرات الأبحاث المتخصصة في كثير من الأحيان لا تزال تستخدم غرف تدفق العرف على سبيل المثال من ثنائي ميثيل بولي سيلوكسان (PDMS) 7 أن يبلمر على القوالب مطبوعة بالحجر والتي يمكن صورت من قبل البرامج. غرفة الناتجة غير مكلفة، يمكن التخلص منها، ويمكن تفكيكها بسهولة عن التحليل اللاحق. وعلاوة على ذلك، في الأساس أي تصميم السفن، بما في ذلك التشعبات أو المنعطفات الحادة يمكن أن يبنى على الأوامر. هذه الميزة هي أيضا الجانب السلبي له منذ كان توحيد بالفعل المشكلة الرئيسية مع التجارب غرفة التدفق، وPDMS العرف وغرف لا ساعد هذا. على رأس هذه المسألة بالذات، طلاء (الشروط)، تحقيقات الفلورسنت، تخثر، درجة الحرارةerature والوقت بين أخذ العينات وتحليلها كلها سيئة موحدة 8. توحيد هذه المتغيرات هو أمر صعب، ولكن مع ذلك حاجة للسماح مقارنة النتائج بين المختبرات. هذا الموضوع هو الموضوع الرئيسي للجمعية الدولية على تجلط الدم وتخثر الدم في اللجنة الفرعية العلمية والتقييس على الجريانيات الأحيائية 9،10.

يتم نقل مركزات الصفائح الدموية (PC) في المرضى الذين يعانون من مختلف الأمراض التي تسبب نقص الصفيحات الدموية و / أو النزيف. لكن الصفائح الدموية في الكمبيوتر ومن المعروف أن توعي، وخاصة في وظيفة من الوقت تخزين 11، تدهور العملية مرتبطة الشيخوخة ويشار إلى آفة تخزين الصفائح الدموية. ويقال أحيانا أن هذه الصفائح استعادة المتداولة مرة واحدة المنقول 12، ولكن الدليل على ذلك هو ندرة. وعلاوة على ذلك، لا يتم اختبار وظائف الصفائح الدموية التي تشكل جهاز كمبيوتر بشكل روتيني وذلك لأن العلاقة بين هذه المقايسات وفعالية علاجية أو وقائية غير واضح 13. غرف تدفق الموائع الدقيقة توفر وسيلة لتحقيق وظائف الصفائح الدموية في جهاز الكمبيوتر لتحسين سلسلة من المناورات بين جمع وإصدار. وإنما هي أداة بحث قوية ل(الاقتران) مقارنات مباشرة من جهاز الكمبيوتر كما نشرنا سابقا 14،15 ويوصف هنا.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

يتبع هذا البروتوكول المبادئ التوجيهية الأخلاقية المؤسسية للبحث في العينات البشرية وتم الحصول على الموافقة المسبقة من جميع الجهات المانحة المعنية. تم الحصول على الموافقة لوصف التجارب هنا من مجلس المراجعة المؤسسية من مستشفى جامعة أنتويرب.

ملاحظة: مؤشرات درجة الحرارة هي دائما درجة حرارة الغرفة، ما لم يذكر.

إعداد 1. إعداد غرفة التدفق

  1. إعداد الممرات، الأنابيب ودبابيس
    1. دوامة تعليق الكولاجين بقوة وتمييع 1/20 في محلول الجلوكوز متساوي التوتر المقدمة من مزود إلى تركيز النهائي من 50 ميكروغرام / مل.
      ملاحظة: نحن نستخدم الخيول الكولاجين وتر، مصنوعة أساسا من النوع الأول الألياف. وفرسي نوع الكولاجين وأنا غالبا ما يشار إليها باسم "Horm" الكولاجين وهو المعيار الذهبي لهذا النوع من الفحص 9 لأسباب تاريخية وكذلك البيولوجية على حد سواء. ويمكن أيضا نوع البشري الثالث الكولاجين استخدامها، ولكن الالبريد الألياف معطف أقل جودة واستجابة الصفائح الدموية ليست قوية كما. ويمكن أيضا طلاء الأسطح الأخرى يمكن استخدامها، على سبيل المثال عامل فون ويلبراند (VWF)، الفيبرينوجين، فبرونيكتين، laminin، vitronectin، thrombospondin-1 أو مزيج من هذه 16.
    2. اتخاذ بيوشيب المتاح جديد من الحاويات الموفر. أبعاد biochips المستخدمة هنا هي 0.4W خ 0.1H س 20L في ملم 3.
    3. الماصة 0.8 ميكرولتر في حارة (ق) من بيوشيب ميكروفلويديك على نهاية واحدة من رقاقة وعلامة ك منفذ. تأكد من أن ممر شغل في 5/6 مع الكولاجين تحتوي على حل طلاء أعد 1.1.1. تأكد من عدم وجود فقاعات الهواء.
      والمغلفة القنوات جزئيا لتجنب تراكم ألياف الكولاجين في مدخل قناة (انظر المناقشة): مذكرة.
    4. احتضان عند 4 درجة مئوية لمدة 4 ساعات أو بين عشية وضحاها في وعاء ترطيب والمغلقة.
    5. منع القنوات المغلفة من قبل pipetting عازلة تمنع (1.0٪ (ث / ت) المصل البقري ألبومين لد 0.1٪ (ث / ت) الجلوكوز في 10 ملي 4- (2-هيدروكسي) حامض -1-piperazineethanesulfonic (HEPES) مخزنة المالحة (HBS؛ 0.9٪ (ث / ت) كلوريد الصوديوم، ودرجة الحموضة 7.4) في النهاية وعلامة أخرى كما المدخل. تأكد من أن ممر شغل تماما مع عازلة تمنع تجنب فقاعات الهواء.
    6. قطع الأنابيب في نفس الطول (12 سم). استخدام واحد لكل حارة وربط كل أنابيب مع دبوس. على سبيل المثال، فإن تجربة المقارنة بين اثنين من الظروف، تشغيل نسختين يتطلب أربعة تمتد أنابيب وأربعة دبابيس أن نكون مستعدين.
    7. شطف الأنبوب بالماء المقطر باستخدام محقنة وإبرة G 26 أو الروابط المرفقة.
    8. تشبع أنابيب مع عازلة تمنع. تخزينها في حاوية مغلقة وترطيب مدة لا تقل عن 1 ساعة.
  2. إعداد مضخة والمنوع
    1. شطف المضخة والمنوع مع الماء المقطر، وإزالة فقاعات الهواء.
    2. نضح عازلة تمنع من حارة بيوشيب (ق) باستخدام ثابت غيض 10 ميكرولتر عند مخرج. تنظيف سطحوبيوشيب مع الغبار الدقة مجانا مسح والكحول denaturated لإزالة بصمات والغبار.
    3. إصلاح بيوشيب على المسرح المجهر الآلي. إذا تم استخدام حارة أكثر من واحد في وقت واحد في تشغيل واحد، ربط ثماني حارات الخائن المتعددة لمنفذ بيوشيب.
      ملاحظة: الخائن المتعددة ثماني حارات هو قطعة من الأجهزة (الشكل S1) متصلا المضخة وبيوشيب. لأنها تتيح تشغيل جميع (ثمانية) الممرات المتاحة على بيوشيب أو مزيج من الممرات التي يمكن أن تكون في البرنامج المصاحب المعرفة من قبل المشغل.
    4. استخدام المسامير في أنابيب لاصلاحها في مدخل بيوشيب. وضع الطرف الآخر من الأنبوب (بدون دبوس) في 1.5 مل أنبوب اختبار المخروطية مليئة HBS. شطف جميع أنابيب وممرات متصلة مع 1 مل HBS باستخدام مضخة، وذلك لإزالة ما تبقى عازلة تمنع وضعيف التي تنضم الكولاجين.

2. إعداد عينات الدم

  1. جمع وفصلالدم الطازج كامل من المتطوعين الأصحاء. 17
    1. جمع ملليلتر الأولى من الدم في الأنابيب المفرغة التي تحتوي على ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الخل (EDTA) كمضاد للتجلط واستخدام حصرا هذه العينة لتعداد الدم الكامل (CBC) مع محلل أمراض الدم الآلي.
    2. جمع حجم الدم في تخثر مناسبة باستخدام الأنابيب المفرغة. مضادات التخثر القياسية للتجارب غرفة التدفق هي الهيبارين أو هيرودين عندما الفيبرين تشكيل ليست جزءا من بروتوكول الدراسة وسيترات الصوديوم عندما يكون.
      ملاحظة: تم استخدام الهيبارين كمضاد للتجلط لجميع التجارب وصفها في النتائج.
      ملاحظة: كمية الدم يعتمد على عدد من التجارب التي يتعين القيام بها. ما يقرب من 1 أنبوب (7 مل) لمدة 3 حارات.
    3. وضع أنابيب على محور دوار بانتظار إعادة الدم.
      ملاحظة: يجب الانتهاء من الفحص خلال 3 ساعة من الفصد.
    4. أجهزة الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 250 غرام لتحضير الصفائح الدموية البلازما الغنية (PRP). لا تستخدم استراحة للطرد المركزي لمنع اضطراب بيليه معبأة فضفاضة.
      1. عندما تم جمع أنبوب أكثر من واحد، تجمع الدم في أنبوب الطرد المركزي مخروطي الشكل واحد.
        ملاحظة: يمكن أن يتم الطرد المركزي ببطء أكثر أو أقل طويلة، اعتمادا على المحصول PRP والتفضيلية خلية "تلوث" المفضل.
    5. إزالة والتخلص من الحزب الثورى ومعطف الشهباء العائد خلايا الدم الحمراء محملة القليلة الصفائح الدموية.
      ملاحظة: عدد الصفائح الدموية في جزء الخلية الحمراء معبأة هو 13 ± 5 × 10 3 في ميكرولتر (يعني ± SD، ن = 12) في المتوسط ​​في أيدينا.
  2. إعادة إعماره الدم
    1. فصيلة الدم AB ذوبان الجليد (القرد D سلبي) البلازما عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق و 20 ثانية في 4 مل.
    2. تحديد الهيماتوكريت من خلايا الدم الحمراء معبأة أعد 2.1.5 باستخدام محلل أمراض الدم الآلي.
    3. تحديد تركيز الصفائح الدموية في بنك الدم أعدت الصفائح الدموية التركيز ثاتي سيتم استخدامها لإعادة بناء جزء الخلية الحمراء أعلاه.
    4. حساب حجم خلايا الدم الحمراء معبأة والتركيز الصفائح الدموية من شأنها أن تسفر عن 40٪ الهيماتوكريت و 250 س 10³ الصفائح الدموية / ميكرولتر في عينة 1 مل.
      ملاحظة: التتر الأخرى المستهدفة من الخلايا يمكن ضبط تعسفي، اعتمادا على بروتوكول الدراسة.
    5. نقل معبأة خلايا الدم الحمراء والبلازما في أنبوب جديد باستخدام طرف الماصة قص وإضافة الصفائح الدموية المركزة حتى يتم التوصل إلى حجم عينة من 1 مل.
      ملاحظة: اعتمادا على متغيرات الدراسة، يجب أن يكون جزء البلازما على قدم المساواة في جميع العينات تشكيلها بسبب البلازما له تأثير كبير على معدل تشكيل خثرة. على سبيل المثال، تكرار تجميد الذوبان أو البلازما المأخوذة من مختلف الجهات المانحة أو على مضادات التخثر مختلفة قد تؤثر على النتيجة.
    6. مزيج من الدم أعيد بلطف بواسطة قلب وإجراء CBC.
    7. إعداد "فارغة" العينة الضابطة التي يتم استبدال حجم جزء الصفائح الدمويةمن نفس الحجم من 0.9٪ (م / ت) كلوريد الصوديوم في الماء لتحديد تركيز الصفائح الدموية الذاتية (أي غير الدم الصفائح الدموية البنك) في الدم أعيد تشكيلها باستخدام CBC.
  3. وسم
    1. الماصة 1 مل أعادت الدم في أنبوب اختبار يحتوي على 1 ميكرولتر 5 ملي Calcein AM (5 ميكرومتر تركيز النهائي).
      ملاحظة: الأصباغ خلية أخرى يمكن استخدام 14.
    2. المزيج بلطف عكس.
    3. احتضان لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية قبل استخدامها.

3. الإرواء الفحص

  1. التركيز على الهدف على ألياف الكولاجين الالتزام في أسفل الممرات. من الناحية المثالية، استخدام إعدادات فرق التدخل النقيض (DIC) على النقيض من المرحلة أو لهذه الاستراتيجية التركيز. اختر 'Z الحالي تعيين لمناطق البلاط المختارة في البرنامج تجربة لإصلاح رقميا Z-الوظائف المختارة.
  2. تحديد المنطقة ذات الاهتمام (ROI) في حارة (س ص) في برنامج تجربة مicroscope التي سيتم تسجيلها خلال التجربة.
    ملاحظة: العائد على الاستثمار يمكن أن يكون أي مساحة مختارة عشوائيا داخل ممر الارواء. ومن المستحسن عدم لتحليل تشكيل خثرة على مقربة من في- ومخرج ممر وذلك لتجنب الآثار الجانبية لمحة تدفق متغير في تلك المنطقة، على الرغم من أن هذا هو صغير نسبيا. يجب أن تحتوي على مساحة العائد على الاستثمار في عدد كبير من الصفائح الدموية أو الجلطة الدموية للسماح تسوية للإشارة. في هذا البروتوكول العائد على الاستثمار هو مجموع مخيط رقميا من ثلاث صور متساوية الحجم جنبا إلى جنب مما أدى إلى 0.62 مم 2 في وسط 2 سم ممر طويل.
  3. خلط العينات بلطف عكس ووضع هذه بجوار بيوشيب على المسرح الآلي.
  4. وضع أنابيب متصلة مع مدخل للبيوشيب في أنابيب الاختبار تحتوي على عينات الدم تشكيلها.
  5. إطلاق مضخة في 50 داين / سم 2 (أو الضغوط القص أخرى حسب الرغبة) لتلك القنوات المرتبطة اختبار أنابيبتحتوي على عينات الدم تشكيلها باستخدام برنامج للمضخة.
    ملاحظة: ضغوط القص أخرى يمكن استخدامها.
  6. تسجيل صور كل 15 ثانية لمدة 5 دقائق في الوقت الحقيقي باستخدام اقتناء وتجربة البرنامج المجهر.
    ملاحظة: سلسلة زمنية أخرى يمكن استخدامها تبعا لانشاء التجريبية.
    ملاحظة: نحن نستخدم عادة التكبير 100X (الهدف 10X 10X والعدسات)، ولكن يمكن بسهولة أعلى (أو أقل) التكبير أن تستخدم كبديل.

4. غسل خارج

  1. تغسل جميع الأنابيب التي تعلق على منفذ ومتصلا متعددة الأقنية أو مضخة باستخدام الماء المقطر، تليها هيبوكلوريت الصوديوم (التبييض) 0.5٪ (ت / ت)، وأخيرا 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم في الماء. تجاهل أنابيب معلقة على مدخل بيوشيب كنفايات خطرة.

تحليل 5. البيانات

  1. تحديد حركية النمو خثرة مع برنامج تحليل الصور. الأوامر التالية هي محددة لZEN2012.
    1. فتح تحليل المساعد صورة لتحديد تغطية سطح الصفائح الدموية.
    2. تعيين عتبة مضان في علامة التبويب تحليل التفاعلي لتحديد كثافة بكسل الذي يرتبط مع إشارة إيجابية، أي على الصفائح الدموية الالتزام أو الصفائح الدموية الانضمام.
    3. استخدام إنشاء جداول لتوليد تلقائيا البيانات التي سوف تحتوي على مساحات منفصلة (في ميكرون 2) من تلك "الأشياء" التي تحتوي على بكسل مع الإشارة بين عتبات المحدد. يتم تنفيذ هذا عن كل نقطة زمنية.
      ملاحظة: عندما يكون عتبات مضان اختار، وبرامج التحليل بالكشف عن "الأجسام" في مجال الرأي القائل بأن تفي بالمعايير تلقائيا. هذه الكائنات هي الجلطة الدموية، وحدات صفائح صغيرة أو الصفائح الدموية واحدة وتغطي عددا من بكسل. يتم سرد كل كائن في جدول منفصل.
    4. حفظ هذه جداول البيانات في شكل أكس أم أل وفتحها في برنامج جدول بياناتلمزيد من العمليات الحسابية.
    5. مجموع المناطق على سطح الكائنات المحددة من قبل الجمع وتقسم النتيجة على مساحة إجمالية قدرها مجال القياس (ميكرون 2). هذا وسوف تسفر عن تغطية السطح النسبية (٪). القيام بذلك عن كل نقطة زمنية.
    6. رسم هذه التغطيات السطح في وظيفة من الوقت نضح وحساب المنحدر من الانحدار الخطي، مما أسفر عن الحركية النمو خثرة من أن حالة معينة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

لإظهار التباين داخل الفحص، تم perfused ثلاث عينات الدم الكامل أعيد متطابقة في وقت واحد على الكولاجين المغلفة السطوح (الشكل 1). وأدى ذلك إلى معامل الاختلاف من 8.7٪. وتشير هذه الإحصائية مقبول داخل فحص وتباين intralaboratory السماح مقارنة موثوقة بين العينا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

ميكروفلويديك التجارب غرفة التدفق هي أداة ممتازة لتحقيق وظائف الصفائح الدموية في الدم المتدفقة وتستخدم لتقييم الارقاء في المختبر في سياقات تجريبية. وعلى الرغم من ضعف التوحيد بين المختبرات 9، علينا أن نبرهن على داخل المختبر لدينا تباين التجريبية غير مقبول....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors have no acknowledgements.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
BD vacutainer tube with EDTA Becton, Dickinson and Company368856
BD vacutainer tube with HeparinBecton, Dickinson and Company368480
BD vacutainer tube with Sodium CitrateBecton, Dickinson and Company366575
Hirudin Blood tubeRoche6675751 001
BD vacutainer EclipseBecton, Dickinson and Company368650Blood collection needle with preattached holder
Pipette tips 100-1,000Greiner bio-one740290
Pipette tips 2-200Greiner bio-one739280
Pipette tips 1-10EppendorfA08928
Tube 5 mlSimport11691380
Conical tube 15 mlGreiner bio-one1888271
Conical tube 50 mlGreiner bio-one227261
10 ml SyringeBD309604
Precision wipesKimtech5511
Vena8 Fluoro+ BiochipsCellix188V8CF-400-100-02P10Named in Figure S1 A as 'Biochip'
Vena8 TubingCellixTUBING-TYGON-B1IC-B1OC-ROLL 100FNamed in Figure S1 B as 'Disposable tubing'
Vena8 NeedlesCellixSS-P-B1IC-B1OC-PACK200Named in Figure S1 B as 'Pin'
Connectors for single inlet cables of biochipsCellixCONNECTORS-B1IC-PACK100
Multiflow8 connectCellixMF8-CONNECT-BIC3-N-THROMBOSISNamed in Figure S1 B as 'Reusable tubing' and 'Splitter'
Humidified boxCellixHUMID-BOX
Software microfluidic pumpCellixN/AVenaflux Assay
Horm CollagenTakeda/Nycomed1130630Native equine tendon collagen (type I)
Isotonic glucose solution to dilute collagen is supplemented
HEPES buffered saline (HBS)in house preparationin house preparation10 mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES) buffered saline (0.9% (w/v) NaCl, pH 7.4)
Blocking bufferin house preparationin house preparation1.0% (w/v) bovine serum albumin and 0.1% (w/v) glucose in HBS
Calcein AMMolecular probesC1430
Bleach 10%in house preparationin house preparation
0.1 M NaOHin house preparationin house preparation
Denaturated alcoholFiersT0011.5
Mirus Evo NanopumpCellix188-MIRUS-PUMP-EVOwith Multiflow8. Named in Figure S1 A as 'Pump' and 'Manifold'
MicroscopeZeissAxio Observer Z1equipped with a colibri-LED and high resolution CCD camera
Software microscope ZeissN/AZEN 2012
Hematology analyzerSysmexN/A
Table Top CentrifugeEppendorf521-0095
Platelet incubaterHelmerPF-48i
Incubation water bathGFL1013
PipetteBrandA03429
Tube RollerRatekBTR5-12V
Sterile docking deviceTerumo BCTTSCD
Tubing SealerTerumo BCTAC-155
VortexVWR58816-121

References

  1. Broos, K., Feys, H. B., De Meyer, S. F., Vanhoorelbeke, K., Deckmyn, H. Platelets at work in primary hemostasis. Blood Rev. 25, 155-167 (2011).
  2. Stalker, T. J., et al. Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling network. Blood. 121, 1875-1885 (2013).
  3. Sakariassen, K. S., Bolhuis, P. A., Sixma, J. J. Human blood platelet adhesion to artery subendothelium is mediated by factor VIII-Von Willebrand factor bound to the subendothelium. Nature. 279, 636-638 (1979).
  4. Savage, B., Saldivar, E., Ruggeri, Z. M. Initiation of platelet adhesion by arrest onto fibrinogen or translocation on von Willebrand factor. Cell. 84, 289-297 (1996).
  5. Westein, E., de Witt, S., Lamers, M., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. Monitoring in vitro thrombus formation with novel microfluidic devices. Platelets. 23, 501-509 (2012).
  6. Varga-Szabo, D., et al. The calcium sensor STIM1 is an essential mediator of arterial thrombosis and ischemic brain infarction. J Exp Med. 205, 1583-1591 (2008).
  7. Westein, E., et al. Atherosclerotic geometries exacerbate pathological thrombus formation poststenosis in a von Willebrand factor-dependent manner. Proc Natl Acad Sci USA. , (2013).
  8. Grabowski, E. F., Yam, K., Gerace, M. Evaluation of hemostasis in flowing blood. Am J Hematol. 87 (Suppl 1), S51-S55 (2012).
  9. Roest, M., et al. Flow chamber-based assays to measure thrombus formation in vitro: requirements for standardization. J Thromb Haemost. 9, 2322-2324 (2011).
  10. Heemskerk, J. W. M., et al. Collagen surfaces to measure thrombus formation under flow: possibilities for standardization. J Thromb Haemost. 9, 856-858 (2011).
  11. Shrivastava, M. The platelet storage lesion. Transfus Apher Sci. 41, 105-113 (2009).
  12. Miyaji, R., et al. Decreased platelet aggregation of platelet concentrate during storage recovers in the body after transfusion. Transfusion. 44, 891-899 (2004).
  13. Goodrich, R. P., et al. Correlation of in vitro platelet quality measurements with in vivo platelet viability in human subjects. Vox Sang. 90, 279-285 (2006).
  14. Van Aelst, B., et al. Riboflavin and amotosalen photochemical treatments of platelet concentrates reduce thrombus formation kinetics in vitro. Vox Sang. 108, 328-339 (2015).
  15. Van Aelst, B., Devloo, R., Vandekerckhove, P., Compernolle, V., Feys, H. B. Ultraviolet c light pathogen inactivation treatment of platelet concentrates preserves integrin activation but affects thrombus formation kinetics on collagen in vitro. Transfusion. , (2015).
  16. de Witt, S. M., et al. Identification of platelet function defects by multi-parameter assessment of thrombus formation. Nat Commun. 5, 4257(2014).
  17. Cazenave, J. P., et al. Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood. Methods Mol Biol. 272, 13-28 (2004).
  18. Jackson, S. P., Nesbitt, W. S., Westein, E. Dynamics of platelet thrombus formation. J Thromb Haemost. 7 (Suppl 1), 17-20 (2009).
  19. Diedrich, B., Remberger, M., Shanwell, A., Svahn, B. M., Ringden, O. A prospective randomized trial of a prophylactic platelet transfusion trigger of 10 x 10(9) per L versus 30 x 10(9) per L in allogeneic hematopoietic progenitor cell transplant recipients. Transfusion. 45, 1064-1072 (2005).
  20. Neeves, K. B., et al. Sources of variability in platelet accumulation on type 1 fibrillar collagen in microfluidic flow assays. PloS one . 8, e54680(2013).
  21. Born, G. V. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. Nature. 194, 927-929 (1962).
  22. Cattaneo, M., et al. Recommendations for the Standardization of Light Transmission Aggregometry: A Consensus of the Working Party from the Platelet Physiology Subcommittee of SSC/ISTH. J Thromb Haemost. 11, 1183-1189 (2013).
  23. Deckmyn, H., Feys, H. B. Assays for quality control of platelets for transfusion. ISBT Sci Series. 8, 221-224 (2013).
  24. Andre, P., et al. Anticoagulants (thrombin inhibitors) and aspirin synergize with P2Y12 receptor antagonism in thrombosis. Circulation. 108, 2697-2703 (2003).
  25. Casari, C., et al. von Willebrand factor mutation promotes thrombocytopathy by inhibiting integrin alphaIIbbeta3. J Clin Invest. 123, 5071-5081 (2013).
  26. Gitz, E., et al. Improved platelet survival after cold storage by prevention of Glycoprotein Ibα clustering in lipid rafts. Haematologica. , (2012).
  27. Maurer-Spurej, E., Labrie, A., Brown, K. Routine Quality Testing of Blood Platelet Transfusions with Dynamic Light Scattering. Part Part Syst Char. 25, 99-104 (2008).
  28. Van Kruchten, R., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. Measurement of whole blood thrombus formation using parallel-plate flow chambers - a practical guide. Platelets. 23, 229-242 (2012).
  29. Zwaginga, J. J., et al. Flow-based assays for global assessment of hemostasis. Part 2: current methods and considerations for the future. J Thromb Haemost. 4, 2716-2717 (2006).
  30. Zwaginga, J. J., et al. Flow-based assays for global assessment of hemostasis. Part 1: Biorheologic considerations. J Thromb Haemost. 4, 2486-2487 (2006).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

109

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved