قكات: "كتابة سيميوتوماتيد الكمية" من القاتل-الخلية "جينات مستقبلات" الغلوبولين المناعي مثل

Jyothi Jayaraman; Vitalina Kirgizova; Da Di; Christopher Johnson; Wei Jiang; James A. Traherne

doi:10.3791/58646

Summary

الكمية القاتل خلية الغلوبولين المناعي مثل مستقبلات (كيريباتي) كتابة شبه الآلي (قكات) أسلوب بسيط والفائق، وفعالة من حيث التكلفة لنسخ رقم نوع قير الجينات لتطبيقها في الرابطة للدراسات السكانية والمرض.

Abstract

خلية القاتل الغلوبولين المناعي مثل مستقبلات (كيرس) مجموعة من المستقبلات المناعية المثبطة وتفعيل، القاتل الطبيعية (ناغورني كاراباخ) وخلايا T، مرمزة بواسطة كتلة متعددة الأشكال من الجينات على الكروموسوم 19. على يغاندس أفضل تتسم هي جزيئات مستضد (هلا) الكريات البيض البشرية التي تم ترميزها ضمن محور histocompatibility الرئيسية المعقدة (MHC) على الكروموسوم 6. وهناك أدلة كبيرة على أنها تلعب دوراً هاما في الحصانة والاستنساخ وزرع الأعضاء، مما يجعل من أهمية حاسمة لأن التقنيات التي يمكن بدقة التركيب الوراثي لهم. بيد عالية-تسلسل التماثل، كذلك الاليلي وتباين عدد النسخ، تجعل من الصعب على تصميم الأساليب التي يمكن بدقة وكفاءة النمط الوراثي جميع قير الجينات. الأساليب التقليدية عادة ما تكون محدودة في دقة البيانات المتحصل عليها والإنتاجية والفعالية من حيث التكلفة والوقت اللازم لإعداد وتشغيل التجارب. يصف لنا طريقة تسمى الكمية قير شبه الآلي كتابة (قكات)، وهو أسلوب سلسلة من ردود فعل الفائق متعدد بوليميراز في الوقت الحقيقي التي يمكن تحديد أرقام نسخ الجينات لجميع الجينات في موضع كيريباتي . قكات هو أسلوب الفائق بسيطة التي يمكن أن توفر عالية الاستبانة قير نسخ عدد البيانات، التي يمكن أن تستخدم كذلك لاستنتاج الاختلافات في haplotypes هيكلياً متعددة الأشكال التي تشتمل عليها. يمكن أن يكون هذا العدد و haplotype نسخ البيانات مفيداً للدراسات المتعلقة بالجمعيات المرض على نطاق واسع، وعلم الوراثة السكانية، فضلا عن التحقيقات في التعبير والتفاعلات الوظيفية بين قير و هلا.

Introduction

في البشر، ومستقبلات الغلوبولين المناعي مثل القاتل(قير) يتم تعيين موضع على الذراع الطويلة كروموسوم 19 داخل مجمع مستقبلات الكريات البيض (LRC). هذا المكان هو حوالي 150 كيلو بايت في طول ويتضمن 15 قير الجينات مرتبة رئيس-إلى-الذيل. المكاني قير المعروفة حاليا هي KIR2DL1، KIR2DL2/KIR2DL3، KIR2DL4، KIR2DL5A، KIR2DL5B، KIR2DS1-5، KIR3DL1/KIR3DS1، KIR3DL2-3، وهما بسيودوجينيس، KIR2DP1 و KIR3DP1. ترميز الجينات قير لثنائي الأبعاد (2D) ومستقبلات المجال مثل الغلوبولين المناعي (3D) ثلاثي الأبعاد مع القصيرة (S؛ وتفعيل) أو طويلة (L؛ والمثبطة) ذيول هيولى، التي يعرب عنها الخلايا القاتلة الطبيعية (ناغورني كاراباخ) ومجموعات فرعية من T الخلايا. تباين عدد نسخ معروضة ضمن أشكال محور قير haplotypes المتنوعة مع الجينات متغيرة المحتوى¹. عدم الاليلي جزئ مثلى (نهر)، يسر بترتيب إغلاق الرأس إلى الذيل الجينات وتسلسل عالية التماثل، هو الآلية المقترحة لتكون مسؤولة عن تقلب هابلوتيبيك. وأبلغ ما يزيد على 100 من haplotypes مختلفة في السكان في جميع أنحاء العالم¹^،²^،^،من³⁴. جميع هذه haplotypes يمكن أن تقسم إلى فئتين رئيسيتين: haplotypes A و B. هابلوتيبي A يحتوي على جينات قير 7: KIR3DL3، KIR2DL1، KIR2DL3، KIR2DL4، KIR3DL1، و KIR3DL2، هما المثبطة قير الجينات، و تفعيل قير جين KIR2DS4. ومع ذلك، حتى إلى 70% من الأصل الأوروبي الأفراد الذين متماثل قير haplotype A حصرا تحمل شكلاً غير وظيفية 'حذف'⁵^، KIR2DS4⁶. جميع مجموعات الجينات قير أخرى تشكل haplotypes المجموعة باء، بما في ذلك واحد على الأقل من جينات محددة قير KIR2DS1، KIR2DS2، KIR2DS3، KIR2DS5، KIR3DS1، KIR2DL2، و KIR2DL5، وعادة ما تشمل اثنين أو أكثر من الجينات قير تفعيل.

هلا الفئة الأولى جزيئات قد حددت يغاندس لبعض المستقبلات المثبطة (KIR2DL1، KIR2DL2، KIR2DL3، و KIR3DL1)، تفعيل مستقبلات (KIR2DS1، KIR2DS2، KIR2DS4، KIR2DS5، و KIR3DS1)، و KIR2DL4، وهو فريد كيريباتي التي تحتوي على ذيول طويلة هيولى مثل مستقبلات قير المثبطة الأخرى ولكن له أيضا بقايا إيجابيا يحمل قرب المجال خارج الخلية التي مشترك ميزة أخرى تفعيل مستقبلات كيريباتي . مزيج المتغيرات داخل كيريباتي الجينات والجينات هلا يؤثر على مستقبلات يجند تفاعل تلك الأشكال المحتملة ناغورني كاراباخ خلية الاستجابة على المستوى الفردي⁷^،⁸. وأوضحت الأدلة المستمدة من الدراسات الوراثية الرابطة أن كيريباتي يلعب دوراً في المقاومة الفيروسية (.على سبيل المثال،⁹ من فيروس نقص المناعة البشرية (الإيدز) والتهاب الكبد الوبائي فيروس [سي]¹⁰)، نجاح زرع¹¹، خطر الإصابة باضطرابات الحمل والتناسل بنجاح¹²^،¹³، الحماية ضد الانتكاس بعد متمكنة من الخلايا الجذعية المكونة للدم (هسكت) زرع¹⁴^،¹⁵^، ¹⁶، وخطر السرطان¹⁷.

بمزيج من التماثل عالية-تسلسل والاليلي والتحديات يعرض التنوع هابلوتيبيك في مهمة التنميط قير الجينات بدقة. وتشمل الأساليب التقليدية لكتابة قير الجينات الخاصة بتسلسل التمهيدي (SSP) بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (PCR)¹⁸^،^،من¹⁹²⁰، اليغنوكليوتيد الخاصة بتسلسل التحقيق بكر (SSOP)²¹، و مصفوفة الليزر ساعد الامتزاز التأين-وقت الرحلة الكتلي (TOF استخدام MS)²². المآخذ على هذه التقنيات أنها توفر فقط جزئية من التبصر في النمط الوراثي للفرد في حين يجري أيضا شاقة لأداء. مؤخرا طبق تسلسل الجيل القادم (خ ع) اكتب موضع كيريباتي على وجه التحديد. بينما يكون هذا الأسلوب قوية جداً، فإنه يمكن أن تكون مكلفة لتشغيل، وأنها تستغرق وقتاً طويلاً لإجراء تدقيق البيانات والتحليل المتعمق.

قكات أسلوب PCR كمي الفائق. بينما الأساليب التقليدية شاقة وتستغرق وقتاً طويلاً، هذا الأسلوب يجعل من الممكن لتشغيل ما يقرب من 000 1 عينة الحمض النووي (جدنا) الجينوم في خمسة أيام ويعطي النمط الوراثي كيريباتي ، فضلا عن عدد نسخ الجينات. قكات يتكون من عشرة ردود فعل متعدد، يستهدف كل منها اثنين قير المكاني ونسخ الجينات مرجع واحد عدد نسخة ثابتة في الجينوم (STAT6) تستخدم للتحديد الكمي النسبي للجينات قير رقم²³. هذا التحليل قد استخدمت بنجاح في الدراسات التي تنطوي على لوحات كبيرة من السكان والأفواج المرض عن الأمراض المعدية مثل فيروس التهاب الكبد جيم، شروط المناعة الذاتية مثل داء السكري من النوع 1، واضطرابات الحمل مثل بريكلامبسيا، فضلا عن توفير الوراثية التي تدعم بدراسات تهدف إلى فهم الخلية ناغورني كاراباخ وظيفة⁴^،¹^،²⁴^،^،من²⁵²⁶.

Protocol

1-إعداد وطلاء من الحمض النووي

دقة قياس تركيز جدنا باستخدام أداة سبيكتروفوتوميتريك أو فلوروميتريك.
تمييع الحمض النووي إلى 4 نانوغرام/ميليلتر في لوحة 96 بئر عميق. وتشمل مراقبة جدنا عينة واحدة على الأقل مع عدد نسخ معروفة وعنصر تحكم غير قالب واحد.
الطرد المركزي لوحات 96-جيدا في 450 س ز 2 دقيقة.
باستخدام أداة التعامل مع سائل والاستغناء عن كل عينة في البيلوروسية على لوحات qPCR 384-جيدا حيث يكون لكل بئر 10 نانوغرام من الحمض النووي (2.5 ميليلتر في البئر). إعداد لوحات 384-جيدا على الأقل عشرة، واحدة لكل رد فعل قكات.
إذا كان هو يجري الاستغناء عن جدنا من أكثر من 96-جيدا لوحة، أداء يغسل وحدة التخزين بالكامل مع التبييض 2% والماء عالي النقاوة لتنظيف إبر السائل التعامل مع النظام بين كل لوحة 96-جيدا من عينات جدنا.
أيردري الحمض النووي التي تفرخ لوحات 384-جيدا في منطقة نظيف في درجة حرارة الغرفة لمالا يقل عن 24 ساعة.

2-إعداد أجهزة الإشعال والمسابير

ملاحظة: قكات يتكون من عشرة ردود الفعل المتعددة. ويتضمن رد فعل كل ثلاثة أزواج التمهيدي وثلاثة تحقيقات المسمى fluorescence تضخيم على وجه التحديد هما كيريباتي الجينات والجينات مرجعاً واحداً. تم تعديل المسابير التي تم نشرها في جيانغ et al.²⁷ حيث الآن المسماة النوكليوتيد مع الأصباغ أتو نظراً لأنها توفر فوتوستابيليتي محسنة وعمر طويل إشارة. تركيبات التمهيدي قبل الكوتيد متوفرة تجارياً (انظر الجدول للمواد).

إعداد مجموعات التمهيدي لكل رد فعل وفقا لتخفيف الوارد في الجدول 1.
إعداد مجموعات التحقيق لكل رد فعل وفقا الجدول 1. اختبار كل مسبار الفردية قبل صنع التركيبة.

3-إعداد مزيج ماجستير

ملاحظة وحدات التخزين المذكورة أدناه لأداء واحد قكات الرد على مجموعة من لوحات 10 × 384-جيدا.

ضمان أن العينات جدنا مطلي على لوحات 384-بئر جافة تماما. إجراء جميع خطوات على الجليد وإبقاء الكواشف تغطيتها من التعرض للضوء بقدر الإمكان نظراً لتحقيقات المسمى fluorescence الحساسة صور والحرارية.
تذويب qPCR المخزن المؤقت، والتمهيدي، ومختبرين التحقيق في 4 درجات مئوية.
على الجليد، إعداد مزيج رئيسي للوحات 10 × 384-جيدا بإضافة 18.86 مل الماء عالي النقاوة، 20 مل من المخزن المؤقت قبكر و 1,000 ميليلتر من تركيبة التمهيدي بريبريباريد ميليلتر 180 من تركيبة مسبار بريبريباريد (الجدول 2).
توزيع مزيج الرئيسي بالتساوي عبر صفيحة جيدا عمق 96 استخدام ماصة متعددة القنوات، بيبيتينج ميليلتر 415 في كل بئر. إبقاء هذه اللوحة في مربع جليد تغطي من الضوء.
باستخدام أداة التعامل مع سائل، الاستغناء عن 9.5 ميليلتر من مزيج الرئيسي في كل من لوحة 384-جيدا مع جدنا المجفف جيدا. ختم اللوحة بإحباط ثم ضعه مباشرة في 4 درجات مئوية. كرر هذه العملية من أجل لوحات المتبقية، وضمان أن إبر السائل التعامل مع نظام يتم غسلها بالماء بين كل لوحة.
الطرد المركزي لوحات 384-جيدا في ز 450 x لمدة 3 دقائق واحتضانها لهم عند 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها، أو بين 6-12 ح ريسوسبيند في الحمض النووي، وتبديد أي فقاعات الهواء.

4-قبكر الإنزيم

وعقب الحضانة بين عشية وضحاها، الطرد المركزي في 450 x ز لمدة 3 دقيقة لتبديد أي فقاعات الهواء المتبقية.
لأغراض التشغيل الآلي للمكاتب، ربط الجهاز قبكر (مثلاً، لايتسيكلير 480) إلى معالج ميكروسكوبية (انظر الجدول للمواد). برنامج معالج الميكروسكوبية لوضع اللوحات في الجهاز قبكر من رصيف تبريد تخزين محمياً من الضوء.
ملاحظة فحوصات ينبغي، من الناحية النظرية، العمل على الأجهزة الأخرى qPCR مع إعدادات الألياف الضوئية المتوافقة.
استخدام الدراجات الشروط التالية: 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق تليها دورات 40 من 95 درجة مئوية عن 15 ثانية و 66 درجة مئوية لمدة 50 ثانية، مع جمع البيانات في 66 ° C.
بمجرد اكتمال التشغيل، يكون الروبوت جمع اللوحة من آلة قبكر ووضعه في قفص الاتهام المرتجع.

5-بعد انتهاء تشغيل تحليل

بعد التضخيم، حساب القيم دورة (Cq) القياس الكمي باستخدام الأسلوب الثاني أقصى مشتقة أو أسلوب النقاط تناسب مع البرنامج الخاص بالجهاز قبكر (انظر الجدول للمواد)، اتباع الخطوات التالية.
فتح برنامج قبكر، وفي علامة التبويب المستكشف ، فتح ملف تجربة رد فعل المحفوظة للوحة واحدة.
لتحليل استخدام أسلوب الحد الأقصى المشتقة الثانية، حدد علامة التبويب تحليل، وإنشاء تحليل جديد لاستخدام أسلوب "ماكس مشتق Quant/Second إس".
1. في إطار تحليل جديد لإنشاء ، حدد نوع التحليل: أسلوب Abs Quant/Second مشتق ماكس، مجموعة فرعية: جميع عينات، البرنامج: التضخيم، واسم: Rx-DFO (حيث x هو رقم رد الفعل).
2. حدد عامل تصفية مشط واختر فيك/عرافة/Yellow555 (533-580). وهذا ما يضمن أن يتم تحديد البيانات التي يتم جمعها ل STAT6 .
3. حدد تعويض اللون ل VIC/HEX/Yellow555(533-580). انقر فوق حساب. كرر هذه العملية للاتحاد الماليزي (465-510) و Cy5/Cy5.5(618-660). انقر فوق حفظ ملف.
للتحليل استخدام أسلوب النقاط تناسب، حدد "نقاط" ضليع في الرياضيات/تناسب القيمة المطلقة في علامة التبويب تحليل.
1. في إطار تحليل جديد لإنشاء ، حدد نوع التحليل: أسلوب "النقاط" ضليع في الرياضيات/تناسب القيمة المطلقة، مجموعة فرعية: جميع العينات، والبرنامج: التضخيم، والاسم: DFO ركسف (حيث x هو رقم رد الفعل).
2. حدد عوامل التصفية الصحيحة وتعويضات اللون ل STAT6 وكل من الجينات كيريباتي (الاتحاد الماليزي/Cy5). في علامة التبويب نويسيباند ، تعيين الفرقة الضوضاء استبعاد ضجيج الخلفية.
3. في علامة التبويب تحليل ، تعيين النقاط التي تناسب إلى 3 وحدد إظهار تناسب النقاط. انقر فوق حساب. انقر فوق حفظ ملف.

6-تصدير النتائج

في برنامج قبكر، فتح المستكشف تحديد التبويب تصدير مجموعة النتائج.
افتح المجلد الذي يتم حفظ ملفات التجربة ونقل الملفات في الجزء الجانب الأيمن من الإطار. انقر فوق التالي. حدد الاسم وموقع ملف التصدير.
حدد نوع تحليل أسلوب "ماكس مشتق Quant/Second إس" أو إس ضليع في الرياضيات/تناسب النقاط. انقر فوق التالي. تحقق من أن اسم الملف والمجلد التصدير، ونوع التحليل صحيحان ثم انقر فوق التالي لبدء عملية التصدير.
انتظر حتى حالة تصدير على ما يرام. الشاشة سوف ينتقل تلقائياً إلى الخطوة التالية. تحقق من أن كافة الملفات المحددة قد تم تصديرها بنجاح حيث أن فشل عدد الملفات = 0. انقر فوق تم.
استخدام البرامج النصية split_file.pl و roche2sds.pl لتقسيم لوحات المصدرة إلى ردود الفعل الفردية لكل لوحة.
ملاحظة يتم توفير البرامج النصية على طلب/GitHub.

7-نسخ عدد العمليات الحسابية

فتح برنامج تحليل عدد النسخ (مثلاً، كوبيكالير). حدد استيراد ملف نتائج PCR الوقت الحقيقي وتحميل الملفات النصية التي تم إنشاؤها بواسطة roche2sds.pl.
حدد تحليل وإجراء التحليل بتحديد أما معايرة العينة مع عدد النسخ المعروفة أو بواسطة تحديد عدد النسخ الأكثر شيوعاً. انظر الجدول 5 لعدد الجينات قير عادة ما يلاحظ في السكان الأصل الأوروبي النسخة الأكثر شيوعاً.

8-يتحقق من نوعية البيانات

استخدام برنامج نصي للبحث والتطوير KIR_CNVdata_analysis_for_Excel_ver020215. ص لضم البيانات عدد نسخ من جميع لوحات في جدول بيانات.
ملاحظة يتم توفير البرامج النصية على طلب/GitHub.
تدقيق البيانات الخام في برنامج تحليل عدد نسخ للعينات التي لا تتوافق مع اختلال الصلة المعروفة (LD) للجينات كيريباتي (الجدول 6).

النتائج

ويمكن إجراء تحليل رقم نسخة عن طريق تصدير الملفات إلى برنامج تحليل عدد نسخة، التي تنص على عدد النسخ المتوقعة والمقدرة استناداً إلى أسلوب ΔΔCq.

يمكن التنبؤ بعدد نسخ أما استناداً إلى عدد النسخ المعروفة لعينات من الحمض النووي التحكم على اللوحة، أو عن طريق إدخال عدد نسخ الجينات الأكثر شيوعاً (الجدول 5). ويبين الشكل 1 نتائج لوحة لرد فعل يستهدف KIR2DL4 و KIR3DS1، فضلا عن الجين مرجع STAT6. رقم KIR2DL4، جين إطار في موضع كيريباتي ، النسخة الأكثر شيوعاً نسختين، بينما رقم KIR3DS1، تفعيل جينات، النسخة الأكثر شيوعاً نسخة واحدة. وتظهر النتائج في الشكل المؤامرات التضخيم بكر يحتفل به في البرنامج قبكر ونسخة عدد البيانات التي تم إنشاؤها من البيانات qPCR. كما هو موضح، التحليل قادراً على التمييز بين 0، 1، 2، 3، والجينات قير 4 نسخ الأرقام. كما يتيح البرنامج تحليل عدد نسخ عرض توزيع عدد نسخ عبر اللوحة كمخطط دائري أو رسم بياني شريطي. الفعالية للتنبؤ بعدد نسخ أقل بالنسبة للعينات مع ارتفاع عدد نسخ.

جودة جميع المواد المستخدمة في ردود الفعل، جدنا، المخزن المؤقت، والإشعال، والمجسات، يمكن أن تؤثر على دقة النتائج التي تم الحصول عليها. الخلافات في النتائج غير الأكثر احتمالاً أن تكون بسبب التباين في تركيز الحمض النووي عبر صفيحة. نقاء جدنا المستخرجة، التي يمكن أن تقاس باستخدام 260/280 و 260/نسب 230، يمكن أيضا أن يكون لها تأثير على النوعية. ومن المستصوب بنسبة 260/280 نسبة 1.8-2 و 260/230 2-2-2. يمكن أن يؤدي تركيزات مجموعة متفاوتة من الحمض النووي عبر لوحة تقلب عالية في دورة عتبة (ج_ر) بين العينات والخلافات في نطاق عدد نسخ المقدرة. وتظهر النتائج في الشكل 2 التأثير يمكن أن يكون التباين بين قيم_t C عبر صفيحة على الدقة في التنبؤ بعدد النسخ. الخط الأحمر يشير إلى نطاق عدد نسخ المقدرة عينة، ومن الناحية المثالية، ينبغي أن يكون أقرب عدد صحيح قدر الإمكان.

يمكن تصدير البيانات عدد نسخة، وحللت مرة واحدة، كملف جدول بيانات في تنسيق 96-جيدا. قمنا باستخدام برنامج نصي R (متوفرة عند الطلب) الجمع بين البيانات رقم نسخة من كل 10 من الألواح التي يتم تشغيلها كمجموعة في جدول واحد. البيانات المنشورة حول كيرس من السكان الأصل الأوروبي معظمها يتيح التنبؤ بالقواعد LD موجودة بين الجينات المختلفة في مجمع قير ¹. وتستخدم هذه التنبؤات لإجراء فحوص المصب في نسخ عدد النتائج المتحصل عليها (الجدول 6). قد تحتوي على العينات التي لا تتوافق مع LD المتوقع بين الجينات تعدد الأشكال غير عادية أو الاختلافات الهيكلية هابلوتيبيك. مخطط انسيابي تصف البروتوكول يرد في الشكل 3.

تم تطوير أداة تسمى قير Haplotype المعرف (http://www.bioinformatics.cimr.cam.ac.uk/haplotypes/) لتيسير الإسناد haplotypes من مجموعة البيانات. احتساب يعمل على أساس قائمة haplotypes مرجع الملاحظة في سكان أصل الأوروبي¹. ومع ذلك، الأداة تسمح أيضا لمجموعة مخصصة من haplotypes مرجع لاستخدامها بدلاً من ذلك. يتم إنشاء ثلاثة ملفات منفصلة؛ أول ملف يسرد كافة تركيبات haplotype عينة والملف الثاني يوفر قائمة المشذبة تركيبات haplotypes التي لها ترددات مجتمعة أعلى، ويسرد الملف الثالث العينات التي لا يمكن تعيين haplotypes. ويمكن استخدام عدم إحالة haplotypes كمؤشر لرواية haplotypes.

figure-results-3441
رقم 1: نتائج تمثيلية للوحة للرد رقم 5- (أ) هذا التضخيم يظهر الفريق المؤامرات. (ب) هذا الفريق يظهر نسخ عدد قطع الأراضي. (ج) هذا الفريق يوضح توزيع عدد النسخ. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-3955
رقم 2: نتائج تمثيلية لصفيحة مع تركيز الحمض النووي متغير لرد فعل رقم 5- (أ) هذا التضخيم يظهر الفريق المؤامرات. (ب) هذا الفريق يظهر نسخ عدد قطع الأراضي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-4447
الشكل 3: مخطط انسيابي لبروتوكول قكات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الفحص	الجينات	الإشعال إلى الأمام	تركيز (nM)	عكس أجهزة الإشعال	تركيز (nM)	تحقيقات	تركيز (nM)
1 لا	*3DP1*	A4F	250	A5R	250	P4a	150
	*2 دل 2*	2DL2F4	400	C3R2	600	P5b	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
رقم 2	*2DS2*	A4F	400	A6R	400	P4a	200
	*دل 2 3*	D1F	400	D1R	400	P9	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
3 لا	*دل 3 3*	A8F	500	A8R	500	P4a	150
	*2DS4Del*	2DS4Del	250	2DS4R2	250	P5b	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
رقم 4	*3DL1e4*	B1F	250	B1R	125	P4b	150
	*3DL1e9*	D4F	250	D4R2	500	P9	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
5 لا	*3DS1*	B2F	250	B1R	250	P4b	150
	*2DL 4*	C1F	200	C1R	200	P5b-2 دل 4	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
رقم 6	*2DL 1*	B3F	500	B3R	125	P4b	150
	*2DP1*	D3F	250	D3R	500	P9	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
رقم 7	*2DS1*	B4F	500	B4R	250	P4b	150
	*دل 2 5*	D2F	500	D2R	500	P9	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
رقم 8	*2DS3*	B5F	250	B5R	250	P4b	150
	*3DL2e9*	D4F	250	D5R	125	P9	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
رقم 9	*3DL2e4*	A1F	200	A1R	200	P4a	150
	*2DS4FL*	2DS4FL	250	2DS4R2	500	P5b	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150
10 لا	*2DS5*	B6F2	200	B6R3	200	P4b	150
	*2DS4*	C5F	250	C5R	250	P5b	150
	*STAT6*	STAT6F	200	STAT6R	200	PSTAT6	150

الجدول 1: تركيبة وتركيز أجهزة الإشعال والمجسات المستخدمة في كل رد فعل قكات ²⁷ .

رد الفعل					مختبرين التمهيدي (ميليلتر)				التحقيق مختبرين (ميليلتر)
R1	3DP1	A4F	A5R	2DL2F4	C3R2	المياه	STAT6F	STAT6R	P4A	P5B	PSTAT6
	2 دل 2	100	100	160	240	200	80	80	60	60	60
R2	2DS2	A2F	A6R	D1F	D1R	المياه	STAT6F	STAT6R	P4A	P9	PSTAT6
	دل 2 3	160	160	160	160	160	80	80	80	60	60
									ملاحظة: تحتاج إلى 20 ميليلتر أقل المياه في MasterMix
R3	دل 3 3	A8F A8FB	A8R	2DS4DELF	2DS4R2	المياه	STAT6F	STAT6R	P4A	P5B	PSTAT6
	2DS4DEL	100 100	200	100	100	200	80	80	60	60	60
R4	3DL1E4	B1F	B1R	D4F	D4R2	المياه	STAT6F	STAT6R	P4B	P9	PSTAT6
	3DL1E9	100	50	100	200	350	80	80	60	60	60
R5	3DS1	B2F	B1R	C1F	C1R	المياه	STAT6F	STAT6R	P4B	P5B-2 ل 4	PSTAT6
	2DL 4	100	100	80	80	440	80	80	60	60	60
R6	2DL 1	B3F	B3R	D3F	D3R	المياه	STAT6F	STAT6R	P4B	P9	PSTAT6
	2DP1	200	50	100	200	250	80	80	60	60	60
R7	2DS1	B4F	B4R	D2F	D2R	المياه	STAT6F	STAT6R	P4B	P9	PSTAT6
	دل 2 5	200	100	200	200	100	80	80	60	60	60
R8	2DS3	B5F	B5R	D4F	D5R	المياه	STAT6F	STAT6R	P4B	P9	PSTAT6
	3DL2E9	100	100	100	50	450	80	80	60	60	60
R9	3DL2E4	A1F	A1R	2DS4WTF	2DS4R2	المياه	STAT6F	STAT6R	P4A	P5B	PSTAT6
	2DS4WT	80	80	100	200	340	80	80	60	60	60
R10	2DS5	B6F2	B6R3	C5F	C5R	المياه	STAT6F	STAT6R	P4B	P5B	PSTAT6
	2DS4TOTAL	80	80	100	100	440	80	80	60	60	60

الجدول 2: وحدات التخزين (ميليلتر) من 100 ميكرومتر التمهيدي/مسبار الأسهم الحلول لجعل التمهيدي والتحقيق مختبرين تركيبة.

الاسم	الاتجاه	تعديل 5´	تعديل 3´	تسلسل (5 '→3')	طول	الخرائط المواضيعية	GC %	إكسون	موقف
P4a	معنى	الاتحاد الماليزي	بك-1	تكاتككتجك آتجتتغت كاجاتجتكا	27	60	44.4	4	425-451
P4b	أنتيسينسي	الاتحاد الماليزي	بك-1	آكاجاكك جتاجكاتكت جتاجتككك T	28	62	50	4	576-603
P5b	معنى	ATTO647N	بك-2	آكاتككا جككجاكت تككتكتج	25	60	52	5	828-852
P5b-2 دل 4	معنى	ATTO647N	بهق-2	آكاتككا جككجاكت تكككتكتج	25	61	56	5	828-852
P9	معنى	ATTO647N	بك-2	كككتكتكا جاجكككا أجاكاكك	24	60	62.5	9	1246-1269
PSTAT6		ATTO550	بك-2	كتجاتككت ككاتجاجكا تجكاجكت	26	62	50

الجدول 3: قائمة المسابر المستخدمة في قكات ¹^، ²⁷-تم تعديل الأصباغ الفلورية تستخدم في 5 ' نهاية تحقيقات اليغو P5b، P5b-2 دل 4، P9، و PSTAT6 بالأصباغ أتو.

الجينات	كبسولة تفجير	الاتجاه	تسلسل (5´-3´)	طول	الخرائط المواضيعية	GC %	إكسون	موقف	Amplicon (bp)	وقد غاب الآليلات
3DL2e4	A1F	إلى الأمام	جككككتجكتجا أتكاج	18	52	61.1	4	399-416	179	3DL 2 * 008، * 021، * 027، * 038.
	F15	عكس	كتجكاجاكاج جكاتكا	19	53	52.6		559-577		3DL 2 * 048
3DP1	A4F	إلى الأمام	جتككككتجتجا آتكاجا	19	49	52.6	4	398-416	112	لا شيء
	A5R	عكس	جتجاجكجكاا جتجتكا	18	52	55.6		492-509		لا شيء
2DS2	A2F	إلى الأمام	جتكجككتجتجا آتكاجا	19	49	52.6	4	398-416	111	لا شيء
	A6R	عكس	تجاجتجكااج تجتككتات	21	51	42.9		488-508		لا شيء
دل 3 3	A8Fa	إلى الأمام	جتجااتكججا جاجاكج	18	50	55.6	4	406-423	139	لا شيء
	A8Fb	إلى الأمام	جتجااتكاج أجاجاكج	19	50	52.6		405-423		3DL 3 * 054، دل 3 3 * 00905.
	A8R	عكس	أجتجاككتجج آكككج	18	51	61.1		526-543		لا شيء
3DL1e4	M1)	إلى الأمام	كاتكجتكككات جاتجكت	18	51	55.6	4	549-566	85	3DL 1 * 00505، دل 3 1 * 006، 3DL 1 * 054، دل 3 1 * 086، دل 3 1 * 089
	B1R	عكس	ججاجكتجاكا كتجاتاج	20	52	55		614-633		3DL 1 * 00502
3DS1	B2F	إلى الأمام	كاتكجتككات جاتجكج	18	51	55.6	4	549-566	85	3DS1 * 047؛ وقد التقط دل 3 1 * 054.
	B1R	عكس	ججاجكتجاكا كتجاتاج	20	52	55		614-633		لا شيء
2DL 1	B3F	إلى الأمام	تكتككاتكاجت كجكاتجاك	20	52	50	4	544-563	96	2DL 1 * 020، دل 2 1 * 028
	B3R	عكس	جتكاكتججاجك تجاكاك	18	50	61.1		622-639		2DL 1 * 023، دل 2 1 * 029، دل 2 1 * 030
2DS1	B4F	إلى الأمام	تكتككاتكاجتك جكاتجا	19	51	47.4	4	545-563	96	2DS1 * 001
	B4R	عكس	جتكاكتججاج كتجاك	17	49	64.7		624-640		لا شيء
2DS3	B5F	إلى الأمام	كتككاتكجتكج كاتجاج	18	53	61.1	4	546-563	96	لا شيء
	B5R	عكس	ججتكاكتججا جكتجا	18	51	61.1		624-641		لا شيء
2DS5	B6F2	إلى الأمام	أجاجاجججاكج تتاكك	19	50	52.6	4	475-493	173	لا شيء
	B6R3	عكس	تككاجاججتكا كتججك	18	53	66.7		630-647		2DS5 * 003
2DL 4	C1F	إلى الأمام	جكاجتجكككاجك أتكات	18	52	55.6	5	808-825	83	لا شيء
	C1R	عكس	ككجاجكاتكتج تاجتكت	19	52	52.6		872-890		2DL 4 * 018، 2 دل 4 * 019
2 دل 2	2DL2F4	إلى الأمام	جاجتجاجكك كاتجات	19	52	57.9	5	778-796	151	2 دل 2 * 009؛ ز 782 تغيرت إلى ألف.
	C3R2	عكس	تكجاجتتجاكك أكتكجتات	20	51	45		909-928		لا شيء
2DS4	C5F	إلى الأمام	تكككتجكاجتجك جكاجك	17	57	70.6	5	803-819	120	لا شيء
	C5R	عكس	تجاككاكتكجت أججاجك	19	52	57.9		904-922		2DS4 * 013
2DS4Del	2DS4Del	إلى الأمام	ككتجتككتجكا جكتككات	19	54	57.9	5	750-768	203	لا شيء
	2DS4R2	عكس	تجاكجااكا جكاجتجا	20	53	50		933-952		لا شيء
2DS4FL	2DS4FL	إلى الأمام	ككجاجكتككتا تجاكاتج	19	53	57.9	5	744-762	209	لا شيء
	2DS4R2	عكس	تجاكجااكا جكاجتجا	20	53	50		933-952		لا شيء
دل 2 3	D1F	إلى الأمام	أجاكككتكاجا جتجا	17	48	58.8	9	1180-1196	156	لا شيء
	D1R	عكس	كاجاجاكاكت تجاتكا	20	50	45		1316-1335		2DL 3 * 010 ودل 2 3 * 01801 ودل 2 3 * 017 دل 2 3 * 01802
دل 2 5	D2F	إلى الأمام	كاكتجكجتتتك أكاكاجاك	20	52	50	9	1214-1233	120	2DL5B * 011 و 2DL5B * 020
	D2R	عكس	جكاجاجاكا تجاتكت	19	49	47.4		1315-1333		لا شيء
2DP1	D3F	إلى الأمام	ككتكاجاجتج أكاتاكجت	20	53	55	9	1184-1203	121	لا شيء
	D3R	عكس	تجاجتككج تجتاكاكت	20	50	45		1285-1304		لا شيء
3DL1e9	D4F	إلى الأمام	كاكاجتجاتك أكتجكجت	19	52	52.6	9	1203-1221	93	3DL 1 * 061، دل 3 1 * 068
	D4R2	عكس	ككجتجتاكاجا تجتاتكتجتا	23	53	43.5		1273-1295		3DL 1 * 05901، دل 3 1 * 05902، دل 3 1 * 060، دل 3 1 * 061، دل 3 1 * 064، دل 3 1 * 065، دل 3 1 * 094N، دل 3 1 * 098
3DL2e9	D4F	إلى الأمام	كاكاجتجاتك أكتجكجت	19	52	52.6	9	1203-1221	156	لا شيء
	D5R	عكس	جاككتجاكتجتج جتجكتكج	19	54	63.2		1340-1358		لا شيء
STAT6	STAT6F	إلى الأمام	ككاجاتجككتاك كاتجتجك	20	54	60			129
	STAT6R	عكس	ككاتكتجكاكاج أككاكتكك	20	54	60

الجدول 4: تسلسل الإشعال المستخدمة في قكات ¹^، ²⁷-

*كيريباتي* الجينات		دل 3 3	2DS2	2 دل 2	دل 2 3	2DP1	2DL 1	3DP1	2DL 4	3DL 1 EX9	3DL 1 EX9	3DS1	دل 2 5	2DS3	2DS5	2DS1	2DS4 المجموع	2DS4 فلوريدا	2DS4 ديل	3DL 2 ex4	3DL 2 EX9
عدد النسخ الأكثر شيوعاً		2	1	1	2	2	2	2	2	2	2	1	1	1	1	1	2	1	1	2	2

الجدول 5: رقم النسخة الأكثر شيوعاً كيريباتي الجينات في عينات المنشأ الأوروبي-

	الربط اختلال قواعد قكات استناداً إلى سكان أوروبا	نسخ الاختيار رقم
1	KIR3DL3، KIR3DP1، KIR2DL4 ، و KIR3DL2 ، هي إطار الجينات موجودة على كلا haplotypes.	KIR3DL3، KIR3DP1، KIR2DL4 ، و KIR3DL2 = 2
2	KIR2DS2 و KIR2DL2 في دينار مع بعضها البعض	2DS2=2 دل 2
3	KIR2DL2 و KIR2DL3 من الآليلات لنفس الجين	2 دل 2+دل 2 3= 2
4	KIR2DP1 و KIR2DL1 في دينار مع بعضها البعض	2DP1=دل 2 1
5	إكسون 4 KIR3DL1 و KIR3DL2 يتساوى إكسون 9 من KIR3DL1 و KIR3DL2 على التوالي.	3DL1ex4=3DL1ex9 و 3DL2ex4=3DL2ex9
6	KIR3DL1 و KIR3DS1 من الآليلات	3 DL 1+3DS1= 2
7	LD مع KIR2DL5 KIR2DS3 و KIR2DS5	2DS3+2DS5=دل 2 5
8	KIR3DS1 و KIR2DS1 بدينار	3DS1=2DS1
9	وجود أتال KIR2DS1 و KIR2DS4Tالتبادلية في هابلوتيبي	2DS1+2DS4TOTAL= 2
10	KIR2DS4FL و KIR2DS4del هي المتغيرات من KIR2DS4TOTAL	2DS4FL+2DS4DEL=2DS4TOTAL

الجدول 6: اختلال الربط بين كيريباتي يمكن استخدام الجينات في السكان الأصل الأوروبي للتحقق من عدد نسخ البيانات ¹^،²⁷-

Discussion

وصفت لنا طريقة الفائق رواية شبه الآلي، تسمى قكات، مما يسهل نسخ كتابة عدد الجينات قير . الأسلوب هو تحسين عبر الطرق التقليدية مثل موفر الخدمات المشتركة-بكر، وهي منخفضة الإنتاجية ويمكن إلا أن يشير إلى وجود أو عدم وجود هذه الجينات عالية متعددة الأشكال.

تعتمد على عدة عوامل، بما في ذلك نوعية وتركيز-التوحيد عينات جدنا ونوعية المواد الكاشفة دقة البيانات عدد النسخ التي تم الحصول عليها. جودة ودقة عينات جدنا عبر صفيحة تكتسي أهمية بالغة نظراً للاختلافات في التركيز عبر اللوحة يمكن أن ينتج خطأ في حساب عدد النسخ. البيانات من الأفواج من أجزاء أخرى من العالم حيث تم التحقق من صحة فحوصات باستخدام مجموعات عينة الأصل الأوروبي، تتطلب عمليات تفتيش أكثر دقة. هذا لضمان أن حالات التسرب اليل أو الربط غير محددة التمهيدي/التحقيق لا تفسر خطأ كتباين عدد النسخ.

بينما صممت فحوصات والأمثل لتشغيل الفائق، يمكن تعديلها لتشغيل نماذج أقل. مقياس الثقة في برنامج تحليل عدد نسخ يتأثر عند تحليل العينات أقل، ولكن هذا يمكن أن تتحسن إذا تدرج عينات الحمض النووي الجينوم التحكم بعدد نسخ جينات قير معروفة على اللوحة و replicates عينة إضافية وشملت.

للمختبرات دون الروبوتات السائل/لوحة معالجة، يمكن أن يكون الاستغناء عن مزيج الرئيسي استخدام الماصات متعدد القنوات ولوحات يمكن تحميلها يدوياً في الصك qPCR.

وكان الهدف الرئيسي وراء تطوير قكات لإنشاء بسيطة والفائق والدقة والفعالية من حيث التكلفة أسلوب للنمط الوراثي كيرس للمرض الرابطة للدراسات. وقد تحقق ذلك بنجاح منذ قكات وقد استخدمت في التحقيق في دور كيريباتي في العديد من الدراسات رابطة الأمراض الكبيرة، بما في ذلك مجموعة من الأمراض المعدية، والظروف الذاتية، و اضطرابات الحمل⁴^، ²⁴ ^, ²⁵ ^, ²⁶.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

تلقي المشروع تمويلاً من مجلس البحوث الطبية (MRC) ومجلس البحوث الأوروبي (المنسق) ضمن أفق 2020 البحث والابتكار في البرنامج الاتحاد الأوروبي في (منحة الاتفاق رقم 695551) كامبردج "المعهد الوطني للصحة" (NIH) الطبية مركز البحوث والمعاهد الوطنية للصحة أبحاث الدم وزرع وحدة البحوث (NIHR بترو) في التبرع بالأعضاء وزرعها في جامعة كامبردج وفي شراكة مع دائرة الصحة الوطنية الدم و "زرع الأعضاء" (نسبت). الآراء التي أعرب عنها هي آراء المؤلفين وليس بالضرورة من دائرة الصحة الوطنية، في NIHR، ووزارة الصحة، أو نسبت.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
REAGENTS
Oligonucleotides	Sigma	Custom order	SEQUENCES: Listed in Table 4
Probes labelled with ATTO dyes	Sigma	Custom order	SEQUENCES: Listed in Table 3
SensiFAST Probe No-ROX Kit	Bioline	BIO-86020	−
MilliQ water	−	−	−
Name	Company	Catalog Number	Comments
EQUIPMENT
Centrifuge with a swinging bucket rotor	Eppendorf(or equivalent)	Eppendorf 5810R or equivalent system
NanoDrop	Thermo Scientific	ND-2000
OR
QuBit Fluorometer	Life Technologies	Q33216
Matrix Hydra	Thermo Scientific	109611
LightCycler 480 II Instrument 384-well	Roche	05015243001
Twister II Microplate Handler with MéCour Thermal Plate Stacker (MéCour)	Caliper Life Sciences	204135
Vortex mixer	Biosan	BS-010201-AAA
Single-channel pipettes (volume range: 0.5–10 µL, 2–20 µL, 20–200 µL, 200–1,000 µL; 1-10 mL)	Gilson(or equivalent)	F144801, F123600, F123615, F123602, F161201
RNase- and DNase-free pipette tips filtered (10 µL, 20 µL, 200 µL, 1,000 µL, 10 mL)	Starlab (or equivalent)	S1111-3810, S1120-1810, S1120-8810, S1111-6810, I1054-0001
StarTub PS Reagent Reservoir, 55 mL	STARLAB	E2310-1010
50 mL Centrifuge Tube	STARLAB	E1450-0200
96-well deep well plate	Fisher Scientific	12194162
LC480 384 Multi-well plates	Roche	04729749001
LightCycler 480 Sealing Foil	Roche	04729757001
Name	Company	Catalog Number	Comments
SOFTWARE
Roche LightCycler 480 Software v1.5
Applied Biosystems CopyCaller Software v2.1			https://www.thermofisher.com/uk/en/home/technical-resources/software-downloads/copycaller-software.html
KIR haplotype identifier			http://www.bioinformatics.cimr.cam.ac.uk/haplotypes/

References

Jiang, W., et al. Copy number variation leads to considerable diversity for B but not A haplotypes of the human KIR genes encoding NK cell receptors. Genome Research. 22, 1845-1854 (2012).
Nemat-Gorgani, N., et al. Different Selected Mechanisms Attenuated the Inhibitory Interaction of KIR2DL1 with C2 + HLA-C in Two Indigenous Human Populations in Southern Africa. The Journal of Immunology. 200, 2640-2655 (2018).
Norman, P. J., et al. Co-evolution of human leukocyte antigen (HLA) class I ligands with killer-cell immunoglobulin-like receptors (KIR) in a genetically diverse population of sub-Saharan Africans. PLoS Genetics. 9, e1003938 (2013).
Nakimuli, A., et al. Killer cell immunoglobulin-like receptor (KIR) genes and their HLA-C ligands in a Ugandan population. Immunogenetics. 65, 765-775 (2013).
Bontadini, A., et al. Distribution of killer cell immunoglobin-like receptors genes in the Italian Caucasian population. Journal of Translational Medicine. 4, 1-9 (2006).
Graef, T., et al. KIR2DS4 is a product of gene conversion with KIR3DL2 that introduced specificity for HLA-A*11 while diminishing avidity for HLA-C. The Journal of Experimental Medicine. 206, 2557-2572 (2009).
Béziat, V., Hilton, H. G., Norman, P. J., Traherne, J. A. Deciphering the killer-cell immunoglobulin-like receptor system at super-resolution for natural killer and T-cell biology. Immunology. 150, 248-264 (2017).
Blokhuis, J. H., et al. KIR2DS5 allotypes that recognize the C2 epitope of HLA-C are common among Africans and absent from Europeans. Immunity, Inflammation and Disease. 5, 461-468 (2017).
Martin, M. P., et al. Epistatic interaction between KIR3DS1 and HLA-B delays the progression to AIDS. Nature Genetics. 31, 429-434 (2002).
Khakoo, S. I., et al. HLA and NK cell inhibitory receptor genes in resolving hepatitis C virus infection. Science. 305, 872-874 (2004).
van Bergen, J., et al. KIR-ligand mismatches are associated with reduced long-term graft survival in HLA-compatible kidney transplantation. American Journal of Transplantation. 11, 1959-1964 (2011).
Hiby, S. E., et al. Association of maternal killer - cell immunoglobulin-like receptors and parental HLA - C genotypes with recurrent miscarriage. Human Reproduction. 23, 972-976 (2008).
Nakimuli, A., et al. A KIR B centromeric region present in Africans but not Europeans protects pregnant women from pre-eclampsia. Proceedings of the National Academy of Sciences. 112, 845-850 (2015).
van Bergen, J., et al. HLA reduces killer cell Ig-like receptor expression level and frequency in a humanized mouse model. The Journal of Immunology. 190, 2880-2885 (2013).
Bachanova, V., et al. Donor KIR B Genotype Improves Progression-Free Survival of Non-Hodgkin Lymphoma Patients Receiving Unrelated Donor Transplantation. Biology of Blood and Marrow Transplantation. 22, 1602-1607 (2016).
Cooley, S., et al. Donor selection for natural killer cell receptor genes leads to superior survival after unrelated transplantation for acute myelogenous leukemia. Blood. 116, 2411-2419 (2010).
Barani, S., Khademi, B., Ashouri, E., Ghaderi, A. KIR2DS1, 2DS5, 3DS1 and KIR2DL5 are associated with the risk of head and neck squamous cell carcinoma in Iranians. Human Immunology. 79, 218-223 (2018).
Vilches, C., Castaño, J., Gómez-Lozano, N., Estefanía, E. Facilitation of KIR genotyping by a PCR-SSP method that amplifies short DNA fragments. Tissue Antigens. 70, 415-422 (2007).
Ashouri, E., Ghaderi, A., Reed, E. F., Rajalingam, R. A novel duplex SSP-PCR typing method for KIR gene profiling. Tissue Antigens. 74, 62-67 (2009).
Martin, M. P., Carrington, M. KIR locus polymorphisms: genotyping and disease association analysis. Methods in Molecular Biology. , 49-64 (2008).
Crum, K. A., Logue, S. E., Curran, M. D., Middleton, D. Development of a PCR-SSOP approach capable of defining the natural killer cell inhibitory receptor (KIR) gene sequence repertoires. Tissue Antigens. 56, 313-326 (2000).
Houtchens, K. A., et al. High-throughput killer cell immunoglobulin-like receptor genotyping by MALDI-TOF mass spectrometry with discovery of novel alleles. Immunogenetics. 59, 525-537 (2007).
Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method. Methods. 25, 402-408 (2001).
Traherne, J. A., et al. KIR haplotypes are associated with late-onset type 1 diabetes in European-American families. Genes and Immunity. 17, 8-12 (2016).
Hydes, T. J., et al. The interaction of genetic determinants in the outcome of HCV infection: Evidence for discrete immunological pathways. Tissue Antigens. 86, 267-275 (2015).
Dunphy, S. E., et al. 2DL1, 2DL2 and 2DL3 all contribute to KIR phenotype variability on human NK cells. Genes and Immunity. 16, 301-310 (2015).
Jiang, W., et al. qKAT: A high-throughput qPCR method for KIR gene copy number and haplotype determination. Genome Medicine. 8, 1-11 (2016).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

145 HLA qPCR

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated: