JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

وضعنا مجموعتين من تتبع مجموعات في Rosa26 tdtomato (أعرب بتواجد مطلق في جميع الخلايا) / لجنة المساواة العرقية (أعرب تحديدا في غضروفية) الفئران: واحد مع 2.3Col1a1-GFP (محدد لبانيات) واحد مع المناعي (محددة لخلايا العظام). وتظهر البيانات أن التحول المباشر من غضروفية في خلايا العظام.

Abstract

تم استخدام نظام تتبع الخلية النسب في الغالب في دراسات علم الأحياء التطوري. استخدام لجنة المساواة العرقية recombinase يسمح لتفعيل مراسل في خط خلية معينة وجميع ذرية. هنا، استخدمنا النسب خلية تتبع تقنية لإثبات أن غضروفية تحول مباشرة إلى الخلايا بانية العظم وخلية عظمية خلال العظام الطويلة والتنمية لقمة الفك السفلي باستخدام نوعين من لجنة المساواة العرقية، Col10a1-لجنة المساواة العرقية وAggrecan-لجنة المساواة العرقية ERT2 (AGG-لجنة المساواة العرقية ERT2)، عبرت مع Rosa26 tdTomato. وعلامات جيدا معترف بها على حد سواء Col10 وaggrecan لغضروفية.

على هذا الأساس، وضعنا نسب طريقة خلايا جديدة تتبع بالتزامن مع الفلورسنت مصير الخلايا المناعية لتحديد من خلال تحليل التعبير عن علامات معينة من الخلايا. كانت، Runx2 (علامة للخلايا المكونة للعظم في مرحلة مبكرة) والعاج المصفوفة protein1 (علامة للخلايا في وقت متأخر من مرحلة المكونة للعظم DMP1)تستخدم لتحديد خلايا العظام المستمدة من خلية غضروفية وحالة التمايز بهم. هذا المزيج يوسع ليس فقط تطبيق تتبع الخلية النسب، ولكن أيضا يبسط جيل من الفئران المجمع. الأهم من ذلك، يتم عرض الحالات عدد، والمكان، والتفريق بين ذرية الخلية الأم في وقت واحد، وتوفير مزيد من المعلومات من سلالة خلية تتبع وحدها. وفي الختام، وشارك في التطبيق من الخلايا النسب تتبع تقنيات والمناعي هو أداة قوية للتحقيق في بيولوجيا الخلايا في الجسم الحي.

Introduction

خلال التنمية، ويمثل تكوين العظام غضروفي لأكثر من 80٪ من حجم الهيكل العظمي. ويعتقد على نطاق واسع أن تبدأ مع موت الخلايا المبرمج للغضروفية التصنع. وفي وقت لاحق، والخلايا من نخاع العظام الكامنة تغزو والشروع الأوعية الدموية، تليها ترسب العظام الجديد كوسا- العظام والخلايا المشتقة السمحاق 1،2. مصير خلية من خلايا غضروفية الضخامي (المراكز الصحية)، ومع ذلك، فقد كانت قضية للنقاش على مدى عقود 3. في البداية، كانت تعتبر المراكز الصحية لتكون نهاية التمايز مسار خلية غضروفية، وموت الخلايا المبرمج كان يعتقد عموما أن يكون مصير النهائي من المراكز الصحية. الآن، يقترح بعض الباحثين أن بعض المراكز الصحية يمكن البقاء على قيد الحياة على الأقل، وتسهم في تكوين العظام غضروفي. على الرغم من أنها اقترحت أن النمو كان غضروفية لوحة القدرة على تحورها إلى بانيات بناء على التركيب الدقيق، وتلطيخ المناعى، والدراسات في المختبر 46، فإن أيا من هذه الأساليب ثيحرث نهائية في إثبات مساهمة خلية غضروفية إلى النسب بناء العظم.

توفر تقنية خلية النسب تتبع طريقة أكثر دقة لدراسة مصير الخلية. تحدث لفترة وجيزة، وهو الانزيم recombinase، وهو ما يعبر عنه فقط في نوع معين من الخلايا، ويحفز على التعبير عن الجينات المراسل. وبهذه الطريقة، وهذا النوع من الخلايا وأحفادهم وصفت بشكل دائم 7. ويستخدم نظام لجنة المساواة العرقية، loxP عادة في تتبع النسب. ولجنة المساواة العرقية (انزيم recombinase) استئصال تسلسل إيقاف بين المواقع loxP اثنين وتفعيل مراسل في خط خلية معينة (الشكل 1A). في بعض الحالات، يمكن للمحقق اختيار نقطة زمنية مواتية لتفعيل لجنة المساواة العرقية باستخدام المخدرات، مثل تاموكسيفين، مما تسبب في لجنة المساواة العرقية لصهر إلى صيغة معدلة من مستقبلات هرمون الاستروجين (لجنة المساواة العرقية ERT2) 8. أصبحت صحفيين الفلورسنت القياسية في نسب تتبع التجارب لأنها تقلل بشكل كبير من التعقيدوتحسين دقة وكفاءة مصير خلية تتبع 8،9. tdTomato ويصبح الخيار الأفضل بين صحفيين الفلورسنت لأنه لديه ألمع البروتين الفلوري وأقوى epifluorescence، مما يجعلها تصور بسهولة 7 (الشكل 1A).

باستخدام النسب Rosa26 tdTomato نظام تتبع، وقد أظهرت مجموعتنا وباحثون آخرون أن المراكز الصحية يمكن تغيير النمط الظاهري في خلايا العظام خلال تنمية 10-14. ولتحقيق ذلك، قمنا بتطوير مجموعتين من تتبع معا مع Rosa26 tdtomato (التعبير في كل مكان في كل خلايا) / لجنة المساواة العرقية (الخاصة غضروفية) الفئران: 2.3Col1a1-GFP (محددة لبانيات) والمناعي (محددة لخلايا العظام). وتظهر البيانات أن كلتا الطريقتين هي سبل ناجعة لدراسة مصير خلية في الجسم الحي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تم استعراض جميع البروتوكولات التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة تكساس A & M جامعة طب الأسنان.

تربية 1. الحيوان

  1. استخدام ثلاثة نماذج حيوانية في هذه الدراسة. للتحقيق في مصير غضروفية جنينية في تشكيل اللقمة، أول استخدام Col10a1-لجنة المساواة العرقية 15 الفئران وعبر لهم Rosa26 tdTomato (B6، 129S6- طن (ROSA) 26Sor tm9 (CAG-tdTomato) Hze / J) الفئران للحصول على Col10a1- لجنة المساواة العرقية وRosa26 tdTomato الفئران. بعد ذلك، عبر هذه الفئران مع 2.3Col1a1-GFP الفئران 16. استخدام Col10a1-لجنة المساواة العرقية. Rosa26 tdTomato. الفئران 2.3Col1a1-GFP لأداء التجارب خلية النسب تتبع (الشكل 1B).
  2. لدراسة مصير غضروفية ما بعد الولادة، اتبع الإجراء نفسه كما في الخطوة 1.1، ولكن استخدام ERT2 Aggrecan-لجنة المساواة العرقية (AGG-لجنة المساواة العرقية ERT2) 17،18 خط والحفاظ على AGG-لجنة المساواة العرقية ERT2. Rosa26 tdTomato. الفئران 2.3Col1a1-GFP لأداء التجارب خلية النسب تتبع (الشكل 1C). حقن عقار تاموكسيفين في يوم ما بعد الولادة 14.
  3. الجمع بين النسب خلية تتبع تقنية مع المناعي، عبر الفئران AGG-لجنة المساواة العرقية ERT2 والفئران Rosa26 tdTomato. استخدام الفئران التي تحمل كل الجينات في التجربة وحقن عقار تاموكسيفين في يوم ما بعد الولادة 3 (1D الشكل).

2. تحضير المواد

  1. حل مسحوق تاموكسيفين في 10٪ من الإيثانول و 90٪ زيت الذرة بتركيز 10 ملغ / مل. جرعة للحقن هي 75 ملغم / كغم.
  2. حل مسحوق امتصاص العرق (PFA) في برنامج تلفزيوني إلى تركيز 4٪، وذلك باستخدام 2 M هيدرات الصوديوم لضبط قيمة الرقم الهيدروجيني إلى 7.4. استخدام 4٪ PFA حل لإصلاح الأنسجة (تستخدم في قمة الفك السفلي والساق الخلفية هنا) بعد التضحية. بسبب ذلكسمية، والتعامل مع PFA في غطاء محرك السيارة مع قفازات وقناع.
  3. حل مسحوق EDTA في الماء المقطر لتركيز 10٪، وذلك باستخدام 2 M هيدرات الصوديوم لضبط قيمة الرقم الهيدروجيني إلى 7.4. استخدام 10٪ EDTA ليزيل الكلس في قمة الفك السفلي والساق الخلفية.
  4. حل مسحوق السكروز في برنامج تلفزيوني بتركيزات 15٪ و 30٪. استخدام محلول السكروز إلى يذوى الأنسجة بعد زوال الكلس.
  5. حل مسحوق هيالورونيداز في برنامج تلفزيوني بتركيز 2 ملغ / مل، ودرجة الحموضة 5.0. هذا الحل هو لاسترجاع المناعي المستضد.
  6. استخدام أنبوب 1.5 مل لإعداد عرقلة الحل الذي يحتوي على 3٪ زلال المصل البقري (BSA)، و 20٪ مصل الماعز في برنامج تلفزيوني لتلطيخ Runx2 أو DMP1 مناعي.
  7. استخدام أنبوب 1.5 مل لإعداد حل الأجسام المضادة الأولية التي تحتوي على 2٪ مصل الماعز في برنامج تلفزيوني لتلطيخ Runx2 أو DMP1 مناعي. تركيز الأجسام المضادة الأولية هو 1: 400 Runx2 و 1: 100 للDMP1.
  8. استخدام أنبوب 1.5 مل لإعدادالحل أرنب مفتش مثل التحكم لتلطيخ مناعي لتجنب نتائج إيجابية كاذبة. يحتوي الحل 2٪ مصل الماعز في برنامج تلفزيوني. تركيز مفتش أرنب للسيطرة Runx2 هو 1: 400. لDMP1، 1: 100. أداء تجربة والسيطرة تلطيخ في وقت واحد.
  9. استخدام أنبوب 1.5 مل لإعداد حل الضد الثانوية التي تحتوي على 2٪ مصل الماعز في برنامج تلفزيوني لتلطيخ Runx2 أو DMP1 مناعي. استخدام الأجسام المضادة الثانوية في التخفيف من 1: 500.

3. شريحة التحضير للمتحد البؤر المجهري (سلالته خلية تتبع فقط، لا المختلط مع المناعي)

  1. حقن عقار تاموكسيفين في AGG-لجنة المساواة العرقية ERT2 الفئران في نقطة زمنية ملائمة.
    1. أولا، إزالة الماوس من قفصه. ثم، استخدم اليسار الإبهام والسبابة للاستيلاء على الجلد على الجزء الخلفي من الماوس وتحويل أكثر من ذلك، وتعريض البطن. استخدام اليد اليمنى لاجراء الحقنة. نقطة الدخول المثلى للحقن هي على لترتقنية الحرية النفسية أو الجانب الأيمن من خثل، وتجنب الكبد والمثانة.
    2. الحفاظ على بالتوازي حقنة إلى رجليه الخلفيتين من الماوس وحقن داخل الصفاق. جرعة للحقن هي 75 ملغم / كغم. أوزان الفئران في عمر 2 أسابيع، 3 أسابيع و 4 أسابيع من العمر ما يقرب من 7-9 جرام، 11-13 جرام، و16-18 غرام على التوالي.
  2. تخدير الفئران مع مزيج زيلازين / Ketaset.
    1. لإعداد حل العاملة، أولا تمييع زيلازين وKetaset مع الماء المقطر لتركيز 1 ملغ / مل و 5 ملغ / مل على التوالي. بعد ذلك، خلط زيلازين وKetaset في نسبة 1: 2. جرعة للحقن 30 ميكرولتر / ز.
    2. حقن كما في الخطوة 3.1. تأكيد التخدير بواسطة معسر الكاحل الفأر. الفأر هو فاقد الوعي إذا كان لديه أي رد فعل.
  3. يروي الفئران مع PFA 4٪ بعد التخدير.
    1. بعد يفقد وعيه الماوس، وتحديد أربع أرجل من الماوس على لوحة لentirelذ فضح البطن.
    2. تشبع البطن مع الايثانول 70٪ وجعل الختان من أسفل البطن في الرقبة على طول خط الوسط. قرصة في وقت واحد سحب الجلد إلى الجانبين الجانبية للكشف عن غشاء البريتوني. استخدام مقص تشريح لجعل الختان الطولي.
    3. قطع وإزالة الأضلاع الأمامية لفضح القلب. ثقب في القلب من البطين الأيسر مع G حقنة 22، أمسك حقنة، وفي الوقت نفسه خفض فتحة في الأذن اليمنى.
    4. ببطء حقن PFA 4٪، وهو perfused على نظام القلب والأوعية الدموية في حين أن تمسح الدم من على قطع من الأذن اليمنى. حجم PFA لنضح 1 مل / جرام. تنفيذ هذه الخطوة في الدرجة الأولى لمجلس الوزراء السلامة البيولوجية التي من الصعب-أنبوبي لبناء نظام العادم.
  4. تقشر الجلد الماوس، ووضع الجسم كله في أنبوب الطرد المركزي البولي بروبلين 50 مل الذي يحتوي 40 مل من 4٪ PFA لإصلاح بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  5. استخدام مقص تشريح ورقم 3 ورقم 5 الملقط لإزالة بعناية الفك السفلي والساق الخلفية من الجسم وإزالة العضلات والأوتار على السطح. تنفيذ هذه الخطوة في الدرجة الأولى لمجلس الوزراء السلامة البيولوجية التي من الصعب-أنبوبي لبناء نظام العادم.
  6. قطع الفك السفلي إلى قطعتين في المنطقة البعيدة من الضرس الثالث. وبالمثل، وقطع عظم الفخذ والساق في midshaft لفضح تجويف نخاع العظام من أجل تسريع زوال الكلس. وضع الجزء الذي يتضمن عملية اللقمة وقمي وجنبا إلى جنب مع الساق الخلفية إلى 40 مل من EDTA 10٪ ليزيل الكلس في 4 درجة مئوية لمدة 2-4 أيام في أنبوب البولي بروبلين الطرد المركزي 50 مل.
  7. استخدام 50 مل من 15٪ سكروز إلى يذوى اللقمة والساق الخلفية بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية في أنبوب البولي بروبلين الطرد المركزي 50 مل.
  8. استخدام 30٪ سكروز إلى يذوى اللقمة والساق الخلفية بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية في 50 مل أنبوب البولي بروبلين الطرد المركزي.
  9. على المستوى السهمي، تضمين العينة معأكتوبر على لوحة القطع في الجهاز cryosection.
    1. وضع أفقي اللقمة أو الساق الخلفية في قالب المتصاعدة. غمر النسيج في أكتوبر وترك الأمر في الجهاز cryosection حتى تجمد أكتوبر
    2. جبل كتلة أكتوبر على لوحة القطع. انتظر حوالي 15 دقيقة قبل التقطيع للتأكد من أن أكتوبر هو المجمدة تماما.
  10. قطع اللقمة والساق الخلفية إلى أقسام 10 ميكرون. جمع المقاطع على الشرائح ومخزن في -20 درجة مئوية.
  11. احتضان الشريحة في C الغرفة 37 درجة لإزالة الماء قبل تلطيخ.
  12. تغسل الشرائح مرتين مع الماء المقطر لمدة 5 دقائق.
  13. تمحو الماء حول كل قسم. استخدام حاجز القلم مسعور لدائرة الفروع وإسقاط دابي أو غير الإستشعاع حل تصاعد مكافحة تتلاشى في الدائرة. وضع بعناية أسفل انزلاق الغطاء.

4. المناعى تلطيخ للRunx2 وDMP1

ملاحظة: الاشتراكات مفتشالمحول المتعدد العادي هو ضروري لتلطيخ المناعى لتجنب إشارات إيجابية كاذبة. تلطيخ للمجموعات التجريبية والضابطة يحتاج إلى أن يقوم في وقت واحد.

  1. احتضان الشرائح في C الغرفة 37 درجة لإزالة الماء قبل تلطيخ.
  2. تغسل الشرائح مرتين مع الماء المقطر.
  3. استخدام حاجز القلم مسعور إلى دائرة جميع أقسام على الشريحة. من هذه الخطوة، إضافة كل من الحل مستعد في دائرة لتغطية كامل أقسام.
  4. علاج المقاطع مع هيالورونيداز في غرفة رطبة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. حجم من الحل (في الخطوات 4،5-4،8) يعتمد على حجم القسم. استخدام 50 ميكرولتر من حل لاللقمة و 100 ميكرولتر من أجل العظام الطويلة. يغسل PBST (PBS التي تحتوي على 0.1٪ توين 20) ثلاث مرات.
  5. إعداد وتطبيق عرقلة الحل لكل قسم واحتضان لهم في غرفة رطبة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  6. احتضان المقاطع مع الابتدائيحل الأجسام المضادة (Runx2 أرنب لمكافحة فأر، أو أرنب لمكافحة فأر DMP1) في 4 درجات مئوية خلال الليل. يغسل مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات.
  7. احتضان المقاطع مع حل الضد الثانوية (الماعز المضادة للأرنب، اليكسا فلور 488) لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. يغسل مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات.
  8. تمحو الماء حول القسم وإسقاط دابي في دائرة لتغطية القسم على الشريحة. وضع بعناية أسفل انزلاق الغطاء.

5. متحد البؤر المجهري

  1. التقاط الصور خلية فلوري باستخدام مجهر متحد البؤر عند أطوال موجية تتراوح بين 488 ميكرون (الأخضر) إلى 561 ميكرون (الحمراء). أخذ صور متعددة مكدسة في 200 هرتز (أبعاد 1024 × 1024) 19 باستخدام 10X، 20X، 63X والعدسات.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

غضروفية تحويل مباشرة إلى خلايا العظام (بانيات وخلية عظمية) في الفك السفلي اللقمة وطويل العظام.

Aggrecan، جين حاسم لتكون الغضروف، يعبر عنها بشكل رئيسي في غضروفية مبكرة وناضجة 18. ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

بسبب القيود التكنولوجية، فمن الصعب دائما للتحقيق في سلوك الخلايا في الجسم الحي. ومع ذلك، فإن تقنية خلية النسب تتبع يبرهن على أن تكون أداة قوية لدراسة بيولوجيا الخلية 7-9. في هذه الدراسة، ونحن زيادة تحسين هذا البروتوكول من خلال الجمع بين ذلك مع المناعي. وبهذه...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

Acknowledgements

This study was supported by NIH grant DE025014 to JQF.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Tamoxifen SigmaT5648activate the Cre event 
ParaformaldehydeSigma P6148fix the sample
Ethylenediaminetetraacetic acidAlfa AesarA10713decalcify the hard tissue
Sucrose SigmaS0389dehydrate the tissue
Hyaluronidase from bovine testes SigmaH4272retrieve antigen for immunochemical staining
Bovine serum albuminSigma A3059blocking solution 
primary antibody for Runx2 Cell SignalD1L7Fprimary antibody for immunochemical staining
primary antibody for DMP1provided by Dr. Chunlin Qinprimary antibody for immunochemical staining
anti-rabbit IgGSigma18140control for immunochemical staining
secondary antibody InvitrogenA11008second antibody for immunochemical staining
OCTTissue-Tek4583embed the sample for frozen section
Tween 20Fisher ScientificBP337PBST
non-fluorescing antifade mountantLife technologiesP36934mounting slides
DAPILife technologiesP36931nuclear staining
Hydrophobic Barrier PenVector Laboratoriescircle the section on the slide for for immunochemical staining 
XylazineAnaSedanesthetization 
Ketaset Zoetisanesthetization 
cryosection machineLeicaCM1860 UV
confocal microscopeLeicaDM6000 CFS 

References

  1. Gibson, G. Active role of chondrocyte apoptosis in endochondral ossification. Microsc Res Tech. 43 (2), 191-204 (1998).
  2. Kronenberg, H. M. Developmental regulation of the growth plate. Nature. 423 (6937), 332-336 (2003).
  3. Shapiro, I. M., Adams, C. S., Freeman, T., Srinivas, V. Fate of the hypertrophic chondrocyte: microenvironmental perspectives on apoptosis and survival in the epiphyseal growth plate. Birth Defects Res C Embryo Today. 75 (4), 330-339 (2005).
  4. Kahn, A. J., Simmons, D. J. Chondrocyte-to-osteocyte transformation in grafts of perichondrium-free epiphyseal cartilage. Clin Orthop Relat Res. (129), 299-304 (1977).
  5. Roach, H. I. Trans-differentiation of hypertrophic chondrocytes into cells capable of producing a mineralized bone matrix. Bone Miner. 19 (1), 1-20 (1992).
  6. Park, J., et al. Dual pathways to endochondral osteoblasts: a novel chondrocyte-derived osteoprogenitor cell identified in hypertrophic cartilage. Biol Open. 4 (5), 608-621 (2015).
  7. Kretzschmar, K., Watt, F. M. Lineage tracing. Cell. 148 (1-2), 33-35 (2012).
  8. Humphreys, B. D., DiRocco, D. P. Lineage-tracing methods and the kidney. Kidney Int. 86 (3), 481-488 (2014).
  9. Romagnani, P., Rinkevich, Y., Dekel, B. The use of lineage tracing to study kidney injury and regeneration. Nat Rev Nephrol. 11 (7), 420-431 (2015).
  10. Yang, G., et al. Osteogenic fate of hypertrophic chondrocytes. Cell Res. 24 (10), 1266-1269 (2014).
  11. Yang, L., Tsang, K. Y., Tang, H. C., Chan, D., Cheah, K. S. Hypertrophic chondrocytes can become osteoblasts and osteocytes in endochondral bone formation. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (33), 12097-12102 (2014).
  12. Jing, Y., et al. Chondrocytes Directly Transform into Bone Cells in Mandibular Condyle Growth. J Dent Res. 94 (12), 1668-1675 (2015).
  13. Zhou, X., von der Mark, K., Henry, S., Norton, W., Adams, H., de Crombrugghe, B. Chondrocytes transdifferentiate into osteoblasts in endochondral bone during development, postnatal growth and fracture healing in mice. PLoS Genet. 10 (12), (2014).
  14. Purcell, P., Trainor, P. A. The Mighty Chondrocyte: No Bones about It. J Dent Res. 94 (12), 1625-1627 (2015).
  15. Gebhard, S., et al. Specific expression of Cre recombinase in hypertrophic cartilage under the control of a BAC-Col10a1 promoter. Matrix Biol. 27 (8), 693-699 (2008).
  16. Kalajzic, Z., et al. Directing the expression of a green fluorescent protein transgene in differentiated osteoblasts: comparison between rat type I collagen and rat osteocalcin promoters. Bone. 31 (6), 654-660 (2002).
  17. Akiyama, H., et al. Osteo-chondroprogenitor cells are derived from Sox9 expressing precursors. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (41), 14665-14670 (2005).
  18. Henry, S. P., et al. Generation of aggrecan-CreERT2 knockin mice for inducible Cre activity in adult cartilage. Genesis. 47 (12), 805-814 (2009).
  19. Ren, Y., Lin, S., Jing, Y., Dechow, P. C., Feng, J. Q. A novel way to statistically analyze morphologic changes in Dmp1-null osteocytes. Connect Tissue Res. 55, 129-133 (2014).
  20. Pest, M. A., Beier, F. Developmental biology: Is there such a thing as a cartilage-specific knockout mouse? Nat Rev Rheumatol. 10 (12), 702-704 (2014).
  21. Tsang, K. Y., Chan, D., Cheah, K. S. Fate of growth plate hypertrophic chondrocytes: death or lineage extension? Dev Growth Differ. 57 (2), 179-192 (2015).
  22. Sugimoto, Y., Takimoto, A., Hiraki, Y., Shukunami, C. Generation and characterization of ScxCre transgenic mice. Genesis. 51 (4), 275-283 (2013).
  23. Feng, J. Q., et al. Generation of a conditional null allele for Dmp1 in mouse. Genesis. 46 (2), 87-91 (2008).
  24. Lu, Y., Xie, Y., Zhang, S., Dusevich, V., Bonewald, L. F., Feng, J. Q. DMP1-targeted Cre expression in odontoblasts and osteocytes. J Dent Res. 86 (4), 320-325 (2007).
  25. Rios, A. C., Fu, N. Y., Lindeman, G. J., Visvader, J. E. In situ identification of bipotent stem cells in the mammary gland. Nature. 506 (7488), 322-327 (2014).
  26. Blanpain, C., Simons, B. D. Unravelling stem cell dynamics by lineage tracing. Nat Rev Mol Cell Biol. 14 (8), 489-502 (2013).
  27. Huh, W. J., Khurana, S. S., Geahlen, J. H., Kohli, K., Waller, R. A., Mills, J. C. Tamoxifen induces rapid, reversible atrophy, and metaplasia in mouse stomach. Gastroenterology. 142 (1), 21-24 (2012).
  28. Lee, M. H., Kim, J. W., Kim, J. H., Kang, K. S., Kong, G., Lee, M. O. Gene expression profiling of murine hepatic steatosis induced by tamoxifen. Toxicol Lett. 199 (3), 416-424 (2010).
  29. Nakamura, E., Nguyen, M. T., Mackem, S. Kinetics of tamoxifen-regulated Cre activity in mice using a cartilage-specific CreER(T) to assay temporal activity windows along the proximodistal limb skeleton. Dev Dyn. 235 (9), 2603-2612 (2006).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

118 transdifferentiation

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved