A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
وضعنا مجموعتين من تتبع مجموعات في Rosa26 tdtomato (أعرب بتواجد مطلق في جميع الخلايا) / لجنة المساواة العرقية (أعرب تحديدا في غضروفية) الفئران: واحد مع 2.3Col1a1-GFP (محدد لبانيات) واحد مع المناعي (محددة لخلايا العظام). وتظهر البيانات أن التحول المباشر من غضروفية في خلايا العظام.
تم استخدام نظام تتبع الخلية النسب في الغالب في دراسات علم الأحياء التطوري. استخدام لجنة المساواة العرقية recombinase يسمح لتفعيل مراسل في خط خلية معينة وجميع ذرية. هنا، استخدمنا النسب خلية تتبع تقنية لإثبات أن غضروفية تحول مباشرة إلى الخلايا بانية العظم وخلية عظمية خلال العظام الطويلة والتنمية لقمة الفك السفلي باستخدام نوعين من لجنة المساواة العرقية، Col10a1-لجنة المساواة العرقية وAggrecan-لجنة المساواة العرقية ERT2 (AGG-لجنة المساواة العرقية ERT2)، عبرت مع Rosa26 tdTomato. وعلامات جيدا معترف بها على حد سواء Col10 وaggrecan لغضروفية.
على هذا الأساس، وضعنا نسب طريقة خلايا جديدة تتبع بالتزامن مع الفلورسنت مصير الخلايا المناعية لتحديد من خلال تحليل التعبير عن علامات معينة من الخلايا. كانت، Runx2 (علامة للخلايا المكونة للعظم في مرحلة مبكرة) والعاج المصفوفة protein1 (علامة للخلايا في وقت متأخر من مرحلة المكونة للعظم DMP1)تستخدم لتحديد خلايا العظام المستمدة من خلية غضروفية وحالة التمايز بهم. هذا المزيج يوسع ليس فقط تطبيق تتبع الخلية النسب، ولكن أيضا يبسط جيل من الفئران المجمع. الأهم من ذلك، يتم عرض الحالات عدد، والمكان، والتفريق بين ذرية الخلية الأم في وقت واحد، وتوفير مزيد من المعلومات من سلالة خلية تتبع وحدها. وفي الختام، وشارك في التطبيق من الخلايا النسب تتبع تقنيات والمناعي هو أداة قوية للتحقيق في بيولوجيا الخلايا في الجسم الحي.
خلال التنمية، ويمثل تكوين العظام غضروفي لأكثر من 80٪ من حجم الهيكل العظمي. ويعتقد على نطاق واسع أن تبدأ مع موت الخلايا المبرمج للغضروفية التصنع. وفي وقت لاحق، والخلايا من نخاع العظام الكامنة تغزو والشروع الأوعية الدموية، تليها ترسب العظام الجديد كوسا- العظام والخلايا المشتقة السمحاق 1،2. مصير خلية من خلايا غضروفية الضخامي (المراكز الصحية)، ومع ذلك، فقد كانت قضية للنقاش على مدى عقود 3. في البداية، كانت تعتبر المراكز الصحية لتكون نهاية التمايز مسار خلية غضروفية، وموت الخلايا المبرمج كان يعتقد عموما أن يكون مصير النهائي من المراكز الصحية. الآن، يقترح بعض الباحثين أن بعض المراكز الصحية يمكن البقاء على قيد الحي....
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تم استعراض جميع البروتوكولات التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة تكساس A & M جامعة طب الأسنان.
تربية 1. الحيوان
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
غضروفية تحويل مباشرة إلى خلايا العظام (بانيات وخلية عظمية) في الفك السفلي اللقمة وطويل العظام.
Aggrecan، جين حاسم لتكون الغضروف، يعبر عنها بشكل رئيسي في غضروفية مبكرة وناضجة 18. .......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
بسبب القيود التكنولوجية، فمن الصعب دائما للتحقيق في سلوك الخلايا في الجسم الحي. ومع ذلك، فإن تقنية خلية النسب تتبع يبرهن على أن تكون أداة قوية لدراسة بيولوجيا الخلية 7-9. في هذه الدراسة، ونحن زيادة تحسين هذا البروتوكول من خلال الجمع بين ذلك مع المناعي. وبهذه.......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.
This study was supported by NIH grant DE025014 to JQF.
....Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tamoxifen | Sigma | T5648 | activate the Cre event |
Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | fix the sample |
Ethylenediaminetetraacetic acid | Alfa Aesar | A10713 | decalcify the hard tissue |
Sucrose | Sigma | S0389 | dehydrate the tissue |
Hyaluronidase from bovine testes | Sigma | H4272 | retrieve antigen for immunochemical staining |
Bovine serum albumin | Sigma | A3059 | blocking solution |
primary antibody for Runx2 | Cell Signal | D1L7F | primary antibody for immunochemical staining |
primary antibody for DMP1 | provided by Dr. Chunlin Qin | primary antibody for immunochemical staining | |
anti-rabbit IgG | Sigma | 18140 | control for immunochemical staining |
secondary antibody | Invitrogen | A11008 | second antibody for immunochemical staining |
OCT | Tissue-Tek | 4583 | embed the sample for frozen section |
Tween 20 | Fisher Scientific | BP337 | PBST |
non-fluorescing antifade mountant | Life technologies | P36934 | mounting slides |
DAPI | Life technologies | P36931 | nuclear staining |
Hydrophobic Barrier Pen | Vector Laboratories | circle the section on the slide for for immunochemical staining | |
Xylazine | AnaSed | anesthetization | |
Ketaset | Zoetis | anesthetization | |
cryosection machine | Leica | CM1860 UV | |
confocal microscope | Leica | DM6000 CFS |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved