JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Platelet transfusion and hemostasis was modeled using blood reconstitution and microfluidic flow chambers to investigate the function of blood banking platelets. The data demonstrate the consequences of platelet storage lesion on hemostasis, in vitro.

Аннотация

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of (indirect) in vitro experiments, but none of these is as comprehensive as microfluidic flow chambers. In this protocol, the reconstitution of thrombocytopenic fresh blood with stored blood bank platelets is used to simulate platelet transfusion. Next, the reconstituted sample is perfused in microfluidic flow chambers which mimic hemostasis on exposed subendothelial matrix proteins. Effects of blood donation, transport, component separation, storage and pathogen inactivation can be measured in paired experimental designs. This allows reliable comparison of the impact every manipulation in blood component preparation has on hemostasis. Our results demonstrate the impact of temperature cycling, shear rates, platelet concentration and storage duration on platelet function. In conclusion, this protocol analyzes the function of blood bank platelets and this ultimately aids in optimization of the processing chain including phlebotomy, transport, component preparation, storage and transfusion.

Введение

Гемостаз требует комбинированной и регулируемой активности клеток, белков, ионов и тканей в ограниченном пространственно - временном контексте 1. Неконтролируемое активность может привести к кровотечением или тромбозом и заболеваемости и смертности в спектре расстройств, связанных с свертывания крови. Микрожидком эксперимент Проточная камера представляет собой сложный метод , который имитирует гемостаза в пробирке. Такой подход позволяет исследовать сложного взаимодействия процессов, которые принимают участие в гемостаза с ведущей роли тромбоцитов в крови.

После повреждения сосудов, тромбоциты придерживаться подвергается субэндотелиальном матрица (глико) протеинов, чтобы предотвратить потерю крови. После адгезии, тромбоциты и активировать агрегат в ответ на авто- и паракринной сигнализации , которые в конечном итоге приводит к образованию сети тромбоцитов, стабилизированных фибрина и в результате фирмы, наматывают уплотнение тромба 2. В отличие от большинства других функций тромбоцитов испытаний, экспери-ные с проточных камер учитывают физический параметр кровотока и , следовательно , влияние реологических свойств на участвующих клеток и биомолекул 3,4.

Эксперименты проточной камеры породили знаковые идеи в гемостаза и тромбоза путем изменения ключевых параметров, которые влияют на кровоостанавливающее (суб) процессов, включая клеевой матрицы, реологических и потока профилей, клеточный состав, наличие токсинов или наркотиков, ионной силы и многое другое. В последние два десятилетия, низкая пропускная способность камеры потока экспериментов , требующих больших объемов образца (10-100 мл) развились до микрофлюидальных камер часто состоящих из маленьких камер плоскопараллельных и включая современную технологию для перфузии цельной крови при контролируемых условиях сдвига стенки 5. Microscaling значительно увеличил пропускную способность анализа в основном потому, что установка оборудования упростило и требуется меньше (крови) объем, что делает эксперимент более доступным и versatiле. Например, кровь из мелких лабораторных животных теперь могут быть использованы без необходимости жертвовать животных. Образцы крови генетически модифицированных мышей, таким образом , помогают в идентификации ключевых молекул , способствующих или ингибирующих гемостаз и в новых основных прозрений 6.

Специализированные научно - исследовательские лаборатории часто до сих пор используют выполненные на заказ камеры потока, например , из полидиметилсилоксана (PDMS) 7 , который полимеризуется на литографированных пресс - форм , которые могут быть blueprinted программным обеспечением. Результирующий камера является недорогим, одноразовые и может быть легко разобран для постфактум анализа. Кроме того, в основном любой конструкции судов, в том числе бифуркаций или резких поворотов могут быть построены по команде. Это преимущество является также его недостатком, поскольку стандартизация уже была основная проблема с проточной камеры экспериментов и PDMS на заказ камеры не помогли этим. Помимо этого конкретного вопроса, покрытия (условия), флуоресцентные зонды, антикоагулянта, TEMPтературы и время между отбором и анализом проб все плохо стандартизированы 8. Стандартизация этих переменных является сложной задачей, но тем не менее требуется, чтобы обеспечить сравнение результатов между лабораториями. Эта тема является основной темой Международного общества по изучению тромбозов и гемостаза в научной и стандартизации подкомиссии по Biorheology 9,10.

Концентратов тромбоцитов (ПК) переливается у пациентов, страдающих от различных заболеваний, которые вызывают тромбоцитопению и / или кровотечение. Но тромбоциты в ПК , как известно , уменьшают чувствительность, особенно в зависимости от времени хранения 11, процесс ухудшения в результате старения и обычно называют поражения хранения тромбоцитов. Иногда утверждают , что такие тромбоциты восстановить в обращении раз переливаемой 12, но доказательств этого не хватает. Кроме того, функция тромбоцитов, входящих в состав ПК не тестируется, так как связь между таких анализов итерапевтической или профилактической эффективности неясна 13. Микрожидком камеры потока предлагают средства для исследования функции тромбоцитов в ПК, чтобы оптимизировать цепочку манипуляций между сбором и выдачей. Это мощный инструмент исследования для прямых (спаренных) сравнений ПК , как мы уже ранее опубликованных 14,15 и описан здесь.

протокол

Этот протокол следует институциональные этические принципы для исследования образцов человека и информированное согласие было получено от всех участвующих доноров. Утверждение для экспериментов, описанных здесь, была получена из этическими комитетами больницы Антверпенского университета.

Примечание: показания температуры всегда при комнатной температуре, если не указано.

Установка 1. Подготовка потока камера

  1. Готовимся Дорожки, НКТ и штыри
    1. Вихревой коллаген подвеска энергично и разбавить 1/20 в изотоническом растворе глюкозы, предоставленный поставщиком до конечной концентрации 50 мкг / мл.
      Примечание: Мы используем конский сухожилие коллаген, в основном состоят из фибрилл I типа. Лошадиного коллагена типа I часто называют "Horm" коллагена и является золотым стандартом для данного типа анализа 9 для обоих исторических, а также биологическим причинам. Человеческого типа III, коллаген также может быть использован, но гое фибриллы пальто менее хорошо и реакция тромбоцитов не так сильна. Другие поверхности покрытия также могут быть использованы, например , фактора фон Виллебранда (ФВ), фибриноген, фибронектин, ламинин, витронектина, тромбоспондин-1 или комбинации этих 16.
    2. Возьмите новый одноразовый биочип из контейнера провайдера. Размеры биочипов используемых здесь 0.4W х 0.1H х 20L в мм 3.
    3. Пипеткой 0,8 мкл на полосу (ами) микрожидком биочипа на одном конце чипа и маркируют как розетки. Убедитесь, что полоса заполнена 5/6-е место с коллагеном, содержащим раствор для нанесения покрытия, полученного в 1.1.1. Убедитесь в том, что нет пузырьков воздуха.
      Примечание: Каналы частично покрыты, чтобы избежать накопления коллагеновых волокон на входе в канал (обсуждение см).
    4. Инкубируют при температуре 4 ° С в течение 4 часов или в течение ночи в увлажненном и закрытом контейнере.
    5. Блок каналы, покрытые пипеткой блокирующим буфером (1,0% (вес / об) сыворотки бычьего альбуминаг 0,1% (вес / объем) глюкозы в 10 мМ 4- (2-гидроксиэтил) -1-пиперазинэтансульфонова кислота (HEPES) буферном солевом растворе (HBS; 0,9% (вес / объем) NaCl, рН 7,4) на другом конце и отметки в качестве входного отверстия. Убедитесь, что полоса полностью заполнена с блокирующим буфером, избегая пузырьков воздуха.
    6. Вырезать трубки на одинаковую длину (12 см). Используйте одну на одну полосу движения и соединить каждую трубку с булавкой. Например, эксперимент, сравнивая два условия, в дубликате потребуется четыре трубки растягивает и четыре булавки, чтобы быть готовым.
    7. Промойте трубку дистиллированной водой с помощью шприца и иглы 26 G или сопроводительные разъемы.
    8. Пропитайте трубку с блокирующим буфером. Хранить в закрытом и увлажненной контейнере в течение как минимум 1 ч.
  2. Подготовка насоса и вентильный
    1. Промыть насос и коллектор с дистиллированной водой, удалить пузырьки воздуха.
    2. Аспирируйте блокирующий буфер из биочипа полосу (ов) с использованием фиксированного наконечник 10 мкл на выходе. Очистите поверхностьбиочип с прецизионным пыли бесплатно протирать и денатурированного спирта, чтобы удалить отпечатки и пыль.
    3. Закрепите биочипа на автоматизированном столике микроскопа. Если более чем одна полоса одновременно используется в один проход, соединить многообразие сплиттер восемь полос к выходу биочипов.
      Примечание: Коллектор Разветвитель восемь полоса является частью аппаратных средств (рис S1) соединены с насосом и биочипов. Это обеспечивает возможность работы всех доступных (восемь) полос на биочипа или комбинации полос, которые могут быть оператор, определенные в прилагаемом программном обеспечении.
    4. Используйте булавки в трубке, чтобы установить их на входе биочипов. Поместите другой конец трубки (без PIN-кода) в 1,5 мл тест-коническую трубку, наполненную HBS. Промыть все трубки и подключенные к ним дорожки с 1 мл HBS с помощью насоса, с тем, чтобы удалить остаток блокирующий буфер и плохо придерживаясь коллаген.

2. Подготовка проб крови

  1. Сбор и разделениесвежей цельной крови от здорового добровольца. 17
    1. Соберите первые миллилитров крови в эвакуированной трубке, содержащей этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) в качестве антикоагулянта и исключительно использовать этот образец для полного анализа крови (CBC) с автоматическим гематологическим анализатором.
    2. Собирают объем крови в подходящем антикоагулянта, используя вакуумную трубу. Стандартные антикоагулянты для экспериментов проточной камеры являются гепарин или гирудин, когда фибрина образование не является частью протокола исследования и цитрат натрия, когда она есть.
      Примечание: Гепарин использовался в качестве антикоагулянта для всех экспериментов, описанных в результатах.
      Примечание: количество крови зависит от количества экспериментов, которые будут выполнены. Примерно 1 трубка (7 мл) в течение 3-х полос.
    3. Поместите трубки на ротатор в ожидании крови восстановления.
      Примечание: Анализ должен быть завершен в течение 3 часов от кровопускания.
    4. Центрифуга в течение 15 мин при 250 г для приготовления плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRП). Не используйте перерыв центрифуг, чтобы предотвратить нарушение неплотно упакованных гранул.
      1. Когда более чем одна трубка была собрана, объединить кровь в одной конической трубе центрифугирования.
        Примечание: Центрифугирование может быть сделано более медленно или менее долго, в зависимости от выхода PRP и сота "загрязнение" дифференциальном предпочтительным.
    5. Удаляют PRP и поглощающее покрытие, дающую эритроцитарной с небольшим количеством тромбоцитов.
      Примечание: Количество тромбоцитов в упакованном красной фракции клеток составляет 13 ± 5 × 10 3 на мкл (среднее значение ± SD, п = 12) в среднем в наших руках.
  2. Кровь Воссоздание
    1. Оттепели группы крови АВ (резус-D отрицательный) в плазме при 37 ° С в течение 5 мин и 20 сек на 4 мл.
    2. Определение гематокрита уплотненных красных кровяных клеток, полученных в 2.1.5 с использованием автоматического гематологического анализатора.
    3. Определить концентрацию тромбоцитов в банке крови готовят концентрат тромбоцитов ТНАт будет использоваться для восстановления красной фракции клеток выше.
    4. Рассчитайте объем упакованных красных кровяных клеток и концентрата тромбоцитов, что будет с выходом 40% гематокрита и 250 х 10³ тромбоциты / мкл в 1 мл образца.
      Примечание: Другие целевые титры клеток могут быть установлены произвольно, в зависимости от протокола исследования.
    5. Передача уплотненные красные клетки крови и плазму в свежую пробирку, используя усеченную концом пипетки и добавить концентрат тромбоцитов до объема образца 1 мл не будет достигнута.
      Примечание: В зависимости от переменных, изученных Фракцию плазмы должна быть одинаковой во всех разведенных образцах, так как плазма оказывает существенное влияние на скорость образования тромба. Например, повторные замораживания-оттаивания или плазму, взятую из различных доноров, так и на разных антикоагулянтов могут влиять на результат.
    6. Смешайте водостойких кровь осторожно переворачиванием и выполнить CBC.
    7. Подготовить "пустой" контрольный образец, в котором заменяется объем тромбоцитов фракцииодним и тем же объемом 0,9% (м / об) раствором хлорида натрия в воде для определения концентрации эндогенных тромбоцитов (т.е. не банка крови Тромбоциты) в разведенном крови с использованием CBC.
  3. этикетирование
    1. Внесите 1 мл восстановленной крови в пробирку, содержащую 1 мкл 5 мМ кальцеина AM (5 мкМ конечная концентрация).
      Примечание: Другие красители клеток могут быть использованы 14.
    2. Аккуратно перемешайте переворачиванием.
    3. Выдержите в течение 5 мин при 37 ° С до использования.

3. Анализ Перфузия

  1. Фокус цель на волокна коллагена, прилипших в нижней части полос движения. В идеале, используйте настройки дифференциального интерференционного контраста (DIC) фазового контраста или для фокусировки этой стратегии. Выберите "Установить текущий Z для выбранных областей плитки" в программном обеспечении эксперимента в цифровом исправить выбранные Z-позиции.
  2. Выберите интересующую область (ROI) в переулке (ху) в эксперименте программном обеспечении мicroscope, которые будут записаны в ходе эксперимента.
    Примечание: ROI может быть любая площадь поверхности произвольно выбранной в перфузионной полосе. Желательно не проанализировать образование тромба близко к входом и выходом из полосы движения таким образом, чтобы избежать побочных эффектов профиля переменного потока в этой области, несмотря на то, что это относительно небольшой. Площадь поверхности ROI должна содержать значительное количество тромбоцитов или тромбы, чтобы обеспечить выравнивание сигнала. В этом протоколе ROI представляет собой цифровой сшитые совокупность трех одинаковых по размеру расположенных бок о бок изображений в результате 0,62 мм 2 в середине 2 см длиной полосы.
  3. Смешайте образцы осторожно переворачиванием и расположите их рядом с биочипа на автоматизированной стадии.
  4. Поместите трубку, которая соединена с входным отверстием биочипа в пробирках, содержащих восстанавливаемые образцы крови.
  5. Запустите насос на 50 дин / см 2 (или других напряжений сдвига по желанию) для этих каналов , связанных с пробиркисодержащий восстанавливаемые образцы крови, используя программное обеспечение насоса.
    Примечание: Другие напряжения сдвига могут быть использованы.
  6. Запись изображений каждые 15 секунд в течение 5 минут в режиме реального времени с помощью сбора и эксперимента программное обеспечение микроскопа.
    Примечание: Другие временные ряды могут быть использованы в зависимости от экспериментальной установки.
    Примечание: Как правило, мы используем 100-кратном увеличении (объектив 10X и 10X линзы), но выше (или ниже) увеличение может быть легко использован в качестве альтернативы.

4. Промойте

  1. Промыть все трубки, присоединенные к выходному отверстию, и подключенный к многоканальному коллектор или насос с использованием дистиллированной воды, а затем раствором гипохлорита натрия (отбеливатель) 0,5% (об / об), и, наконец, 0,1 М NaOH в воде. Откажитесь трубку возлагали к входному отверстию биочипов как опасные отходы.

5. Анализ данных

  1. Определение кинетики роста тромба с помощью программного обеспечения для анализа изображений. Следующие команды используются для ZEN2012.
    1. Открыть Анализ плагин изображения для определения покрытия поверхности тромбоцитов.
    2. Установите порог флуоресценции в Анализировать Интерактивная вкладку для определения интенсивности пикселей , что коррелирует с положительным сигналом, т.е. приклеена тромбоцитов или прилипших тромбоцитов.
    3. Использование Создание таблиц для автоматического создания таблицы , которая будет содержать отдельные участки поверхности (в мкм 2) этих "объектов" , содержащих пиксели с сигналом между выбранными пороговыми значениями. Это выполняется для каждой временной точки.
      Примечание: После того, как пороговые значения флуоресценции были выбрали, программное обеспечение анализа автоматически обнаруживает "объекты" в поле зрения, которые отвечают критериям. Эти объекты являются тромбы, небольшие агрегаты тромбоцитов или отдельные тромбоциты и охватывают ряд пикселей. Каждый объект занесен в таблицу отдельно.
    4. Сохраните эти электронные таблицы в формате XML и открыть их в программе электронных таблицдля дальнейших расчетов.
    5. Всего площади поверхности выбранных объектов путем суммирования и разделить результат на общей площади области измерения (мкм 2). Это даст относительную покрытие поверхности (%). Сделайте это для каждой временной точки.
    6. Участок этих поверхностных покрытий в зависимости от времени перфузионного и вычислить крутизну с помощью линейной регрессии, что дает кинетику роста тромба этого конкретного состояния.

Результаты

Для демонстрации изменения внутри анализа, три идентичных реконструированные образцы цельной крови перфузировались одновременно над коллагеновых покрытием поверхности (рисунок 1). Это привело к коэффициент вариации 8,7%. Эта статистика предполагает приемле?...

Обсуждение

Микрожидком эксперименты проточной камеры являются отличным инструментом для изучения функции тромбоцитов в потоке крови и используются для оценки гемостаза в пробирке в различных экспериментальных контекстах. Несмотря на плохую межлабораторной стандартизации 9, мы пока...

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

The authors have no acknowledgements.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
BD vacutainer tube with EDTA Becton, Dickinson and Company368856
BD vacutainer tube with HeparinBecton, Dickinson and Company368480
BD vacutainer tube with Sodium CitrateBecton, Dickinson and Company366575
Hirudin Blood tubeRoche6675751 001
BD vacutainer EclipseBecton, Dickinson and Company368650Blood collection needle with preattached holder
Pipette tips 100-1,000Greiner bio-one740290
Pipette tips 2-200Greiner bio-one739280
Pipette tips 1-10EppendorfA08928
Tube 5 mlSimport11691380
Conical tube 15 mlGreiner bio-one1888271
Conical tube 50 mlGreiner bio-one227261
10 ml SyringeBD309604
Precision wipesKimtech5511
Vena8 Fluoro+ BiochipsCellix188V8CF-400-100-02P10Named in Figure S1 A as 'Biochip'
Vena8 TubingCellixTUBING-TYGON-B1IC-B1OC-ROLL 100FNamed in Figure S1 B as 'Disposable tubing'
Vena8 NeedlesCellixSS-P-B1IC-B1OC-PACK200Named in Figure S1 B as 'Pin'
Connectors for single inlet cables of biochipsCellixCONNECTORS-B1IC-PACK100
Multiflow8 connectCellixMF8-CONNECT-BIC3-N-THROMBOSISNamed in Figure S1 B as 'Reusable tubing' and 'Splitter'
Humidified boxCellixHUMID-BOX
Software microfluidic pumpCellixN/AVenaflux Assay
Horm CollagenTakeda/Nycomed1130630Native equine tendon collagen (type I)
Isotonic glucose solution to dilute collagen is supplemented
HEPES buffered saline (HBS)in house preparationin house preparation10 mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES) buffered saline (0.9% (w/v) NaCl, pH 7.4)
Blocking bufferin house preparationin house preparation1.0% (w/v) bovine serum albumin and 0.1% (w/v) glucose in HBS
Calcein AMMolecular probesC1430
Bleach 10%in house preparationin house preparation
0.1 M NaOHin house preparationin house preparation
Denaturated alcoholFiersT0011.5
Mirus Evo NanopumpCellix188-MIRUS-PUMP-EVOwith Multiflow8. Named in Figure S1 A as 'Pump' and 'Manifold'
MicroscopeZeissAxio Observer Z1equipped with a colibri-LED and high resolution CCD camera
Software microscope ZeissN/AZEN 2012
Hematology analyzerSysmexN/A
Table Top CentrifugeEppendorf521-0095
Platelet incubaterHelmerPF-48i
Incubation water bathGFL1013
PipetteBrandA03429
Tube RollerRatekBTR5-12V
Sterile docking deviceTerumo BCTTSCD
Tubing SealerTerumo BCTAC-155
VortexVWR58816-121

Ссылки

  1. Broos, K., Feys, H. B., De Meyer, S. F., Vanhoorelbeke, K., Deckmyn, H. Platelets at work in primary hemostasis. Blood Rev. 25, 155-167 (2011).
  2. Stalker, T. J., et al. Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling network. Blood. 121, 1875-1885 (2013).
  3. Sakariassen, K. S., Bolhuis, P. A., Sixma, J. J. Human blood platelet adhesion to artery subendothelium is mediated by factor VIII-Von Willebrand factor bound to the subendothelium. Nature. 279, 636-638 (1979).
  4. Savage, B., Saldivar, E., Ruggeri, Z. M. Initiation of platelet adhesion by arrest onto fibrinogen or translocation on von Willebrand factor. Cell. 84, 289-297 (1996).
  5. Westein, E., de Witt, S., Lamers, M., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. Monitoring in vitro thrombus formation with novel microfluidic devices. Platelets. 23, 501-509 (2012).
  6. Varga-Szabo, D., et al. The calcium sensor STIM1 is an essential mediator of arterial thrombosis and ischemic brain infarction. J Exp Med. 205, 1583-1591 (2008).
  7. Westein, E., et al. Atherosclerotic geometries exacerbate pathological thrombus formation poststenosis in a von Willebrand factor-dependent manner. Proc Natl Acad Sci USA. , (2013).
  8. Grabowski, E. F., Yam, K., Gerace, M. Evaluation of hemostasis in flowing blood. Am J Hematol. 87 (Suppl 1), S51-S55 (2012).
  9. Roest, M., et al. Flow chamber-based assays to measure thrombus formation in vitro: requirements for standardization. J Thromb Haemost. 9, 2322-2324 (2011).
  10. Heemskerk, J. W. M., et al. Collagen surfaces to measure thrombus formation under flow: possibilities for standardization. J Thromb Haemost. 9, 856-858 (2011).
  11. Shrivastava, M. The platelet storage lesion. Transfus Apher Sci. 41, 105-113 (2009).
  12. Miyaji, R., et al. Decreased platelet aggregation of platelet concentrate during storage recovers in the body after transfusion. Transfusion. 44, 891-899 (2004).
  13. Goodrich, R. P., et al. Correlation of in vitro platelet quality measurements with in vivo platelet viability in human subjects. Vox Sang. 90, 279-285 (2006).
  14. Van Aelst, B., et al. Riboflavin and amotosalen photochemical treatments of platelet concentrates reduce thrombus formation kinetics in vitro. Vox Sang. 108, 328-339 (2015).
  15. Van Aelst, B., Devloo, R., Vandekerckhove, P., Compernolle, V., Feys, H. B. Ultraviolet c light pathogen inactivation treatment of platelet concentrates preserves integrin activation but affects thrombus formation kinetics on collagen in vitro. Transfusion. , (2015).
  16. de Witt, S. M., et al. Identification of platelet function defects by multi-parameter assessment of thrombus formation. Nat Commun. 5, 4257 (2014).
  17. Cazenave, J. P., et al. Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood. Methods Mol Biol. 272, 13-28 (2004).
  18. Jackson, S. P., Nesbitt, W. S., Westein, E. Dynamics of platelet thrombus formation. J Thromb Haemost. 7 (Suppl 1), 17-20 (2009).
  19. Diedrich, B., Remberger, M., Shanwell, A., Svahn, B. M., Ringden, O. A prospective randomized trial of a prophylactic platelet transfusion trigger of 10 x 10(9) per L versus 30 x 10(9) per L in allogeneic hematopoietic progenitor cell transplant recipients. Transfusion. 45, 1064-1072 (2005).
  20. Neeves, K. B., et al. Sources of variability in platelet accumulation on type 1 fibrillar collagen in microfluidic flow assays. PloS one . 8, e54680 (2013).
  21. Born, G. V. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. Nature. 194, 927-929 (1962).
  22. Cattaneo, M., et al. Recommendations for the Standardization of Light Transmission Aggregometry: A Consensus of the Working Party from the Platelet Physiology Subcommittee of SSC/ISTH. J Thromb Haemost. 11, 1183-1189 (2013).
  23. Deckmyn, H., Feys, H. B. Assays for quality control of platelets for transfusion. ISBT Sci Series. 8, 221-224 (2013).
  24. Andre, P., et al. Anticoagulants (thrombin inhibitors) and aspirin synergize with P2Y12 receptor antagonism in thrombosis. Circulation. 108, 2697-2703 (2003).
  25. Casari, C., et al. von Willebrand factor mutation promotes thrombocytopathy by inhibiting integrin alphaIIbbeta3. J Clin Invest. 123, 5071-5081 (2013).
  26. Gitz, E., et al. Improved platelet survival after cold storage by prevention of Glycoprotein Ibα clustering in lipid rafts. Haematologica. , (2012).
  27. Maurer-Spurej, E., Labrie, A., Brown, K. Routine Quality Testing of Blood Platelet Transfusions with Dynamic Light Scattering. Part Part Syst Char. 25, 99-104 (2008).
  28. Van Kruchten, R., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. Measurement of whole blood thrombus formation using parallel-plate flow chambers - a practical guide. Platelets. 23, 229-242 (2012).
  29. Zwaginga, J. J., et al. Flow-based assays for global assessment of hemostasis. Part 2: current methods and considerations for the future. J Thromb Haemost. 4, 2716-2717 (2006).
  30. Zwaginga, J. J., et al. Flow-based assays for global assessment of hemostasis. Part 1: Biorheologic considerations. J Thromb Haemost. 4, 2486-2487 (2006).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

109

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены