JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

ويرد وصف بروتوكولا تجزئة مختصر لإثراء المجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات من الدماغ البشري تشريح الجثة.

Abstract

في هذه الدراسة، ونحن تصف بروتوكولا يختصر خطوة واحدة تجزئة لإثراء المجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات من الدماغ البشري تشريح الجثة. المنظفات الأيونية ن-سولفات-ساركوسيني (ساركوسيل) سولوبيليزيس فعالية البروتينات مطوية أصلاً في أنسجة المخ مما يسمح في إثراء المجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات من طائفة واسعة من بروتينوباثيس الأعصاب، مثل مرض الزهايمر (AD) ومرض باركنسون والتصلب العضلي الجانبي وأمراض بريون. كانت سيطرة الإنسان وأنسجة المخ تشريح الجثة الإعلانية المتجانس ورسابه تنبيذ فائق حضور ساركوسيل لإثراء المجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات الصناعية بما في ذلك تاو فوسفوريلاتيد باثولوجي، العنصر الأساسي من نيوروفيبريلاري التشابك في الإعلان. النشاف الغربية أظهرت أن القابلية للذوبان التفاضلية تاو فوسفوريلاتيد مجمعة والبروتين للذوبان المنظفات، 1 مستضد دخلول المبكر (EEA1) في السيطرة والدماغ الإعلانية. كما كشف تحليل البروتين إثراء بيتا-اميلويد (Aβ)، تاو، snRNP70 (U1-70 ك)، والابوليبوبروتين ه (الذين) في كسور الدماغ الإعلانية مقارنة بتلك التي تحكم، تمشيا مع الاستراتيجيات السابقة في وجود أنسجة تستعصي على الحل ساركوسيل . وهكذا، هذا البروتوكول تخصيب بسيطة مثالية لمجموعة واسعة من تطبيقات تجريبية بدءاً من النشاف الغربية والبروتين وظيفية فحوصات التجميع المشارك البروتيوميات الجماعي القائم على قياس الطيف الكتلي.

Introduction

أمراض الأعصاب مثل مرض الزهايمر (AD) ومرض باركنسون (PD) ومرض هنتنغتون (HD)، والتصلب العضلي الجانبي (المرض) وأمراض بريون وثيق الصلة بروتينوباثيس تتميز بتراكم تدريجي انخفاض المجاميع البروتين المنظفات الذوبان في الدماغ مع مرافقة المعرفية. 1 , ويعتقد أن تلعب دوراً مركزياً في المسببات والفيزيولوجيا المرضية لهذه الأمراض الأعصاب 2 هذه الميزة المرضية المشتركة. 2 هذه المجاميع وعادة ما تتألف من ألياف اميلويد البوليمرية، التي تتكون من تكرار وحدات من البروتين تجمعات العارضة عبر β-الهيكل. 1 , 2 , 3 , 4 المتحلل، المجاميع اميلويد هي شديدة المقاومة تمسخ الكيميائية أو الحرارية وسولوبيليزيشن،3 التي تشكل تحديات فريدة من نوعها لتنقية بهم، تحليل ودراسة عن طريق التقنيات الحيوية التقليدية. 2 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 لا غرابة، الكسر البروتين تستعصي على الحل المنظفات قد تم تركيز الكثير من البحوث في الفسيولوجيا المرضية لأمراض الأعصاب التي تشمل تراكم البروتينات تجمعات. 6 , 12 , 13 , 14

كثيرا ما استخدمت تقنيات تجزئة البيوكيميائية لإثراء الكسر تستعصي على الحل المنظفات من homogenates الدماغ تشريح الجثة. 6 , 12 , 13 , 14 واحد من الأساليب الأكثر شيوعاً يشمل استخراج متسلسلة من الأنسجة هوموجيناتيس مع المخازن المؤقتة والمنظفات الصناعية المتزايدة الصرامة، تليها تنبيذ فائق لتقسيم الكسور القابلة للذوبان وغير قابلة للذوبان. 6،بروتوكول14 تجزئة متسلسلة استخداماً ينطوي على تجانس عينات الأنسجة المجمدة في منطقة عازلة خالية من المنظفات منخفضة ملح (LS) والكريات الناتجة غير قابلة للذوبان ثم تستخرج تسلسلياً مع المخازن المؤقتة التي تحتوي على الملح عالية، والمنظفات غير الأيونية، السكروز عالية، المنظفات الأيونية، وأخيراً تشاوتروبيس مثل اليوريا. 6 , 14 هو عيب واضح من هذه البروتوكولات تجزئة متسلسلة وقت كبير والتزام العمل المطلوب لإكمال لهم. بما في ذلك التجانس وتنبيذ فائق، يمكن اتخاذ بروتوكول نموذجي خمس خطوات تجزئة عدة ساعات أو حتى أيام لاستكمال. 4 , 6 , 7 , 10 , 15 , 16 , 17 , 18 بالإضافة إلى ذلك، يظل العديد من البروتين باثولوجي المجاميع غير قابلة للذوبان في جميع ولكن ظروف أقسى19،20 معظم الكسور التي تم إنشاؤها ذات قيمة محدودة. وهكذا، خطوات تجزئة أقل صرامة استخدام تركيزات عالية من الملح والمنظفات غير الأيونية زائدة عن الحاجة إلى حد كبير.

وقد أظهرت الدراسات السابقة أن المنظفات الأيونية ن-سولفات-ساركوسيني (ساركوسيل) مرشح ممتاز لبروتوكول مبسط تجزئة منظفات في خطوة واحدة. 5 , 6 , 12 , 13 , 14 , 21 , 22 , 23 كمطهر يشوه، ساركوسيل صرامة ما يكفي جعل الغالبية العظمى من البروتينات مطوية أصلاً في الدماغ دون سولوبيليزينج المجاميع البروتين تجمعات تتألف من اميلويد بيتا (Aβ)،6،11 تاو فوسفوريلاتيد (بتاو)،6 "القطران الحمض النووي" ملزم بروتين 43 (ماساتشوستس-43)،14 ألفا-سينوكلين أو الرعاش13 12،،23 أو U1 الصغيرة النووية ريبونوكليوبروتينس (U1 سنرنبس) مثل U1-70 ك. 5 , 21 , 22 كما ساركوسيل أقل صرامة من كبريتات دوديسيل الصوديوم المنظفات أنيونى في كل مكان (SDS)، فإنه يحافظ على أشكال oligomeric أقل متانة من المجاميع تجمعات البروتين التي لا يمكن أن تصمد أمام معاملة الحزب الديمقراطي الصربي. 9

سابقا، يمكننا وصف بروتوكولا المنظفات-تجزئة مختصر الذي حقق نتائج قابلة للمقارنة للمنهجيات تجزئة متسلسلة أكثر شاقة. 5 بحذف الخطوات تجزئة أقل صرامة، استطعنا أن وضع بروتوكول تجزئة خطوة واحدة سهلة لإثراء المجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات من الدماغ البشري تشريح الجثة. 5 هذا البروتوكول التفصيلية الموضحة هنا مناسبة تماما لمجموعة واسعة من التطبيقات التجريبية تتراوح من النشاف الغربية وفحوصات البروتيوميات الجماعي القائم على قياس الطيف الكتلي misfolding البروتين وظيفية والبذر التجميع. 5 , 6 , 21

Protocol

"بيان الأخلاق": تم الحصول على جميع أنسجة الدماغ من مرض الزهايمر أموري ' s المرض مركز البحوث (أدرك) المخ البنك. الأنسجة البشرية تشريح الجثة تم الحصول عليها تحت السليم المؤسسية استعراض المجلس (مجلس الهجرة واللاجئين) البروتوكولات.

1. التجانس ووجود

  1. اختيار الأنسجة
    ملاحظة: تجميد أنسجة اللحاء أمامي تشريح الجثة من مراقبة صحية (Ctl) ومرضية اختيرت الإعلانية الحالات المؤكدة أموري بنك أدرك الدماغ (n = 2). أجرى تقييم توزيع البلاك اميلويد لاثيل الجثة وفقا للاتحاد إنشاء سجل لمرض الزهايمر ' s المرض شبه كمي سجل 24 من المعايير، على الرغم من أن وقيمت متشابكة نيوروفيبريلاري علم الأمراض وفقا لنظام التدريج براك. وأكد 16
    1. الحصول على تجميد أنسجة المخ تشريح الجثة من مراقبة صحية (Ctl) ومرضية الحالات الإعلانية. استخدام حاويات الثلج الجاف وملقط وشفرة حلاقة، المكوس ~ تزن 250 ملغ أجزاء من المادة الرمادية من كل عينة الأنسجة على المتاح تريد القوارب، مع الحرص على منع الأنسجة من ذوبان الجليد. تسجيل وزن كل قطعة أن تجانس.
    2. المكوس ~ 250 ملغ المادة الرمادية باستخدام الملقط وأسلاك شائكة بتفتيش بصريا لتحديد العلاقة بين المادة الرمادية الخارجي والداخلي الأبيض المسألة. تجنب هذه المسألة الأبيض، والأهم من ذلك، أي الأوعية الدموية الكبيرة أو في مناطق الدموي أو السحايا ماطر العنكبوتي. الحفاظ على الأنسجة المجمدة أثناء عملية القطع بالعمل بسرعة، وكثيراً ما وضع قارب وزنها مع أنسجة المخ في حاويات البوليستيرين مع مدت الجافة
    3. سجل الوزن الدقيق للمادة الرمادية التي اقتطعت من كل قطعة مجمدة باستخدام رصيد التحليلي. حساب حجم المخزن المؤقت منخفضة الملح (LS) (انظر الجدول 1) اللازمة لتجانس دونس (5 مل/g أو 20% w/v)-
    4. إعداد 10 مل LS المخزن المؤقت مع 1 × مثبطات البروتياز والفوسفاتيز كوكتيل والبرد على مدت
    5. إزالة الأنسجة وزنه وقارب وزنها من الثلج الجاف والزهر أربا 2 × 2 مم تقريبا كما أنه يذوب. نقل إلى أنبوب الخالطون دونس برود قبل 2 مل على مدت
    6. إضافة 5 مل/ز (20% w/v) من المخزن المؤقت المثلج الملح منخفضة (LS) مع 1 × مثبطات البروتياز والفوسفاتيز كوكتيل.
    7. هوموجينيزي أنسجة المخ على الجليد باستخدام حوالي 10 السكتات الدماغية التخليص عالية مدقة أ والسكتات الدماغية 15 من تطهير منخفض مدقة باء
    8. نقل جميع هوموجيناتي إلى أنبوب البولي بروبيلين 2 مل استخدام زجاج ماصة باستور. قم بتسمية الأنبوب مع “ ال ” (مجموع هوموجيناتي)، الأنسجة القضية وعدد هوموجيناتي حجم. قاسمة 0.8 مل في أنبوب مسمى 1.5 مل. يمكن أن يكون أي هوموجيناتي الزائدة وبالمثل اليكووتيد والمخزنة في-80 درجة مئوية.
    9. لكل مل 0.8 الكوة، إضافة 100 ميليلتر من كل 5 م كلوريد الصوديوم وساركوسيل 10% (w/v) إلى تركيزات 0.5 M و 1% w/v، على التوالي. مزج الأنابيب جيدا بانعكاس واحتضان على الجليد لأنابيب تسمية 15 دقيقة مع " ال-S " (مجموع هوموجيناتي-ساركوسيل) تشير إلى هوموجيناتيس في ساركوسيل-المخزن المؤقت (الجدول 1).
    10. Sonicate كل أنبوبة لنبضات ق 5 ثلاث في السعة 30% على الجليد (أقصى شدتها = 40%) باستخدام مسبار ميكروتيب.
    11. تحديد تركيزات البروتين هوموجيناتيس استخدام حمض بيسينتشونينيك (اتفاق التعاون الأساسي) الاعتداء 25 الأسلوب.
      ملاحظة: يتم تركيز البروتين متوسط هوموجيناتيس ال ق أعد في مل 5 ليرة سورية كل غرام من النسيج 15-20 ملغ/مل. يمكن مجزأ مباشرة هوموجيناتيس أو تخزينها في-80 درجة مئوية حتى استخدام.
    12. Homogenates تمييع TH-S إلى 10 ملغ/مل باستخدام المخزن المؤقت لسارك المثلج (الجدول 1) مع 1 × مثبطات البروتياز والفوسفاتيز.
      13. بروتين
    13. نقل 5 ملغ (0.5 مل) من كل هوموجيناتي دا ال 500 ميليلتر البولي أولتراسينتريفوجي أنابيب وزوج-التوازن مع المخزن المؤقت سارك. تحميل أنابيب إلى الدوار قبل مبردة وأولتراسينتريفوجي في س 180,000 ز لمدة 30 دقيقة في supernatants نقل للذوبان ساركوسيل درجة مئوية. 4 (S1) إلى أنابيب 1.5 مل وتخزينها في-80 درجة مئوية.
      ملاحظة: (أغسل اختياري) إضافة 200 ميليلتر لسارك-المخزن المؤقت إلى أولتراسينتريفوجي الأنابيب التي تحتوي على كسور تستعصي على الحل المنظفات (P1) وإزاحة الكريات (P1) من الجزء السفلي من الأنابيب أولتراسينتريفوجي استخدام تلميح ماصة 200 ميليلتر.
      14. أنابيب
    14. بإيجاز نبض-تدور المقلوب ل s 2-3 (≤ 2,500 ز س) في ميكروسينتريفوجي لنقل الكريات (P1) والعازلة للأنابيب 1.5 مل أدناه. ريسوسبيند الكريات (P1) غير قابلة للذوبان في سارك-المخزن المؤقت قبل بيبيتينج صعودا وهبوطاً لضمان تعطل بيليه.
    15. زوج-التوازن، وأجهزة الطرد المركزي في 180,000 س ز 30 دقيقة إضافية في 4 ° C.
    16. تجاهل المادة طافية يغسل الاختياري (S2) واحتضان الكريات تستعصي على الحل ساركوسيل (P2) في 50-75 ميليلتر من اليوريا المخزن المؤقت (الجدول 1) مع 1 × الموافقة المسبقة عن علم (مثبط البروتياز والفوسفاتيز كوكتيل) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة جعل بيليه-
      ملاحظة: اليوريا الحارة المخزن المؤقت إلى درجة حرارة الغرفة قبل استخدامها لتجنب ترسيب الحزب الديمقراطي الصربي. تطبيقات حساسة للمنظفات، تجاهل الحزب الديمقراطي الصربي من المخزن المؤقت لليوريا وتنظر الغسيل بيليه (P2) غير قابلة للذوبان في المخزن المؤقت الملح منخفضة قبل ريسوسبيندينج في المخزن المؤقت لليوريا.
    17. نقل الكريات ريسوسبينديد (P2) إلى أنابيب 0.5 مل واستخدام موجز (1 s) سونيكيشن ميكروتيب في السعة 20% (أقصى شدتها = 40 ٪) جعل كامل الكريات.
    18. تحديد تركيزات بروتين قابل للذوبان ساركوسيل (S1)-والاعتداء الكسور (P2) غير قابلة للذوبان في اتفاق التعاون الأساسي باستخدام الأسلوب. استخدم هذه الكسور مباشرة أو تخزينها في-80 درجة مئوية حتى استخدام.

2. إيمونوبلوتينج

  1. النشاف الغربية
    ملاحظة: النشاف الغربية أجرى وفقا لإجراءات الإبلاغ عنها سابقا مع تعديلات طفيفة. 5 ، 10
    1. إعداد 40 ميكروغرام عينات من مجموع هوموجيناتيس (TH-S) وسارك القابلة للذوبان (S1) وتستعصي على الحل سارك الكسور (P2) في المخزن المؤقت للعينة X لايملي الحزب الديمقراطي الصربي صفحة 1 مع 5 مم تسيب الأس الهيدروجيني 7. احتضان عينات من 95 درجة مئوية للحد الأدنى 5
      2. هلام
    2. تحميل عينات في الخرسانة الجاهزة 10-جيدا 4-12% مكررا-تريس الحزب الديمقراطي الصربي صفحة. اليكتروفوريسي في 80 الخامس للسنتيمتر الأول (10 دقيقة) و 120 الخامس للفترة المتبقية (60 دقيقة) أو حتى صبغ تتبع تصل إلى الجزء السفلي من الجل.
    3. استخدام شفرة حلاقة جديدة وجل السكين إلى سبليت--فتح كاسيت جل مسبقة الصب. قص بلطف بعيداً الامشاط وأسفل جداً من الجل مع شفرة حلاقة جديدة-
    4. ريسوسبيند غير قابلة للذوبان الكريات (P1) في 200 ميليلتر سارك-المخزن المؤقت مع x 1 الموافقة المسبقة عن علم قبل بيبيتينج أعلى وأسفل.
    5. نقل إلى غشاء النيتروسليلوز 0.2 ميكرون باستخدام أسلوب نقل جافة على جهاز بلوتينج (انظر الجدول المواد)-
    6. كتلة الغشاء في حجب المخزن المؤقت (بب) دون توين 20 لمدة 30 دقيقة، تلت مع BB مع 0.05% 20 توين (BB/تي) لمدة 30 دقيقة. وبعد تجميد، شطف الغشاء في تبس/تي (0.1% 20 توين) لمدة 5 دقائق لإزالة المخزن المؤقت حظر الزائدة.
    7. تحضير 1:1,000 تخفيف من pT231 الأجسام المضادة الأولية، وتاو-2 (عموم تاو)، AT8 و EEA1 في BB/T (توين 0.05% 20)-
    8. احتضان الأغشية في حل جسم الأولية بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع الانفعالات دائرية. شطف الغشاء في تبس/تي ل 3 × 15 دقيقة
    9. مسبار الغشاء مع إضعاف 1:20,000 المسمى فلوريسسينتلي قرب الأشعة تحت الحمراء الثانوية جسم في BB/تي لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام على شاكر. شطف الغشاء 3 × 10 دقيقة في تبس/T ودقيقة 2 × 5 في tbs.
    10. مسح الغشاء باستخدام الأشعة تحت حمراء التصوير النظام في الطول الموجي الإثارة المناسبة (مثلاً 700 نانومتر (القناة الحمراء) للأشعة تحت الحمراء صبغ 680 الماعز الماوس المضادة مفتش (H + L) الثانوي و 800 نانومتر (قناة الأخضر) لصبغ الأشعة تحت الحمراء 790 حمار الأرنب المضادة IgG (H + L ) ثانوي)-
    11. استخدام برامج التصوير لقياس كثافة الإشارات وإجراء القياسات قياس كثافة حسب الشركة المصنعة ' تعليمات s، تأمين السيارات-خلفية الإعداد يتم تعيين إلى متوسط الخلفية كاملة-

النتائج

تم استخدام البروتوكول يختصر خطوة واحدة ساركوسيل-تجزئة لإثراء المجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات من التحكم والإعلانية تشريح الجثة الدماغ (الشكل 1). تم حل البروتينات من الكسور TH-S، S1، S2 و P2 بصفحة الحزب الديمقراطي الصربي، ثابتة لمدة 15 دقيقة في أخذ الم...

Discussion

هنا يمكننا إدخال ومناقشة بروتوكول المنظفات-تجزئة خطوة واحدة مختصرة التي تنطبق على مجموعة متنوعة من تطبيقات تجريبية تتراوح بين التحليل الشامل القائم على قياس الطيف الكتلي البروتيوميات البروتين وظيفية misfolding فحوصات والنشاف الغربية. 5 , 6 , 7...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون الدكتور جيم لاه وليفي الآن، إدارة أموري لطب الأعصاب، اقتراحات وتعليقات مفيدة. تم تمويل هذا العمل جزئيا "التعجيل بالشراكة الطب" المنحة (U01AG046161-02)، مرض الزهايمر أموري لمنح مركز بحوث الأمراض (P50AG025688) والمعهد الوطني الشيخوخة (R01AG053960-01) إلى N.T.S. هذا البحث أيضا تدعمها جزئيا "جوهر" المنحة "أموري علم الأعصاب NINDS المرافق الأساسية"، P30NS055077 أمراض الأعصاب.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Protease and phosphatase inhibitor cocktail, EDTA-free (100X)Thermo Fisher78441protease & phosphatase inhibitor cocktail
Sonic Dismembrator System (ultrasonicator)Fisher ScientificFB505110microtip ultrasonicator
Optimax TLX UltracentrifugeBeckman Coulter361545refrigerated ultracentrifuge
TLA120.1 rotorBeckman Coulter362224ultracentrifuge rotor
500 ul (8 x 34 mm) polycarbonate tubes, thickwallBeckman Coulter343776ultracentrifuge tubes for TLA120.1 rotor
4X SDS sample bufferHome-madeN/ASDS-PAGE
TCEP solution, neutral pHThermo Fisher77720reducing agent
(TBS) blocking bufferThermo Fisher37542blocking buffer
(TBS) blocking buffer + 0.05% Tween 20Thermo Fisher37543blocking buffer and antibody diluent
4-12% Bolt Bis-Tris Plus gels, 10-wellThermo FisherNW04120BOXprecast SDS-PAGE gels
MES SDS Running Buffer (20X)Thermo FisherB0002SDS-PAGE running buffer
N-Lauroylsarcosine sodium salt (sarkosyl)Sigma AldrichL5777-50Gdetergent
Anti-Tau-2 (pan tau) antibodyChemiconMAB375antibodies
Anti-phospho-threonine 231 Tau antibodyMilliporeMAB5450antibodies
Anti-phospho-seroine 202 and threonine 205 Tau antibody (AT8)Thermo FisherMN1020antibodies
Anti-early endosome antigen 1 (EEA1) antibodyabcamab2900antibodies
Alexa Fluor 680 goat anti-mouse IgG (H+L) secondary antibodyThermo FisherA21058antibodies
Alexa Fluor 790 donkey anti-rabbit IgG (H+L) secondary antibodyThermo FisherA11374antibodies
iBlot2 Dry Blotting SystemThermo FisherIB21001Gel transfer
iBlot2 Transfer Stacks, Nitrocellulose, miniThermo FisherIB23002Gel transfer

References

  1. Taylor, J. P., Hardy, J., Fischbeck, K. H. Toxic Proteins in Neurodegenerative Disease. Science. 296 (5575), 1991 (1991).
  2. Ross, C. A., Poirier, M. A. Protein aggregation and neurodegenerative disease. Nature Medicine. 10, S10-S17 (2004).
  3. Ramírez-Alvarado, M., Merkel, J. S., Regan, L. A systematic exploration of the influence of the protein stability on amyloid fibril formation in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. 97 (16), 8979-8984 (2000).
  4. Hamley, I. W. The Amyloid Beta Peptide: A Chemist's Perspective. Role in Alzheimer's and Fibrillization. Chem Rev. 112 (10), 5147-5192 (2012).
  5. Diner, I., et al. Aggregation Properties of the Small Nuclear Ribonucleoprotein U1-70K in Alzheimer Disease. J. Biol. Chem. 289 (51), 35296-35313 (2014).
  6. Gozal, Y. M., et al. Proteomics Analysis Reveals Novel Components in the Detergent-Insoluble Subproteome in Alzheimer's Disease. J. Proteome Res. 8 (11), 5069-5079 (2009).
  7. Hales, C. M., et al. Changes in the detergent-insoluble brain proteome linked to amyloid and tau in Alzheimer's Disease progression. PROTEOMICS. , (2016).
  8. Julien, C., Bretteville, A., Planel, E., Sigurdsson, E. M., Calero, M., Gasset, M. . Amyloid Proteins: Methods and Protocols. , 473-491 (2012).
  9. Nizhnikov, A. A., et al. Proteomic Screening for Amyloid Proteins. PLoS ONE. 9 (12), e116003 (2014).
  10. Seyfried, N. T., et al. Quantitative analysis of the detergent-insoluble brain proteome in frontotemporal lobar degeneration using SILAC internal standards. J. Proteome Res. 11 (5), 2721-2738 (2012).
  11. Woltjer, R. L., et al. Proteomic determination of widespread detergent insolubility, including Aβ but not tau, early in the pathogenesis of Alzheimer's disease. FASEB J. , (2005).
  12. Miake, H., Mizusawa, H., Iwatsubo, T., Hasegawa, M. Biochemical Characterization of the Core Structure of α-Synuclein Filaments. J. Biol. Chem. 277 (21), 19213-19219 (2002).
  13. Hasegawa, M., et al. Phosphorylated α-Synuclein Is Ubiquitinated in α-Synucleinopathy Lesions. J. Biol. Chem. 277 (50), 49071-49076 (2002).
  14. Neumann, M., et al. Ubiquitinated TDP-43 in Frontotemporal Lobar Degeneration and Amyotrophic Lateral Sclerosis. Science. 314 (5796), 130 (2006).
  15. Bishof, I., Diner, I., Seyfried, N. An Intrinsically Disordered Low Complexity Domain is Required for U1-70K Self-association. FASEB J. 29 (Suppl 1), (2015).
  16. Braak, H., Braak, E. Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol. 82 (4), 239-259 (1991).
  17. Noguchi, A., et al. Isolation and Characterization of Patient-derived, Toxic, High Mass Amyloid β-Protein (Aβ) Assembly from Alzheimer Disease Brains. J. Biol. Chem. 284 (47), 32895-32905 (2009).
  18. Bai, B., et al. U1 small nuclear ribonucleoprotein complex and RNA splicing alterations in Alzheimer's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. 110 (41), 16562-16567 (2013).
  19. Klunk, W. E., Pettegrew, J. W. Alzheimer's β-Amyloid Protein Is Covalently Modified when Dissolved in Formic Acid. J Neurochem. 54 (6), 2050-2056 (1990).
  20. Yang, L. -. S., Gordon-Krajcer, W., Ksiezak-Reding, H. Tau Released from Paired Helical Filaments with Formic Acid or Guanidine Is Susceptible to Calpain-Mediated Proteolysis. J Neurochem. 69 (4), 1548-1558 (1997).
  21. Bai, B., et al. U1 small nuclear ribonucleoprotein complex and RNA splicing alterations in Alzheimer's disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (41), 16562-16567 (2013).
  22. Hales, C. M., et al. U1 small nuclear ribonucleoproteins (snRNPs) aggregate in Alzheimer's disease due to autosomal dominant genetic mutations and trisomy 21. Mol Neurodegener. 9 (1), 15 (2014).
  23. Xiong, L. -. W., Raymond, L. D., Hayes, S. F., Raymond, G. J., Caughey, B. Conformational change, aggregation and fibril formation induced by detergent treatments of cellular prion protein. J Neurochem. 79 (3), 669-678 (2001).
  24. Mirra, S. S., et al. The Consortium to Establish a Registry for Alzheimer's Disease (CERAD). Part II. Standardization of the neuropathologic assessment of Alzheimer's disease. Neurology. 41 (4), 479-486 (1991).
  25. Smith, P. K., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal. Biochem. 150 (1), 76-85 (1985).
  26. Guo, J. L., et al. Unique pathological tau conformers from Alzheimer's brains transmit tau pathology in nontransgenic mice. J. Exp. Med. 213 (12), 2635-2654 (2016).
  27. Matveev, S. V., et al. A distinct subfraction of Aβ is responsible for the high-affinity Pittsburgh compound B-binding site in Alzheimer's disease brain. J Neurochem. 131 (3), 356-368 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

128

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved