JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Immünofloresan ile (osteoblastlar özgü) 2.3Col1a1-GFP ile diğeri (kemik hücrelere özgü): İki / Cre fareler (özellikle kondrosit olarak ifade edilmiştir) (her yerde her zaman bütün hücrelerde ifade edilmiştir) Rosa26 tdTomato kombinasyonları izleme grupları geliştirdi. veri kemik hücrelerine kondrosit doğrudan dönüşümünü göstermektedir.

Özet

Hücre soyu izleme sistemi gelişim biyolojisi çalışmalarında ağırlıklı olarak kullanılmıştır. Cre rekombinazın kullanımı belirli bir hücre çizgisi ve döl muhabir aktivasyonu için izin verir. Burada, kondrositler doğrudan uzun kemik ve Cre, Col10a1-Cre ve Agrekanın-Cre ERT2 (Agg-Cre ERT2) iki çeşit kullanarak mandibular kondil gelişimi sırasında osteoblast ve osteositleri dönüşme olduğunu göstermek için teknik izleme hücre soyu kullanılan Rosa26 ile geçti tdTomato. Col10 ve Agrekanın Hem kondrositlerin için belirteçleri iyi tanınmaktadır.

Bu temelde, belirli hücre belirteçleri ifadesini analiz ederek floresan immünohistokimya-tanımlamak hücre kaderi ile birlikte izleme yeni bir yöntem hücre soyu geliştirdi. Runx2 (erken evre osteojenik hücreler için bir işaret) ve dentin matrisi protein1 (DMP1ve, geç evre osteojenik hücreler için bir işaret) idikondrosit türetilmiş kemik hücreleri ve bunların farklılaşma durumunu tanımlamak için kullanılan. Bu kombinasyon, hücre soyu izleme uygulaması genişletir, ama aynı zamanda bileşik farelerin nesil kolaylaştırır sadece. Daha da önemlisi, ana hücre döl sayısı, yeri ve farklılaşma durumları yalnız izleme hücre soyu daha fazla bilgi sağlayan, aynı anda görüntülenir. Sonuç olarak, hücre soyu takip teknikleri ve immünofloresan birlikte uygulamaya in vivo olarak, hücre biyolojisi araştırmak için güçlü bir araçtır.

Giriş

gelişimi sırasında, endokondral kemik oluşumu iskelet hacmi% 80'inden sorumludur. Yaygın olarak hipertrofik kondrositlerin apoptozu ile başlar inanılmaktadır. Daha sonra, altta yatan kemik iliği hücreleri istila ve kemik iliği ve periost kökenli hücreler 1,2 yeni kemik birikimi ile takip anjiyogenezi başlatmak. Hipertrofik kondrositlerin hücre kaderi (HC), ancak, yıllardır 3 tartışma konusu olmuştur. Başlangıçta, HCS kondrosit farklılaşması yolunun sonu olarak kabul edildi ve apoptoz genellikle HCS nihai kaderi olduğu düşünülmüştür. Şimdi, bazı araştırmacılar en azından bazı HCS hayatta olabilir ve endokondral kemik oluşumuna katkıda bulunduğunu göstermektedir. O büyümeyi önerdi rağmen plaka kondrositler ultrastrüktürdeki, immünohistokimyasal dayalı osteoblast içine transdifferentiate yeteneği vardı ve in vitro, 46 bu yöntemlerin w hiçbiri çalışmalarıosteoblast soy kondrosit katkı gösteren kesin ere.

Hücre soyu izleme tekniği hücre kaderi incelemek için daha titiz bir yol sağlar. Kısaca söylemek gerekirse, sadece spesifik bir hücre türü ifade edilen bir yeniden bağlayıcı enzim, bildirici genin ekspresyonunu uyarır. Bu şekilde, bu hücrenin tipi ve onların soyundan kalıcı 7 etiketlenir. Cre-loxP sistemi yaygın soy izleme kullanılır. Cre (rekombinaz enzim) iki loxP siteleri arasında DUR dizisi tüketim ve belirli bir hücre hattı (Şekil 1A) 'de muhabir aktive eder. Bazı durumlarda, araştırmacı, östrojen reseptörü (Cre ERT2) 8 modifiye edilmiş bir formu kaynaşmaya Cre neden tamoksifen gibi bir ilaç ile Cre aktif hale getirmek için uygun bir zaman noktası seçebilir. Floresan gazeteciler onlar dramatik karmaşıklığını azaltmak için deneyler izleme soy standart haline gelmiştirve 8,9 izleme hücre kaderinin doğruluğunu ve verimliliğini artırmak. bunun kolayca 7 (Şekil 1A) görüntülenmiştir yapma, parlak floresan proteini ve güçlü Epifloresans beri tdTomato floresan gazetecilere arasında en iyi seçenek haline geliyor.

Sistem izleme Rosa26 tdTomato soy kullanarak, grubumuz ve diğer araştırmacılar HCS gelişimi 10-14 esnasında kemik hücreleri içine fenotip değiştirebilir göstermiştir. 2.3Col1a1-GFP (osteoblastlar özgü) ile bağışıklık fluorışıması (kemik hücrelere özgü): Bunu yapmak için, Rosa26 tdTomato (her yerde ifade, tüm hücrelerde) / Cre (kondrosit özgü) fareler ile kombinasyonlar izleme iki set geliştirdi. Veri iki yolun in vivo hücre kaderine çalışma uygulanabilir yollar olduğunu göstermektedir.

Protokol

Tüm protokoller gözden ve Teksas A & Diş Hekimliği M University College'da Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Hayvan Yetiştiriciliği

  1. Bu çalışmada, üç hayvan modelleri kullanarak. İlk kullanım Col10a1-CRE 15 fareler kondil oluşumunda embriyonik kondrositlerin kaderi araştırmak ve Rosa26 tdTomato onları geçmeye (B6; 129S6- Gt (ROSA) 26Sor tm9 (CAG-tdTomato) Hze / J) farelerde Col10a1- elde etmek için Cre ve Rosa26 tdTomato fareler. Daha sonra, 2.3Col1a1-GFP uygulanan farelerden 16 bu fareler çapraz. Col10a1-Cre kullanın; Rosa26 tdTomato; 2.3Col1a1-GFP fareler hücre soyu izleme deneyleri (Şekil 1B) gerçekleştirmek için.
  2. Doğum sonrası kondrosit kaderini incelemek için, adım 1.1 gibi aynı prosedürü izleyin, ama Agrekanın-CRE ERT2 (Agg-Cre ERT2 kullanmak) 17,18 hattı ve Agg-Cre ERT2 tutmak; Rosa26 tdTomato; 2.3Col1a1-GFP fareler hücre soyu izleme deneyleri (Şekil 1C) gerçekleştirmek için. doğum sonrası 14. günde tamoksifen enjekte edilir.
  3. Immünofloresan ile teknik izleme hücre soyu birleştirmek için, Agg-Cre ERT2 fareler ve Rosa26 tdTomato fareler çapraz. Deneyde her iki geni taşıyan fareler kullanın ve doğum sonrası 3. günde (Şekil 1D) üzerine tamoksifen enjekte edilir.

2. Malzeme hazırlanması

  1. 10 mg / ml'lik bir konsantrasyonda% 10 etanol ve% 90 mısır yağı içinde tamoksifen toz eritilir. Enjeksiyon için bir dozaj, 75 mg / kg'dır.
  2. 7.4 pH değerini ayarlamak için 2M sodyum hidrat kullanılarak,% 4'lük bir konsantrasyona PBS içinde paraformaldehit (PFA) toz içinde çözülür. Kurban sonra doku (mandibular kondil ve arka bacak burada kullanılan) düzeltmek için% 4 PFA çözüm kullanın. Çünkü onuntoksisite, eldiven ve yüz maskesi ile kaputun içindeki PFA anlaştım.
  3. 7.4 pH değerini ayarlamak için 2M sodyum hidrat kullanılarak,% 10 bir konsantrasyona damıtılmış su içinde EDTA toz eritilir. Mandibular kondil ve arka bacak kirecini% 10 EDTA kullanın.
  4. % 15 ve% 30 arasında konsantrasyonlarda PBS içinde sükroz toz eritilir. yumuşatma sonra doku kurutmak için sukroz çözümü kullanın.
  5. 2 mg / ml, pH 5.0 bir konsantrasyonda PBS içinde hyaluronidaz toz eritilir. Bu çözüm immünofloresan antijen alımı içindir.
  6. Runx2 ya DMP1ve immünofloresan boyama PBS içinde% 3 sığır serum albümini (BSA) ve% 20 keçi serumu içeren bir bloklama solüsyonu hazırlamak için, 1.5 ml tüp kullanın.
  7. Runx2 ya DMP1ve immünofloresan boyama PBS içinde% 2 keçi serumu ihtiva eden bir birincil antikor bir çözelti hazırlamak için 1.5 ml tüp kullanın. Runx2 400 ve 1: 100 DMP1ve için primer antikor konsantrasyonu, 1'dir.
  8. hazırlamak için, 1.5 ml tüp kullanarakYanlış pozitif sonuçlardan kaçınmak için immunofluorescent boyama kontrol olarak tavşan IgG çözüm. Çözelti PBS içinde% 2 keçi serumu içerir. Runx2 kontrolü için tavşan IgG konsantrasyonu 1: 400; 100: DMP1ve, 1. Aynı anda deney ve kontrol boyama yapın.
  9. Runx2 ya DMP1ve immünofloresan boyama PBS içinde% 2 keçi serumu ihtiva eden bir ikincil antikor çözeltisi hazırlamak için, 1.5 ml tüp kullanın. 500: 1 bir seyreltmede ikincil antikor kullanın.

3. Slayt Konfokal Mikroskopi Hazırlık (Sadece izleme Hücre Lineage, İmmünofloresan ile hiçbir Kombinasyon)

  1. Olumlu bir zaman noktasında Agg-CRE ERT2 farelerde tamoksifen enjekte edilir.
    1. İlk olarak, kafes fare kaldırın. Ardından, karın açığa farenin arkasındaki deriyi kapmak ve ters çevirin sol başparmak ve işaret parmağınızı kullanın. şırıngayı tutmak için sağ elinizi kullanın. Enjeksiyon için uygun bir giriş noktası L verildieft veya hypogastrium sağ tarafında, karaciğer ve mesane kaçınarak.
    2. fare arka ayakları şırınga paralel tutun ve intraperitoneal enjekte. Enjeksiyon için bir dozaj, 75 mg / kg'dır. sırasıyla 18 g - 9 g, 11 - - 13 g, 16 2 hafta, 3 hafta, ve eski 4 haftalık yaşlarda faresinin ağırlıkları yaklaşık 7'dir.
  2. Bir Xylazine / Ketaset kombinasyonu ile fareler anestezi.
    1. çalışma çözeltisi hazırlamak için, ilk olarak sırası ile, 1 mg / ml ve 5 mg / ml 'lik bir konsantrasyona kadar damıtılmış su ile iksilazin ve Ketaset seyreltin. 2 oranında: Sonraki, bir 1 ketamin ve Ketaset karıştırın. Enjeksiyon için bir dozaj 30 ul / g'dır.
    2. Adım 3.1 olarak enjekte edilir. Farenin bileğini kısma anesthetization onaylayın. o hiçbir tepki varsa fare bilinçsiz olduğunu.
  3. anesthetization sonra% 4 PFA ile fareler serpmek.
    1. Fare bilincini kaybeder sonra entirel bir gemide fare dört bacağı düzeltmeky karın maruz kalmaktadır.
    2. % 70 etanol ile karın doyurmak ve orta hat boyunca boyun alt karın bir eksizyonu yapmak. periton zarı ortaya çıkarmak için yan taraflarına cilt çekin aynı anda çimdik ve. uzunlamasına eksizyon yapmak için diseksiyon makas kullanın.
    3. kesiniz ve kalp maruz ön kaburga kaldırın. Sağ kulak kepçesi bir yuvayı kesmek aynı zamanda, bir 22 G şırınga ile sol ventrikül kalbi delinme şırıngayı tutun ve.
    4. Yavaş yavaş kardiyovasküler sistem üzerinde perfüze% 4 PFA, enjekte ederken sağ kulak kepçesi gelen kesme dışında kan basması. perfüzyon için PFA hacmi 1 ml / gramdır. Sert-Kanallı bina egzoz sistemine bir Sınıf I biyogüvenlik kabini içinde bu adımı gerçekleştirin.
  4. fare deri soyulabilir ve 4 ° C'de gece boyunca düzeltmek için% 4 PFA içinde 40 ml içeren 50 ml'lik polipropilen santrifüj tüpü içine bütün vücudu koydu.
  5. dikkatle vücuttan çene ve arka bacak kaldırmak için diseksiyon makas ve # 3 ve # 5 forseps kullanabilir ve yüzeyde kasları ve tendonları kaldırmak için. Sert-Kanallı bina egzoz sistemine bir Sınıf I biyogüvenlik kabini içinde bu adımı gerçekleştirin.
  6. Üçüncü molar distal bölgede iki parçaya mandibula kesin. Benzer şekilde, decalcification hızlandırmak amacıyla kemik iliği boşluğuna maruz orta cisim olarak femur ve tibia kesti. kondil ve kondiler işlemi kapsamaktadır parçası koymak ve% 10 EDTA, 40 ml arka bacak ile birlikte 2, 4 ° C'de kirecini göre - 50-ml polipropilen santrifüj tüpüne 4 gün.
  7. 50 ml polipropilen santrifüj tüpüne 4 ° C'de kondil ve gece boyunca arka bacak kurutmak için% 15 sakroz, 50 ml kullanın.
  8. 50 ml polipropilen santrifüj tüpü içinde gece boyunca 4 ° C'de kondil ve arka bacak kurutmak için% 30 sakroz kullanın.
  9. sagital düzlem boyunca, örnek ile gömmekcryosection makinesinde kesici plaka Ekim
    1. Yatay kondili veya montaj kalıp içinde arka bacak yatıyordu. OCT doku Batmak ve Ekim donuyor kadar cryosection makinede bırakın.
    2. Kesme plaka üzerinde Ekim bloğu monte edin. Ekim tamamen donmuş olduğundan emin olmak için kesme işleminden önce yaklaşık 15 dakika boyunca bekleyin.
  10. 10 mikron bölüme kondili ve arka bacak kesti. -20 ° C'de slaytlar ve mağaza bölümleri toplayın.
  11. boyama önce suyu çıkarmak için 37 ° C'lik bir oda içinde slayt inkübe edin.
  12. 5 dakika için damıtılmış su ile iki kez slaytlar yıkayın.
  13. Her bölümde etrafında suyu siliniz. bölümleri daire ve çember içine DAPI veya non-floresan anti-solmaya montaj çözümü düşmesi hidrofobik bir bariyer kalem kullanın. Dikkatle kapak kayma uzandı.

Runx2 ve DMP1ve 4. İmmünohistokimyasal Boyama

NOT: IgG conimmünohistokimyasal yanlış pozitif sinyaller önlemek için kumanda gereklidir. Deney ve kontrol grupları için boyama aynı anda yapılması gerekmektedir.

  1. boyama önce suyu çıkarmak için 37 ° C'lik bir oda içinde slaytlar inkübe edin.
  2. damıtılmış su ile iki kez slaytlar yıkayın.
  3. slayt tüm bölümleri daire için hidrofobik bariyer kalem kullanın. Bu adımdan itibaren, tamamen bölümleri kapsayacak şekilde daire içine hazırlanmış çözümün bütün ekleyin.
  4. 30 dakika boyunca 37 ° C'de nemli bir oda içinde hyalüronidaz bölümleri tedavi edin. (Adım 4.5 - 4.8) çözeltisinin hacmi bölümün boyutuna bağlıdır. Uzun kemik kondilin için çözelti 50 ul ve 100 ul kullanın. (% 0.1 içeren PBS Tween 20) ile PBST ile üç kez yıkanır.
  5. Hazırlama ve her bölüm için engelleme çözeltisi uygulanır ve oda sıcaklığında 1 saat süreyle nemli bir oda içinde inkübe.
  6. Primer ile bölümleri inkübegece boyunca 4 ° C 'de antikor çözeltisi (tavşan anti-fare Runx2 ya tavşan anti-fare DMP1ve). PBS ile üç kez yıkayın.
  7. Oda sıcaklığında 2 st için ikincil antikor çözeltisinin (keçi anti-tavşan, Alexa Fluor 488) sahip olan kısımlar inkübe edin. PBS ile üç kez yıkayın.
  8. bölümünde etrafında suyu siliniz ve slayt bölümü kapsayacak şekilde çember içine DAPI bırakın. Dikkatle kapak kayma uzandı.

5. Konfokal Mikroskop

  1. 488 mikron (yeşil) den 561 um (kırmızı) arasında değişen dalga boylarında bir konfokal mikroskop kullanılarak floresan hücre görüntüleri yakalayabilir. 10X, 20X ve 63X lensler kullanarak 19 200 Hz birden yığılmış görüntü almak (1.024 × 1.024 boyutları).

Sonuçlar

Kondrositler Doğrudan mandibular ve Uzun Kemik Kemik Hücrelerinin (Osteobalstlar ve osteositlerde) içine Transform.

Agrekan, kondrojenez için kritik bir geni, ağırlıklı olarak, erken ve olgun kondrositler 18 olarak ifade edilir. Bunun bir sonucu olarak, Agg-Cre ERT2 bölgesindeki 2 haftalık tamoksifen enjeksiyonu; Rosa26 tdTomato fareler tüm...

Tartışmalar

Teknolojik sınırlamalar nedeniyle, in vivo hücre davranışlarını araştırmak için her zaman zordur. Ancak, hücre soyu izleme tekniği hücre biyolojisi 7-9 çalışmak için güçlü bir araç olduğunu gösteriyor. Bu çalışmada, biz daha fazla immünofloresan ile birleştirerek bu protokolü geliştirmek. Bu şekilde, hücre kaderi soyu izleme uygulaması genişletmektedir birden çok ilişkili markörler tarafından tanımlanabilir. Ayrıca, immünofloresan ve domates sinyalinin bu co-l...

Açıklamalar

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

Teşekkürler

This study was supported by NIH grant DE025014 to JQF.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Tamoxifen SigmaT5648activate the Cre event 
ParaformaldehydeSigma P6148fix the sample
Ethylenediaminetetraacetic acidAlfa AesarA10713decalcify the hard tissue
Sucrose SigmaS0389dehydrate the tissue
Hyaluronidase from bovine testes SigmaH4272retrieve antigen for immunochemical staining
Bovine serum albuminSigma A3059blocking solution 
primary antibody for Runx2 Cell SignalD1L7Fprimary antibody for immunochemical staining
primary antibody for DMP1provided by Dr. Chunlin Qinprimary antibody for immunochemical staining
anti-rabbit IgGSigma18140control for immunochemical staining
secondary antibody InvitrogenA11008second antibody for immunochemical staining
OCTTissue-Tek4583embed the sample for frozen section
Tween 20Fisher ScientificBP337PBST
non-fluorescing antifade mountantLife technologiesP36934mounting slides
DAPILife technologiesP36931nuclear staining
Hydrophobic Barrier PenVector Laboratoriescircle the section on the slide for for immunochemical staining 
XylazineAnaSedanesthetization 
Ketaset Zoetisanesthetization 
cryosection machineLeicaCM1860 UV
confocal microscopeLeicaDM6000 CFS 

Referanslar

  1. Gibson, G. Active role of chondrocyte apoptosis in endochondral ossification. Microsc Res Tech. 43 (2), 191-204 (1998).
  2. Kronenberg, H. M. Developmental regulation of the growth plate. Nature. 423 (6937), 332-336 (2003).
  3. Shapiro, I. M., Adams, C. S., Freeman, T., Srinivas, V. Fate of the hypertrophic chondrocyte: microenvironmental perspectives on apoptosis and survival in the epiphyseal growth plate. Birth Defects Res C Embryo Today. 75 (4), 330-339 (2005).
  4. Kahn, A. J., Simmons, D. J. Chondrocyte-to-osteocyte transformation in grafts of perichondrium-free epiphyseal cartilage. Clin Orthop Relat Res. (129), 299-304 (1977).
  5. Roach, H. I. Trans-differentiation of hypertrophic chondrocytes into cells capable of producing a mineralized bone matrix. Bone Miner. 19 (1), 1-20 (1992).
  6. Park, J., et al. Dual pathways to endochondral osteoblasts: a novel chondrocyte-derived osteoprogenitor cell identified in hypertrophic cartilage. Biol Open. 4 (5), 608-621 (2015).
  7. Kretzschmar, K., Watt, F. M. Lineage tracing. Cell. 148 (1-2), 33-35 (2012).
  8. Humphreys, B. D., DiRocco, D. P. Lineage-tracing methods and the kidney. Kidney Int. 86 (3), 481-488 (2014).
  9. Romagnani, P., Rinkevich, Y., Dekel, B. The use of lineage tracing to study kidney injury and regeneration. Nat Rev Nephrol. 11 (7), 420-431 (2015).
  10. Yang, G., et al. Osteogenic fate of hypertrophic chondrocytes. Cell Res. 24 (10), 1266-1269 (2014).
  11. Yang, L., Tsang, K. Y., Tang, H. C., Chan, D., Cheah, K. S. Hypertrophic chondrocytes can become osteoblasts and osteocytes in endochondral bone formation. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (33), 12097-12102 (2014).
  12. Jing, Y., et al. Chondrocytes Directly Transform into Bone Cells in Mandibular Condyle Growth. J Dent Res. 94 (12), 1668-1675 (2015).
  13. Zhou, X., von der Mark, K., Henry, S., Norton, W., Adams, H., de Crombrugghe, B. Chondrocytes transdifferentiate into osteoblasts in endochondral bone during development, postnatal growth and fracture healing in mice. PLoS Genet. 10 (12), (2014).
  14. Purcell, P., Trainor, P. A. The Mighty Chondrocyte: No Bones about It. J Dent Res. 94 (12), 1625-1627 (2015).
  15. Gebhard, S., et al. Specific expression of Cre recombinase in hypertrophic cartilage under the control of a BAC-Col10a1 promoter. Matrix Biol. 27 (8), 693-699 (2008).
  16. Kalajzic, Z., et al. Directing the expression of a green fluorescent protein transgene in differentiated osteoblasts: comparison between rat type I collagen and rat osteocalcin promoters. Bone. 31 (6), 654-660 (2002).
  17. Akiyama, H., et al. Osteo-chondroprogenitor cells are derived from Sox9 expressing precursors. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (41), 14665-14670 (2005).
  18. Henry, S. P., et al. Generation of aggrecan-CreERT2 knockin mice for inducible Cre activity in adult cartilage. Genesis. 47 (12), 805-814 (2009).
  19. Ren, Y., Lin, S., Jing, Y., Dechow, P. C., Feng, J. Q. A novel way to statistically analyze morphologic changes in Dmp1-null osteocytes. Connect Tissue Res. 55, 129-133 (2014).
  20. Pest, M. A., Beier, F. Developmental biology: Is there such a thing as a cartilage-specific knockout mouse?. Nat Rev Rheumatol. 10 (12), 702-704 (2014).
  21. Tsang, K. Y., Chan, D., Cheah, K. S. Fate of growth plate hypertrophic chondrocytes: death or lineage extension?. Dev Growth Differ. 57 (2), 179-192 (2015).
  22. Sugimoto, Y., Takimoto, A., Hiraki, Y., Shukunami, C. Generation and characterization of ScxCre transgenic mice. Genesis. 51 (4), 275-283 (2013).
  23. Feng, J. Q., et al. Generation of a conditional null allele for Dmp1 in mouse. Genesis. 46 (2), 87-91 (2008).
  24. Lu, Y., Xie, Y., Zhang, S., Dusevich, V., Bonewald, L. F., Feng, J. Q. DMP1-targeted Cre expression in odontoblasts and osteocytes. J Dent Res. 86 (4), 320-325 (2007).
  25. Rios, A. C., Fu, N. Y., Lindeman, G. J., Visvader, J. E. In situ identification of bipotent stem cells in the mammary gland. Nature. 506 (7488), 322-327 (2014).
  26. Blanpain, C., Simons, B. D. Unravelling stem cell dynamics by lineage tracing. Nat Rev Mol Cell Biol. 14 (8), 489-502 (2013).
  27. Huh, W. J., Khurana, S. S., Geahlen, J. H., Kohli, K., Waller, R. A., Mills, J. C. Tamoxifen induces rapid, reversible atrophy, and metaplasia in mouse stomach. Gastroenterology. 142 (1), 21-24 (2012).
  28. Lee, M. H., Kim, J. W., Kim, J. H., Kang, K. S., Kong, G., Lee, M. O. Gene expression profiling of murine hepatic steatosis induced by tamoxifen. Toxicol Lett. 199 (3), 416-424 (2010).
  29. Nakamura, E., Nguyen, M. T., Mackem, S. Kinetics of tamoxifen-regulated Cre activity in mice using a cartilage-specific CreER(T) to assay temporal activity windows along the proximodistal limb skeleton. Dev Dyn. 235 (9), 2603-2612 (2006).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Geli imsel BiyolojiSay 118h cre soyu izlemeh cre transdiferansiasyonimm nofloresankondrositosteoblastosteosit

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır