إعداد الكائنات الحية بدائية وحقيقية النواة باستخدام التجفيف الكيميائية للتحليل المورفولوجي في المسح الضوئي المجهر الإلكتروني (SEM)

Summary

تحليل وزارة شؤون المرأة طريقة فعالة للمساعدة في تحديد الأنواع أو التمييز المظهرية. هذا البروتوكول يصف الأساليب لدراسة التفاصيل المورفولوجية الخاصة ثلاثة أنواع تمثيلية من الكائنات الحية وستطبق على نطاق واسع لدراسة ملامح كثيرة العضوي وأنواع الأنسجة.

Abstract

المسح الضوئي المجهر الإلكتروني (SEM) هي تقنية متاحة على نطاق واسع تم تطبيقه لدراسة العينات البيولوجية بدءاً من البروتينات الفردية إلى الخلايا والأنسجة والعضيات والكائنات كلها حتى. ويركز هذا البروتوكول على طريقتين التجفيف الكيميائية هيكساميثيلديسيلازاني (همدس) والكحول تي-بوتيل (يضاف) وتطبيقها لتصوير الكائنات الحية بدائية وحقيقية النواة على حد سواء باستخدام sem. في هذه المقالة، نحن تصف كيفية إصلاح وتغسل ويذوي، جاف، جبل، وتفل معطف والصورة ثلاثة أنواع من الكائنات الحية: البكتيريا الزرقاء (ميسيدوسيدا توكسيفيلوم، جولينكينا sp.، و sp. غير معروف)، يوجلينويدس اثنين من جنس مونومورفينا (أينيجماتيكا م. و. م. بسيودوبيروم)، وذبابة الفاكهة (melanogaster المورفولوجية). والغرض من هذا البروتوكول هو وصف طريقة سريعة وغير مكلفة وبسيطة للحصول على معلومات مفصلة عن هيكل وحجم، والخصائص السطحية للعينات التي يمكن تطبيقها على نطاق واسع لمجموعة كبيرة من الكائنات الحية من أجل الخصائص المورفولوجية تقييم. النجاح في إنجاز هذا البروتوكول يسمح للآخرين باستخدام SEM لتصور عينات بتطبيق هذه التقنيات على النظام الخاص بهم.

Introduction

المسح الإلكتروني المجهري (SEM) يستخدم مركزة شعاع من الإلكترونات ذات الطاقة العالية لإنشاء صورة من الإلكترونات الثانوية التي تظهر مورفولوجية والطوبوغرافيا ل نموذج¹. يمكن استخدام وزارة شؤون المرأة لمباشرة تحديد الحجم الفعلي عينة والبنية السطحية، وشكل ثلاثي الأبعاد، ويوفر دقة أكبر وأكبر عمق الميدان مقارنة بالفحص المجهري الخفيفة. نموذج آخر الميكروسكوب الإلكتروني (م)، يستخدم مجهر إلكتروني (TEM) تركز الإلكترونات التي تمر من خلال العينة، توليد الصور مع التفاصيل الدقيقة للهيكل الداخلي. في حين تيم بدقة أعلى من الضوء أو وزارة شؤون المرأة، ويمكن استخدامها لحل هياكل صغيرة مثل ذرة واحدة، فقد العيوب الرئيسية الثلاثة: إعداد عينة واسعة النطاق ومجال رؤية صغيرة وعمق ضحل من الميدان^2،3. على الرغم من أن البعض تصور وجود بروتوكولات استخدام وزارة شؤون المرأة لدراسة محددة الخلايا أو العضيات، أو الأنسجة^4،5،6،،من^{78،9، 10} ، هذا البروتوكول فريدة من نوعها في ذلك يمكننا وصف الأساليب التي يمكن تطبيقها على نطاق واسع لمجموعة كبيرة من الكائنات الحية من أجل تقييم الخصائص المورفولوجية.

ووزارة شؤون المرأة قد وجدت تطبيقات واسعة النطاق لفحص المواد غير العضوية، بما في ذلك جسيمات نانوية^11،12،¹³من البوليمرات، والعديد من التطبيقات في العلوم الجيولوجية والصناعية، والمواد^{14، 15،16}. في علم الأحياء، استخدمت وزارة شؤون المرأة منذ فترة طويلة كوسيلة لفحص العينات البيولوجية بدءاً من البروتينات الفردية لكل الكائنات^17،18. وزارة شؤون المرأة ذات قيمة خاصة لأنه يمكن استخدام التفاصيل السطحية المورفولوجية لإبلاغ الاكتشافات العلمية. تحليل وزارة شؤون المرأة طريقة سريعة وغير مكلفة وبسيطة للحصول على معلومات مفصلة عن هيكل وحجم، والخصائص السطحية لمجموعة واسعة من العينات البيولوجية.

عادة يعمل وزارة شؤون المرأة تحت التفريغ العالي (10^-6 عربة الحد الأدنى) لدعم متماسك شعاع من الإلكترونات عالية السرعة، لا يسمح أي السوائل (الماء، الزيوت، الكحول) في قاعة عينة، كسوائل منع تشكيل فراغ. وهكذا، يجب أن المجففة جميع العينات التي درست باستخدام SEM، عادة باستخدام سلسلة متدرجة من إيثانول تليها عملية تجفيف لإزالة في الإيثانول. هناك عدة طرق لتجفيف الأنسجة البيولوجية لاستخدامها في وزارة شؤون المرأة، بما في ذلك تجفيف الهواء، ليوفيليزيشن، واستخدام جهاز (وثيقة البرنامج القطري) التجفيف النقطة الحرجة، أو الكيميائية التجفيف باستخدام t-بوتيل الكحول (TBA) أو^، هيكساميثيلديسيلازاني (همدس)^{19 20 , 21 , 22}-في معظم الأحيان، اختيار أسلوب التجفيف التجريبية منذ كل عينة بيولوجية قد تتفاعل بشكل مختلف لكل أسلوب التجفيف. لأي نموذج معين، كل هذه الأساليب قد يكون من المناسب، حتى مقارنة مزايا وعيوب كل منها ويكون مفيداً في تحديد الأسلوب المناسب.

بينما الهواء تجفيف عينة في درجة حرارة الغرفة أو في فرن تجفيف (60 درجة مئوية) هو الأسلوب الأبسط، معظم العينات البيولوجية تظهر الأضرار التي يسببها تجفيف مثل شريفلينغ وانهيار، أدى إلى تشويه للعينة. عملية lyophilization أيضا إزالة الماء (أو الجليد) من عينة، ولكن يتطلب عينات لتكون مجمدة في فلاش وتوضع تحت الفراغ لإزالة الثلج عن طريق عملية التسامي، من المحتمل أن تكون ضارة العينة. وبالإضافة إلى ذلك، يجب أن يكون المستخدم الوصول إلى ليوفيليزير. الأسلوب الأكثر استخداماً للتجفيف عينات لوزارة شؤون المرأة نقطة حرجة التجفيف (وثيقة البرنامج القطري). في وثيقة البرنامج القطري، يتم استبدال الإيثانول في عينة السائل من ثاني أكسيد الكربون (CO₂)، وتحت درجة حرارة معينة وضغط الظروف المعروفة النقطة الحرجة (31.1 درجة مئوية وهذه المبادرة 1,073)، أول أكسيد الكربون₂ يبخر دون خلق التوتر السطحي، مما المحافظة على فعالية الميزات البنيوية والهيكلية للعينة. بينما وثيقة البرنامج القطري هو عموما الطريقة القياسية، فقد عدة عيوب. أولاً، العملية تتطلب الوصول إلى نقطة حرجة مجفف، التي ليست مكلفة فقط، بل يتطلب أيضا استخدام ثاني أكسيد الكربون السائل. ثانيا، أن حجم العينة التي يمكن أن تجفف يقتصر على حجم الدائرة النقطة الحرجة مجفف. وثالثاً، يمكن أن يسبب تبادل السوائل خلال وثيقة البرنامج القطري الاضطرابات التي يمكن أن تلحق الضرر العينة.

تجفيف المواد الكيميائية ويوفر مزايا عديدة أكثر من وثيقة البرنامج القطري ويخدم كبديل مناسب أصبح يستخدم على نطاق واسع في إعداد نموذج وزارة شؤون المرأة. ويتيح استخدام ديهيدرانتس الكيميائية مثل القابلات التقليديات وهمدس بديلاً سريعة وغير مكلفة وبسيطة لأساليب أخرى، مع الحفاظ على السلامة الهيكلية للعينة. ونحن مؤخرا أظهرت أن لم يكن هناك فرق في سلامة الأنسجة أو جودة الصورة النهائية التقاطها عند استخدام وثيقة البرنامج القطري أو القابلات التقليديات كأسلوب التجفيف في نسيج الشبكية المورفولوجية الكبار²³. وخلافا لوثيقة البرنامج القطري، القابلات التقليديات وهمدس لا تتطلب أداة تجفيف أو السائل CO₂ وتوجد أية قيود على الحجم العينة أن تجفف. بالإضافة إلى الحصول على المواد الكيميائية، فقط غطاء الأبخرة الكيميائية القياسية ومعدات الحماية الشخصية المناسبة (القفازات، ومعطف مختبر، ونظارات واقية) المطلوبة لإكمال عملية التجفيف. بينما كل من القابلات التقليديات وهمدس القابلة للاشتعال، يضاف أقل سمية وأقل تكلفة (حوالي 1/3 تكلفة همدس) من همدس.

في هذه المقالة، نحن تصف كيفية إصلاح وتغسل ويذوي، جاف، جبل، وتفل معطف والصورة ثلاثة أنواع من الكائنات الحية: البكتيريا الزرقاء (ميسيدوسيدا توكسيفيلوم، جولينكينا sp.، و sp. غير معروف)، يوجلينويدس اثنين من جنس مونومورفينا (أينيجماتيكا م. و. م. بسيودوبيروم)، وذبابة الفاكهة (melanogaster المورفولوجية). هذه الكائنات تمثل نطاقا واسعاً في الحجم (0.5 ميكرومتر إلى 4 مم) والتنوع الخلوية (وحيدة الخلية إلى متعددة الخلايا)، ولكن كلها بسهولة قابلة للتحليل ووزارة شؤون المرأة مع اختلافات صغيرة فقط بحاجة لإعداد العينات. هذا البروتوكول يصف الأساليب لاستخدام الجفاف الكيميائية والتحليل ووزارة شؤون المرأة للنظر في تفاصيل المورفولوجي لثلاثة أنواع من الكائنات الحية، ويمكن تطبيقها على نطاق واسع في دراسة كثير العضوي وأنواع الأنسجة.

Protocol

1-الإعداد والتثبيت

1. إعداد البكتيريا الزرقاء.
   1. تنمو الثقافات أونيالجال في وسائل الإعلام F/2^24،25 في درجة حرارة 28 درجة مئوية في 14:10 ح الخفيفة دورة الظلام. نقل الثقافة يكفي لأنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل أن بعد السماح لمدة 15 دقيقة على تسوية، بيليه البكتيرية حوالي 0.05 مل في الحجم. قم بإزالة الوسائط واستبدال 1.5 مل مثبت (glutaraldehyde 1.25%، 0.1 M الفوسفات المخزن المؤقت pH 7.0)، برفق عكس عدة مرات، واحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
   2. نقل الخلايا الثابتة مع ماصة زجاجية في منصة ترشيح 10 مل (الشكل 1) التي تحتوي على عامل تصفية البولي 25 مم مع المسام ميكرومتر 0.8 أو 0.2، اعتماداً على حجم الخلايا. ختم الذراع الجانب والقمع بسدادات مطاطية لاحتواء الثقافة في القمع. إزالة مثبت بفراغ لطيف في دورق الترشيح، بعد إزالة السدادات على حد سواء.
      ملاحظة: إذا لم تكن كثافة الخلية على تصفية البولي الأمثل، قم بضبط مقدار ابتداء من الثقافة المستخدمة.
2. تعد الطحالب وحيدة الخلية (يوجلينويدس).
   1. تنمو الثقافات أونيالجال في وسائل الإعلام العربية-6²⁶ مع 150 مل لتر^-1 من التربة والمياه المتاحة تجارياً المتوسطة إضافة إلى وسائل الإعلام، عند درجة حرارة 22 درجة مئوية في 14:10 ح الخفيفة دورة الظلام. نقل 2 مل من الكثافة السكانية المنخفضة (OD₆₀₀ < 0.5) الثقافة مع ماصة زجاجية في منصة ترشيح 10 مل (الشكل 1) التي تحتوي على عامل تصفية البولي 25 مم مع 8 ميكرومتر المسام. ختم الذراع الجانب والقمع بسدادات مطاطية لاحتواء الثقافة في القمع.
      ملاحظة: إذا لم تكن كثافة الخلية على تصفية البولي الأمثل، قم بضبط مقدار ابتداء من الثقافة المستخدمة.
   2. إضافة ثلاث قطرات من 4% أكسيد الاوزميوم (أوسو₄) مباشرة إلى الثقافة والسماح لاحتضانها لإزالة الحد الأدنى 30 مثبت بفراغ لطيف في دورق الترشيح، بعد إزالة كلا السدادات.
      ملاحظة: أوسو₄ هو السمية حادة (عن طريق الجلد، عن طريق الفم، واستنشاق الطرق)، أكالة للجلد، وتضر بالعيون، ومحسس الجهاز تنفسي. وينبغي التعامل مع أوسو₄ في غطاء الأبخرة كيميائية باستخدام معدات الوقاية الشخصية الملائمة بما في ذلك القفازات، ومعطف مختبر، وحماية العين.
3. إعداد melanogaster المورفولوجية (ذبابة الفاكهة)²³.
   1. تخدير الكبار الذباب باستخدام ثاني أكسيد الكربون 100%. مكان تخديره من البالغين (حوالي 10 إلى 30 الذباب) في أنبوب الطرد مركزي القنينة أو 1.5 مل ملولبة بلاستيكية صغيرة.
   2. تزج تخديره من الذباب في 1 مل مثبت (glutaraldehyde 1.25%، 0.1 M الفوسفات المخزن المؤقت pH 7.2) ح 2 (أو بين عشية وضحاها) في 4 درجات مئوية. إذا كان الذباب تطفو على السطح لمثبت، إضافة بضع قطرات من 2.5% البولي إثيلين غليكول ثالثي-أوكتيلفينيل الاثير لإضعاف التوتر السطحي لمثبت السماح لغمر المجموع من الأنسجة. إزالة مثبت استخدام بيبيت زجاج.

2-الغسيل والجفاف

1. أغسل ويذوي البكتيريا الزرقاء.
   1. تغسل العينة ثابتة ثلاث مرات مع 5 مل من 0.1 متر الفوسفات المخزن المؤقت pH 7.0 في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. الاحتفاظ بقارورة والقمع امبولات للاحتفاظ المياه والصرف الصحي. إزالة كل غسل من فراغ لطيف في دورق الترشيح، بعد إزالة السدادات على حد سواء.
   2. يذوي العينة مع الحفاظ على الغمر المستمر باستخدام سلسلة متدرجة من إيثانول، لمدة 10 دقائق في حجم 5 مل في القمع. تركيزات الإيثانول متدرج: 25%، 50%، 75%، 95%، والتغييرات 2 الإيثانول 100%. الاحتفاظ بقارورة والقمع امبولات تحتوي على الإيثانول في القمع، منع الخسارة على حد سواء عن طريق التبخر والتدفق السلبي من خلال عامل تصفية.
   3. إزالة الإيثانول بفراغ لطيف في دورق الترشيح، بعد إزالة السدادات على حد سواء. نقل عامل تصفية/العينة ألومنيوم القابل للصرف يزن صحن يحتوي على الإيثانول 100% فقط ما يكفي لتغطية العينة قبل التجفيف.
2. أغسل ويذوي الطحالب وحيدة الخلية (يوجلينويدس).
   1. تغسل العينة ثابتة ثلاث مرات مع 5 مل مياه في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. الاحتفاظ بقارورة والقمع امبولات تحتوي على الغسيل في القمع. إزالة كل غسل من فراغ لطيف في دورق الترشيح، بعد إزالة السدادات على حد سواء.
   2. يذوي العينة مع الحفاظ على الغمر المستمر باستخدام سلسلة متدرجة من إيثانول لمدة 10 دقائق في حجم 5 مل في القمع. تركيزات الإيثانول متدرج: 25%، 50%، 75%، 95%، والتغييرات 2 الإيثانول 100%. الاحتفاظ بقارورة والقمع امبولات تحتوي على الإيثانول في القمع، منع الخسارة على حد سواء عن طريق التبخر والتدفق السلبي من خلال عامل تصفية.
   3. إزالة الإيثانول بفراغ لطيف في دورق الترشيح، بعد إزالة السدادات على حد سواء. نقل عامل تصفية/العينة ألومنيوم القابل للصرف يزن صحن يحتوي على الإيثانول 100% فقط ما يكفي لتغطية العينة قبل التجفيف.
3. أغسل ويذوي melanogaster المورفولوجية (ذبابة الفاكهة).
   1. تغسل العينة ثابتة ثلاث مرات مع 1 مل من 0.1 متر الفوسفات المخزن المؤقت pH 7.2 في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل. إزالة كل غسل مع ماصة زجاجية، مع الحرص على عدم إزالة الذباب.
   2. يذوي العينة باستخدام سلسلة متدرجة من إيثانول، لمدة 10 دقيقة في حجم 1 مل في أنبوب [ميكروفوج]. تركيزات الإيثانول: 25%، 50%، 75%، 80%، 95%، 100%. إزالة الإيثانول مع ماصة زجاجية، مع الحرص على عدم إزالة الذباب.
   3. الاحتفاظ بالعينة في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل مع الإيثانول 100% فقط ما يكفي لتغطية العينة قبل التجفيف.

3-التجفيف

1. إجراء التجفيف الكيميائية باستخدام t-بوتيل الكحول (TBA)²⁷.
   1. استبدال الحل الإيثانول 100% مع حل 1:1 من الإيثانول TBA و 100% لأدنى 20 استبدال تكرار الحل 1:1 مع 100 ٪ TBA على 20 دقيقة مرتين. يبقى الحل في 37 درجة مئوية حيث أن عدم تجميد القابلات التقليديات.
      ملاحظة: قد يضاف 100% نقطة تجميد 25.5 درجة مئوية؛ الحل 1:1 لن تجمد في درجة حرارة الغرفة. يضاف هو قابل للاشتعال ويسبب تهيج العين خطيرة وضارة إذا استنشق وقد يسبب تهيج الجهاز التنفسي أو النعاس أو الدوخة. ينبغي التعامل مع القابلات التقليديات في غطاء الأبخرة كيميائية باستخدام معدات الوقاية الشخصية الملائمة بما في ذلك القفازات، ومعطف مختبر، وحماية العين.
   2. نقل العينة في القابلات التقليديات، إذا كان في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، إلى ألومنيوم القابل للصرف وزنها الطبق. مرة واحدة في الطبق وزنها الألومنيوم، إزالة القابلات التقليديات واستبدل بما يكفي TBA 100% جديدة لتغطية العينة. تجميد TBA عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
   3. نقل إلى مجفف فراغ (جرة بيل) مع حزم هلام المجمدة لإبقاء TBA المجمدة. إخلاء والحفاظ على الفراغ بمضخة دوارة للسماح للعينة الجافة بالتسامي الفراغ من القابلات التقليديات المجمدة لمالا يقل عن 3 ح أو بين ليلة وضحاها.
2. إجراء التجفيف الكيميائية باستخدام هيكساميثيلديسيلازاني (همدس)²⁰.
   1. يستعاض عن الحل الإيثانول 100% مع حل 1:2 من همدس والايثانول 100% 20 دقيقة ليحل محل الحل 1:2 مع حل همدس 2:1 الإيثانول 100% عن 20 دقيقة 2:1 الحل مع 100% همدس ل 20 دقيقة كرر مرة واحدة.
      ملاحظة: هو همدس القابلة للاشتعال والسمية حادة (المسار عن طريق الجلد). وينبغي التعامل مع همدس في غطاء الأبخرة كيميائية باستخدام معدات الوقاية الشخصية الملائمة بما في ذلك القفازات، ومعطف مختبر، وحماية العين.
   2. نقل العينة في همدس، إذا كان في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، إلى ألومنيوم القابل للصرف وزنها الطبق. مرة واحدة في الألومنيوم يزن صحن، استبدال 100% همدس بما يكفي طازجة 100% همدس لتغطية العينة.
   3. نقل العينة إلى مجفف غير فراغ من البلاستيك أو الزجاج مع ديسيككانت جديدة (5-6 سم العميق) ووضع في غطاء الأبخرة كيميائية. وبدلاً من ذلك، وضع العينة مباشرة في غطاء الأبخرة كيميائية الجافة مع غطاء فضفاض، مثل مربع، لمنع الأنقاض من الوقوع في العينة. تسمح العينة الجافة ح 12 إلى 24.

4-تصاعد

1. جبل البكتيريا الزرقاء ويوجلينويدس.
   1. التسمية أسفل أما الألومنيوم 12 أو 25 مم تصاعد كعب روتين للإشارة إلى ما يوضع على أعلى. قطع تصفية البولي مع الخلايا المجففة إلى أرباع مع شفرة حلاقة نظيفة أو مشرط إذا استخدام كعب روتين 12 مم، أو وضع عامل التصفية كامل إذا كان استخدام كعب روتين 25 مم.
   2. ضع كل مرشح على لاصق أو علامة لاصقة الكربون المضمونة إلى الأعلى من كعب روتين.
2. جبل melanogaster المورفولوجية (ذبابة الفاكهة).
   1. قم بتسمية الجزء السفلي من الألومنيوم تصاعد كعب الروتين للإشارة إلى ما يوضع على أعلى.
      ضع الذباب المجفف في الموضع الذي تريده من علامة التبويب لاصقة لاصقة أو الكربون المضمون بالجزء العلوي من كعب روتين تحت مجهر تشريح مع ملاقط الدقة.
   2. تطبيق لاصقة موصلة الفضة، أي الفضة الطلاء، حول الحواف الخارجية لبذرة. قم بتوصيل الطلاء الفضة الذباب باستخدام مسواك لضمان التوصيل. عدم السماح بالطلاء للمس في مجال التصوير المطلوب.
   3. وضع كعوب الروتين في مربع حامل كعب ثم ضع مربع حامل كعب مفتوحة في مجفف. السماح الطلاء الفضة الجاف على الأقل 3 ساعات أو بين عشية وضحاها للحصول على أفضل النتائج.

5-تفل طلاء

1. إعداد جهاز طلاء الرش، بإجراء مسح أربعة أو خمسة من غاز الأرجون. إذا كانت الرطوبة عالية (أي الهواء الغرفة يشعر رطبة، عادة نحو 50% رطوبة نسبية)، إجراء مسح ستة إلى سبعة. تفل معطف بذرة اتباع إرشادات الشركة المصنعة.
2. تستخدم عينات معطف استناداً إلى العينة:
   1. للمرشحات بالبكتيريا الزرقاء، تعيين جهاز ضبط الوقت تفل معطف من 180 s مباشرة على.
   2. بالنسبة للمرشحات مع الطحالب حقيقية النواة، أي، يوجلينويدس، تعيين جهاز ضبط الوقت تفل معطف 120 s s مستقيمة على، ثم 20 في الأطراف الثلاثة بزاوية 45 درجة.
   3. بالنسبة لعينات كبيرة، أي رؤساء يطير، تعيين جهاز ضبط الوقت تفل معطف 60 s s مستقيمة على، ثم 30 في كل جانب بزاوية 45 درجة.
      ملاحظة: بعد الانتهاء من الطلاء، ينبغي أن تكون بذرة رمادي فاتح اللون.

6-التصوير

1. صورة العينات باستخدام المسح الإلكتروني المجهري يحتوي على كاشف الإلكترونات الثانوية (جنوب شرق).
   1. للبكتيريا الزرقاء، تطبيق الإعدادات التالية: 3-5 كيلوفولت مسرع الجهد (AC) والتحقيق الحالي (PC) 20-30 والمسافة العمل 5 مم (WD). بالنسبة يوجلينويدس، استخدم 3 كيلو فولت تيار متردد، 30 PC، و 5 ملم WD. للذباب، استخدم 5 كيلو فولت تيار متردد، 30 PC، و 5 إلى 10 ملم WD.
2. ضبط التكبير تبعاً للحجم من التفصيل أو الكائن تصور. ضبط ستيجماتورس وفتحات، والتركيز حتى يتم إنتاجه صورة واضحة. التقاط الصورة باستخدام إعدادات عالية الاستبانة وفقا لإرشادات الشركة المصنعة من sem.

النتائج

البكتيريا الزرقاء هي مجموعة بدائية من الكائنات الحية ذات الأهمية الحاسمة للكربون على الصعيد العالمي، والأكسجين، ودورات النيتروجين^28،29. أنواع البكتيريا الزرقاء³⁰6000 المقدرة، الأكثر غمد موسيلاجينوس التي تغطي وتوصيل الخلايا مع...

Discussion

هنا يمكننا وصف بروتوكول باستخدام وزارة شؤون المرأة للحصول على معلومات مفصلة حول الخصائص المورفولوجية الخارجية من ثلاثة أنواع من الكائنات الحية أن الآخرين يمكن أن تنطبق على دراسة السمات لأنواع عديدة من الكائنات الحية أو الأنسجة. في كل خطوة من البروتوكول، هناك نقاط محتملة للخطأ التي قد تن?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
gold–palladium	Ted Pella, Inc.	91212
Silver conductive adhesive 503	Electron Microscopy Sciences	12686-15
Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 8 μm, polycarbonate	Sigma	WHA110614
Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 0.8 μm, polycarbonate, black	Sigma	WHA110659
Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 0.2 μm, polycarbonate	Sigma	WHA110606
aluminum weighing dish	Fisher Scientific	08-732-100
aluminum mounting stubs (12 mm)	Electron Microscopy Sciences	75210
aluminum mounting stubs (25 mm)	Electron Microscopy Sciences	75186
Adhesive tabs	Electron Microscopy Sciences	76760
conductive carbon adhesive tabs	Electron Microscopy Sciences	77825
F/2 media	Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin	https://utex.org/products/f_2-medium	No Catalog number given - see link
AF6 media	Bigelow - National Center for Marin Algae and Microbiota	https://ncma.bigelow.org/media/wysiwyg/Algal_recipes/NCMA_algal_medium_AF6_1.pdf	No Catalog number given - see link
Soil water medium	Carolina Biological Supply Company	153785
Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether (Triton X-100)	VWR	97062-208
Hummer 6.2 Sputter Coater	Anatech USA	http://www.anatechusa.com/hummer-sputter-systems/4	No Catalog number given - see link
Hitachi 3400N-II SEM	Hitachi	https://www.hitachi-hightech.com/us/product_list/?ld=sms2&md=sms2-1&sd=sms2-1 -2&gclid=EAIaIQobChMIpq_jtJfj3A IVS7jACh2mdgkPEAAYASAAEgKA nfD_BwE	The company doesn't appear to sell this model any longer