سحجه الظهارة القرنية مع لدغ العين كنموذج للقرنية التئام الجروح

Summary

هذا البروتوكول وصف أسلوب لتلحق التآكل على سطح العين للماوس، ومتابعة الجرح شفاء العملية بعد ذلك. البروتوكول يستفيد من لدغ العين جزئيا إزالة ظهارة سطح العين في الفئران فظاعتها.

Abstract

القرنية مورين يوفر نموذجا ممتازا لدراسة التئام الجروح. القرنية هي الطبقة الخارجية للعين، وبالتالي هو الدفاع الأولى للإصابة. في الواقع، النوع الأكثر شيوعاً من إصابة العين وجدت في عيادة كشط القرنية. هنا، فنحن نستخدم لدغ العين للحث كشط أسفر عن إزالة ظهارة القرنية في فيفو على تخديره من الفئران. يسمح هذا الأسلوب لتعطيل الظهارية المستهدفة واستنساخه، ترك مناطق أخرى سليمة. وبالإضافة إلى ذلك، وصف تصور ظهارة الحبيبات مع تلطيخ fluorescein، وتقديم المشورة ملموسة بشأن كيفية تصور القرنية الحبيبات. ثم، نحن نتبع الجدول الزمني للجرح شفاء 0, 18 و 72 ح بعد الكشط، حتى الجرح هو إعادة متظهرنه. نموذج إصابة القرنية الظهارية كشط مثالي للدراسات المتعلقة بانتشار الخلايا الظهارية، والهجرة، وإعادة epithelialization من طبقات القرنية. ومع ذلك، هذا الأسلوب ليس الأمثل لدراسة تفعيل stromal أثناء التئام الجروح، نظراً لعدم اختراق لدغ العين إلى طبقات الخلايا اللحمية. هذا الأسلوب أيضا مناسبة للتطبيقات السريرية، على سبيل المثال، قبل الإكلينيكية اختبار فعالية العقاقير.

Introduction

طبقات طلائي أجهزة عديدة يتعرضون لإصابات. بيد أنها تحتوي أيضا على القدرة على التعويض عن فقدان الأنسجة من خلال التئام الجروح. القرنية يقدم نموذجا ممتازا لدراسة التئام الجروح. أشكال السطح الخارجي للعين، ويوفر طبقة واقية لآلية العين الحساسة. وهكذا، القرنية تعمل كحاجز مادي لمسببات الأمراض وفقدان المياه. وهو يتألف من ثلاث طبقات؛ ظهارة وسدى والبطانة. ظهارة القرنية تشكل الطبقة الخارجية للقرنية. الخلايا الظهارية الحفاظ على وظيفة الحاجز القرنية بالتقيد بدقة ببعضها البعض عن طريق تقاطعات ضيق^1،،من²³. غشاء القرنية اللاخلوي الطابق السفلي، غشاء بومان، يفصل في الظهارة ستروما واسعة النطاق، التي تحتوي على كيراتوسيتيس المقاوم للحرارة. تحت ستروما، القناة خلايا بطانية بالمواد الغذائية والمياه والأوكسجين إلى الطبقة العليا.

سحجات القرنية شائعة جداً في عيادة⁴. إصابات القرنية متنوعة، ولكن إلى حد كبير تسببها جزيئات صغيرة مثل الغبار أو الرمل أو الخدوش أو كائنات أخرى أجنبية. ووصف البروتوكول هنا تهدف إلى استنساخ نوع ذات صلة سريرياً كشط القرنية الظهارية. عند القيام بذلك، يوفر هذا البروتوكول طريقة يمكن السيطرة عليها والاصيلة للأطباء والعلماء القرنية لتنفيذ الدراسات الخاصة بهم. ونحن قد يؤديها في فيفو إصابة إصلاح مقايسة على القرنية مورين كاشط الأنسجة مع لدغ العين المتبلدة، ثانيا الجيربروش. هنا، نحن نستهدف الكشط فقط ظهارة القرنية المركزية وترك أجزاء أخرى من الجهاز دون أضرار. وهكذا، البروتوكول المثالي لدراسة ديناميات الخلايا الظهارية القرنية أو الأغشية الطابق السفلي أثناء إعادة ابيثيلياليزيشن، خلية الهجرة والانتشار والتمايز في فيفو⁵. مؤخرا، تم استخدام هذا النموذج لتحليل ديناميات الخلايا السلف في القرنية مورين، وكذلك فيما يتعلق بكشف النقاب عن قدرة الخلايا الظهارية القرنية المتباينة في إعادة تأسيس مكانة الخلايا الجذعية القرنية بعد إصابة^6،7. عقب الكشط، ترجع القرنية بشفافيته المعتادة والشد. من المثير للاهتمام، أوضحت دراسة في المختبر أن epithelialization إعادة يحدث دون انتشار الخلايا زيادة⁸. ويصف هذا البروتوكول الجدول الزمني للشفاء دون انقطاع في القرنية مورين. وبالتالي ينطبق الأسلوب لاختبار أثر المخدرات على شفاء أنماط والسرعة.

وقد استخدمت على نطاق واسع القرنية للجرح شفاء الدراسات. ومع ذلك، قد اعتمدت العديد من الدراسات على نماذج أخرى للإصابة. نموذج راسخة لإصابة القرنية هو حرق القلوية التي يتم تنفيذها بواسطة تطبيق هيدروكسيد الصوديوم (هيدروكسيد الصوديوم) مع أو بدون تصفية الورق على سطح القرنية⁹. التعرض القلوية ينتج ضرر كبير ومنتشر يؤثر على ظهارة القرنية، ليس فقط، بل أيضا الملتحمة وسدى^9،10. حلول قلوية قوية تبين أن حمل قرحة القرنية، عتامة ونيوفاسكولاريزيشن⁹. الخلايا التحريضية تغزو ستروما عادة ضمن ح 6 والبقاء هناك حتى 24 ح¹¹. هكذا، إصابة القلوية أسلوب المستحسن في الدراسات المتعلقة بالتنشيط stromal. نوع آخر من الإصابات الكيميائية يمكن إنزالها بتطبيق ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس]) في^9،القرنية¹⁰. وتشمل نماذج الإصابة شائعة أخرى عن الجروح التي تخترق عن طريق الجروح ستروما وكيراتيكتومي، التي تقتصر على الجزء العلوي من ال^14،ستروما¹⁵. هذه الأساليب أيضا مفيدة للإجابة على الأسئلة بخصوص اللحمية التئام الجروح. نماذج مختلفة من الإصابة لها مزاياها وعيوبها. تم تطوير الكشط، أو ديبريديمينت، من ظهارة القرنية أولاً باستخدام المشارط المتبلدة أو شفرات على السابقين فيفو القرنيات¹⁶. وكان هذا الأسلوب في وقت لاحق المستخدمة في فيفو على الماوس وفار وارنب^17،،من^1819،20،،من²¹²². استخدام لدغ العين (الشكل 1)، نزيل فقط منطقة مختارة من الظهارة، تاركاً بقية الظهارة لم تتأثر. وبهذه الطريقة، فمن الممكن التحديد تستهدف إزالة الظهارية إلى أجزاء مختلفة من القرنية. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تقييم حجم الاحتكاك مع صبغة فلوريسسين. وعلاوة على ذلك، هنا ونحن نتابع الإغلاق كشط خلال فترة الشفاء.

يشكل هذا الأسلوب العديد من المزايا، ط) بما في ذلك الموقع الدقيق لموقع الكشط، وغير ممكن مع الإصابات الكيميائية، الثاني) التآكل السريع لأداء، والثالث) غير الغازية. هنا، نحن تصف طريقة استخدام الماوس الرنين أووتبريد كنموذج، ولكن هذا يمكن تطبيقها على مجموعة واسعة من النماذج الوراثية الماوس، وكذلك للفئران والأرانب، وهي النماذج الشائعة المستخدمة لدراسة اضطراب القرنية البشرية.

Protocol

جميع التجارب التي أقرها المجلس التجربة الحيوانية الوطنية.

1-الأعمال التحضيرية

1. إعداد جميع الحلول وتبقى في درجة حرارة الغرفة، ما لم يبين خلاف ذلك. اتبع أنظمة التخلص من النفايات للتصرف في استخدام المواد وإيجاد الحلول.
2. استخدام الرنين والممثل المدني الدولي أووتبريد الأرصدة، تتراوح أعمارهم بين 4-12 أسابيع واي من الجنسين. إذا كان استخدام سلالة C57BL/6، اتبع أسلوب إعداد ميديتوميديني الكيتامين في الخطوة 1-3-2. لاتخاذ خطوات أخرى، اتبع الإرشادات المذكورة في 1.3.3.-1.3.5.
3. إعداد الطب البيطري طازجة وفي الوقت المناسب قبل بدء العملية. والايبوبروفين سوف تستخدم في وقت لاحق، وبالتالي ليس من الضروري إعداد أنه عند هذه النقطة.
   1. إعداد حلاً من الكيتامين ميديتوميديني للتخدير، مزيج 0.375 مل (الأسهم تركيز 50 ملغ/مل) الكيتامين (التعليم والتدريب المهني كيتامينول) مع 0.25 مل (الأسهم تركيز 1 ملغ/مل) من ميديتوميديني (التعليم والتدريب المهني سيبيتور) وإضافة 1.25 مل العقيمة 0.9% كلوريد الصوديوم. إدارة 0.15 مل/20 غرام وزن الماوس (7.5 مغ/كغ، والكيتامين و 1 مغ/كغ، ميديتوميديني).
   2. إعداد حلاً أكثر مخفف من الكيتامين ميديتوميديني للتخدير في الفئران C57BL/6، مزيج 0.375 مل (الأسهم تركيز 50 ملغ/مل) الكيتامين مع 0.25 مل (الأسهم تركيز 1 ملغ/مل) من ميديتوميديني وإضافة 2.5 مل العقيمة 0.9% كلوريد الصوديوم. إدارة 0.15 مل/20 غرام وزن الماوس (3.75 مغ/كغ، والكيتامين و 0.5 ملغ/كغ، ميديتوميديني).
      ملاحظة: هذا خطوة بديلة، فقط للكبار C57BL/6 الفئران.
   3. إعداد بوبرينورفين للتسكين، إضافة 0.1 مل (الأسهم تركيز 0.3 مغ/مل) من بوبرينورفين إلى 1.9 مل العقيمة 0.9% كلوريد الصوديوم. إدارة 0.2 مل/20 غرام من وزن الماوس (0.15 مغ/كغ).
   4. لإعداد أتيباميزولي لوقف التخدير، إضافة 0.1 مل (الأسهم تركيز 5 ملغ/مل) من أتيباميزولي لمل 4.9 من 0.9% كلوريد الصوديوم. إدارة 0.15 مل/20 غرام وزن الماوس (0.75 مغ/كغ).
   5. للتسكين أثناء التخدير بعد انتهاء استخدام والايبوبروفين. إضافة 0.1 مل (الأسهم تركيز 50 ملغ/مل) من والايبوبروفين لمل 4.9 من 0.9% كلوريد الصوديوم. إدارة 0.15 مل/20 غرام وزن الماوس (7.5 مغ/كغ).
4. إعداد الحل المصبوغة نيون
   1. لتصور سحجه تحت الضوء الأزرق الكوبالت (الشكل 1)، استخدم حلاً فلورسنت. إعداد حل فلوريسسين 0.1% من الأولى قياس 10 مغ من الملح فلوريسسين مع مقياس جيد وثم إضافته إلى 10 مل في المحلول الملحي مخزنة الفوسفات (PBS).
   2. حماية الحل فلوريسسين من الضوء ويهز لمدة 5 دقائق على شاكر.
      ملاحظة: الحل فلوريسسين حساسة للضوء؛ يبقى الحل تغطيتها من الضوء. ويمكن تخزين هذا الحل في + 4 درجة مئوية لمدة 2-3 أيام. للاستخدام، يكون من المفيد وضع الحل فلوريسسين في زجاجة قطارة الذي يتم استخدامه لقطرات العين. استخدام عامل تصفية عقيمة عند نقل الحل إلى زجاجة القطارة.
5. تنظيف تلميح لدغ العين قبل وبعد الاستخدام؛ مع برنامج تلفزيوني أولاً ثم مع 70% EtOH. إذا جعل التآكل للفئران عدة خلال العملية نفسها، القيام بخطوات التنظيف بين كل الماوس.
6. وضع لوحة ساخنة على (+37 درجة مئوية) ووضع منشفة ورقية على ذلك.

2-القرنية الكشط

تحذير: استخدام ملابس واقية (قفازات، معطف مختبر) عند التعامل مع الفئران. وزن الماوس لتقدير حجم الدواء لإدارة.

1. استخدم الأسلوب سكروفينج بيد واحدة للتعامل مع الماوس²³. إدارة خليط الكيتامين-ميديتوميديني إينترابيريتونيلي (القائمة) إلى اليسار أسفل البطن. ضع الماوس على أقفاص فردية وانتظر حتى تغفو. وهذا يستغرق عادة أقل من 5 دقائق. ثم، بإدارة بوبرينورفين الأولى ومن ثم أتيباميزولي عن طريق الحقن القائمة. استخدام نفس الأسلوب المناولة.
   ملاحظة: عندما يتم إعطاء التخدير، البروتوكول ينبغي أن لا يكون مؤقتاً في أي لحظة.
2. قبل المتابعة، تحقق من أن لوحة ساخنة دافئة. ضع الماوس أنيسثيتيزيد على لوحة ساخنة. مستوى التخدير جيد إذا منعكس ذيل غائب، ولكن إصبع القدم المعاكسة الحالية. التحقق من ردود الفعل هذه معسر الذيل وأي أخمص القدمين مع الأصابع أو الملقط. لا تستخدم القوة المفرطة. وسوف تخدير آخر 20-25 دقيقة.
3. لجعل كشط، استخدم لدغ العين تنظيفها. قم بتدوير القاعدة للدغ لتشغيل الاهتزاز التي أمر أساسي لجعل الكشط. يشعر الاهتزاز في متناول اليد، عندما يعمل لدغ بشكل صحيح.
   1. فتح عين واحدة في وقت واحد بعقد الجفون بشكل منفصل مع الأصابع. ثم إيمانا راسخا اللمس لدغ للقرنية ونقل الصك ذهابا وإيابا، وكذلك جانبية على سطح العين. سوف تؤدي إلى اهتزاز لدغ الصفر؛ ضغط، ويهز أو تمزق القرنية. في القرنية الوسطى، تكفي 20 كاشط الحركات على السطح للحث على الجرح. لا رفع لدغ ومحاولة للبقاء في منطقة القرنية أن تآكل. اكتساب الاحتكاك الحجم العادي سيتطلب عدة جولات من الممارسة.
   
   ملاحظة: يمكن تحقيق أسيبسيس القرنية قبل الاحتكاك باستخدام حل تدين العيون.

3-التصوير الكشط

1. تضيء المنطقة الحبيبات باستخدام حل fluorescein والأزرق الكوبالت القلم الضوء (الشكل 1). سطح العين يظهر عديم اللون في الضوء المحيط. بعد تطبيق فلوريسسين، فلوريسسيس منطقة الحبيبات باللون الأخضر عند إلقاء الضوء العين بالقلم الخفيفة.
   1. إذا لزم الأمر، بفتح العين الحبيبات وبالمثل كما هو الحال في 2.3 وإدارتها قطره واحدة لحل فلوريسسين من زجاجة القطارة. أغسل العين مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني أو 0.9% كلوريد الصوديوم للحد من خلفية فلوريسسين. استخدام زجاجة قطارة أو ماصة للغسيل. نضح السائل بعيداً مع مسح لينة وتنظيف الرموش، إذا لزم الأمر. عادة ما يجمع السائل الفائض إلى الحدود الآنف العين، والقرب من افتتاح القناة المسيل للدموع.
      تحذير: تجنب لمس القرنية أثناء كليينينج كما يمكن أن يتسبب وسحجات طفيفة.
2. التقاط صور كشط القرنية.
   1. للحصول على صور مماثلة خلال كل دورة التصوير، استخدام أدوات مرفق ثابت للضوء القلم الأزرق الكوبالت وكاميرا SLR (الشكل 2). يوفر هذا البروتوكول إعداد التي من السهل أن تكرار (الشكل 2).
      1. لإرفاق على ضوء القلم والكاميرا، استخدام مصباح طاولة مع ذراع مرنة والمشبك وذراع كاميرا قابل لتعديل مع المشبك، على التوالي. القلم الخفيفة إلى الجدول مصباح والموقف فقط فوق العين الماوس ربط الكابل. الموضع الضوء بشكل مختلف قد يغير التصور من التآكل. ويرد في الشكل 2اقتراحا لوضع هذه الأدوات.
   2. استخدام كاميرا SLR لالتقاط صور للعين. وضع الحيوان في المسافة المطلوبة والموقف وتركيز الكاميرا (01:12) في ضوء الغرفة. وبعد ذلك، قم بإغلاق كافة أضواء أخرى إلا على ضوء القلم الأزرق الكوبالت.
      ملاحظة: الشريط مؤشر القلم الخفيفة إلى أسفل أو استخدام شريط المطاطي للحفاظ على ضوء طوال الوقت أثناء التصوير. وهذا قد يساعد إذا تصبح الصورة ضبابية. فمن الأسهل لتنفيذ الخطوة التصوير مع زميل له.

4-الاستيقاظ بعد "كشط القرنية"

1. إدارة بوبرينورفين الأولى ومن ثم أتيباميزولي عن طريق الحقن القائمة. استخدام نفس الأسلوب معالجة كما هو الحال في 2.1.
2. ضع قطره الفوسيدين المضادة للبكتيريا، العين حمض مرهم (إيساثال) لعيون الحبيبات وغير متآكل لترطيب والحفاظ سطح العين نظيفة من البكتيريا بعد التخدير.
3. كما سوف تستيقظ الماوس في 5-20 دقيقة على لوحة ساخنة، مراقبة الماوس أثناء فترة الاستيقاظ بعد التخدير. عندما يصبح الجوال، وضعه في قفص حدة.
   ملاحظة: إذا كان الاستيقاظ وقتاً أطول، ضع الماوس في القفص مع وسادة ساخنة أو مكان القفص كامل على صفيحة ساخنة ورصد الماوس بشكل منتظم. حين يلبس التخدير، الماوس عادة ما يهز وتصل إلى أعلى مع الجسم الأمامي. هذا السلوك ينبغي أن تعود إلى طبيعتها في 3-4 ساعات وبعد ذلك يمكنك وضع الماوس مرة أخرى إلى قفص مشتركة.
4. إدارة القائمة والايبوبروفين مرهم العين والتسكين في يومين متتاليين بعد الكشط، وبالمثل كما هو الحال في الخطوات 2.2. و 4-2.

5-التصوير أثناء التئام

1. في هذا البروتوكول، يشير استخدام الوقت 18 ح وح 72 بعد كشط لمراقبة إغلاق الجرح.
   1. لتصوير متتالية، تخدير الفئران كما هو موضح في 2.2.
   2. التقاط الصور كما هو موضح في 3.
   3. استيقظ الحيوانات مع القائمة أتيباميزولي ورصد فترة التنبيه كما هو موضح في 4.3.
      ملاحظة: إذا لم يكن استمرار المتابعة، euthanize الفأرة اليمين بعد 5.1.2. ويرد وصف القتل الرحيم في 6-1.

6-القرنية جمع ودمج البارافين

1. بعد النقطة الزمنية الأخيرة، التضحية بالحيوان. ضع الماوس في دائرة التي يمكن أن تملأ بأول أكسيد الكربون₂. ملء الهواء الدائرة مع شركة_2- عندما يكون الحيوان غير متحرك، انخﻻع فقرات عنق الرحم بسحب بشدة من قاعدة الذيل والضغط على منطقة الرقبة لأسفل في نفس الوقت.
   تنبيه: دائماً اتبع المبادئ التوجيهية للهيئة المحلية الرفق بالحيوان.
2. جمع مقلة العين كلها بقطع فتحه في الجلد إلى جانب العين مع مقص التشريح. وضع المقص تحت مقلة العين وقطع العصب العين لموسيقى البوب مقلة العين الخروج من المدار. استخدام الملقط إذا العين لا يخرج بسهولة.
   1. جعل ثقب في الجزء الخلفي العين، ومن ناحية الشبكية، مع إبرة ز 26 للسماح بتغلغل خالية من الحلول داخل العين.
      ملاحظة: لا تدع العين تصبح جافة، وبدلاً من ذلك، ووضعه في برنامج تلفزيوني حتى تواصل مع البروتوكول.
3. جمع مقلة العين في أنبوب 2 مل مع برنامج تلفزيوني. عدم إيقاف التجربة في هذه المرحلة.
4. إزالة برنامج تلفزيوني وإصلاح مقل العيون في 4% بارافورمالدهيد (PFA) في + 4 درجة مئوية لمدة 4-5 ساعات.
5. تحريك مقلة العين الثابتة لكاسيت أنسجة لمعالجة الأنسجة. استخدام أنسجة تجهيز الجهاز والبرنامج التالي:
   1. شطف مع برنامج تلفزيوني.
   2. احتضان 2 × 45 دقيقة في الإيثانول 70% في درجة حرارة الغرفة.
   3. احتضان ح 2 × 1 في الإيثانول 94% عند درجة حرارة الغرفة.
   4. احتضان 3 × 45 دقيقة في الإيثانول المطلقة في درجة حرارة الغرفة.
   5. احتضان ح 3 × 1 في زيلين نفط، في درجة حرارة الغرفة وزيلين نفط آخر في 37 درجة مئوية.
   6. احتضان ح 3 × 1 في شمع البارافين في 60 درجة مئوية.
6. وبعد تجهيز الأنسجة، تضمين مقلة العين في البارافين السائل (+ 60 درجة مئوية) باستخدام كتلة أنسجة تضمين. ضع العين داخل الكتلة بحيث أنها تبحث جانبياً ويواجه الحدود المحيطية صعودا. واسمحوا كتلة يصلب على طبق بارد لمدة 5-10 دقائق.

7-البارافين المقاطع القرنية

1. إعداد مبضع لتقطيع وفقا لتعليمات المؤسسة أو الشركة المصنعة.
   تنبيه: كن حذراً عند التعامل مع بليد مبضع حادة.
2. مكان واحد للمياه حمام مع درجة حرارة الغرفة الماء عالي النقاوة بجوار مبضع وآخر مع الماء عالي النقاوة تسخينها إلى + 50 درجة مئوية.
3. إجراء 5 ميكرومتر أبواب سميكة من مقلة العين.
   ملاحظة: العدسة يكسر بسهولة خلال تمزيقها. لتجنب هذا، مسح سطح القطع مع أنسجة رطبة في كل مرة يتم بدء تشغيل صف جديد من المقاطع. استخدام مياه الحنفية إلى ترطيب الأنسجة.
4. وضع المقاطع بجانب بعضها البعض في حوض ماء في درجة حرارة الغرفة وقم بنقلها إلى حمام الماء الساخن مع المساعدة من شريحة زجاجية. تمتد المقاطع في حمام الماء الساخن حتى الاسترخاء جميع التجاعيد ومأتى الأقسام تصبح.
5. الجاف للشرائح الزجاجية مع المقاطع بين عشية وضحاها في +37 درجة مئوية.
6. إرفاق المقاطع إلى الشرائح بحفظ الشريحة لمدة 1 دقيقة على صفيحة ساخنة في + 60 درجة مئوية. وبعد ذلك، المقاطع يمكن مباشرة المجهزة لتلطيخ، أساليب إيمونوهيستولوجيكال أو تخزينها في + 4 درجة مئوية.

النتائج

يصف نموذج إلحاق ضرر كشط القرنية الماوس هذا البروتوكول وتشير إلى كيفية متابعة ووضع تصور لعملية الشفاء بعد الكشط. في الآونة الأخيرة، استخدمنا هذا الأسلوب لدراسة دور الخلايا القرنية الظهارية السلف خلال الجرح الشفاء⁶. استخدام أدوات المنشأة هو المفتاح لتجربة ال...

Discussion

أساليب إصابة أدوات شعبية لدراسة مختلف جوانب التوازن القرنية والأمراض. يوفر الطراز كشط أسلوب التحكم جيدا لمعالجة المشاكل ذات الصلة في طب العيون. ومع ذلك، بعض النقاط الحرجة في البروتوكول يجدر التشديد. جدير بالذكر أن التفاصيل المحددة فيما يتعلق بالطب البيطري، والجرح الشفاء الجدول الزمني، و...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
NMRI mouse	Envigo	275
0.9% NaCl			use sterile
Medetomidine	Vetmedic	Vnr087896	Market name: Cepetor Vet
Ketamine	Intervet	Vnr511485	Market name: Ketaminol Vet
Buprenorfin	Invidior	3015248	Market name: Temgesic
Atipamezol	Orion Pharma	Vnr471953	Market name: Antisedan Vet
Carprofen	Norbrook	Vnr027579	Market name: Norocarp Vet
1% fucidin acid eye ointment	Dechra	Vnr080899	Market name: Isathal
Fluorescein salt	Sigma-Aldrich	F6377
Phosphate-buffered saline solution			PBS
Algerbrush ii ocular burr (0.5 mm tip)	Algerbrush	6.39768E+11
Cobalt Blue pen light	SP Services	DE/003
Hot plate	Kunz Instruments	2007-0217
Digital SLR camera	Nikon	D80
Adjustable camera arm and clamp	Neewer	10086132	Height 28 cm
Table lamp with a flexible arm and a clamp	Prisma
Soft wipe	KimtechScience	7552
CO2 chamber
Dissection toolset	Fine Science Tools
Syringes	Beckton Dickinson	303172
26G needles	Beckton Dickinson	303800
2 mL Eppendorf tube	Sarstedt	689
Tissue casette	Sakura Finetech	4118F
Tissue processing machine ASP200S	Leica
Xylene	VWR	UN1307
Paraffin wax	Millipore	K95523361
Tissue embedding mold 32 x 25 x 6 mm	Sakura Finetech	4123
Microtome	Microm	HM355
Water bath for sectioning	Orthex	60591
Water bath for sectioning	Leica	HI1210
Microtome blade	Feather	S35
Glass slide	Th.Geyer GmbH & Co.	7,695,019
Ultrapure water	Millipore	MPGP04001	MilliQ
Paraformaldehyde	Sigma-Aldrich	158127	PFA