عزل وإكثار بريون البروتين التعبير خلال تمايز الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية البشرية لب الأسنان

Summary

نقدم هنا بروتوكولا لعزل "الخلايا الجذعية لب الأسنان" البشرية والدعوة من أجل تقييم التعبير بريون البروتين أثناء عملية تمايز الخلايا العصبية.

Abstract

قضايا الأخلاقيات البيولوجية المتصلة بالتلاعب بالخلايا الجذعية الجنينية أعاقت التقدم في مجال البحوث الطبية. ولهذا السبب، من المهم جداً للحصول على الخلايا الجذعية البالغة من أنسجة مختلفة مثل الدهنية والحبل السري والنخاع العظمى والدم. بين المصادر الممكنة، لب الأسنان تتسم بأهمية خاصة لأنه من السهل الحصول عليها فيما يتعلق باعتبارات أخلاقيات علم الأحياء. والواقع أن الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية (هدبسكس) هي نوع من الخلايا الجذعية البالغة قادرة على التمييز في الخلايا العصبية مثل ويمكن الحصول عليها من المولى الثالث للمرضى الأصحاء (الفئة العمرية 13-19). على وجه الخصوص، لب الأسنان تم إزالتها مع حفارة مقطعة شرائح صغيرة وتعامل مع كولاجيناز الرابع ومثقف في قارورة. للحث على التفريق بين الخلايا العصبية، قد حفزت هدبسكس مع لو/بفجف لمدة أسبوعين. سابقا، قد أثبتنا أنه أثناء عملية التمايز محتوى الخلوية بريون البروتين (PrP^ج) في هدبسكس زيادة. وأظهر تحليل سيتوفلوريميتريك تعبير مبكر عن الحزب الثوري^ج التي ازدادت بعد عملية تمايز الخلايا العصبية. الاجتثاث من الحزب الثوري^ج قبل siRNA PrP حالت دون تمايز الخلايا العصبية الناجمة عن لو/بفجف. في هذه الورقة، توضح لنا أن علينا تعزيز العزل والفصل و في المختبر أساليب زراعة هدبسكس مع عدة إجراءات سهلة، كانت أكثر كفاءة الخلية استنساخ التوسع على نطاق واسع والتي تم الحصول عليها للخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) وقد لوحظ. ونحن أيضا إظهار كيف هدبسكس، التي تم الحصول عليها بطرق مفصلة في البروتوكول، ونموذج تجريبي ممتازة لدراسة عملية تمايز الخلايا العصبية MSCs والعمليات الجزيئية والخلوية اللاحقة.

Introduction

وكانت الخلايا الجذعية الوسيطة معزولة من أنسجة عدة، بما فيها نخاع العظام ودم الحبل السري ولب الأسنان البشرية، والأنسجة الدهنية والدم^1،2،3،،من^{45 , 6}-كما أفاد العديد من المؤلفين، هدبسكس إظهار البلاستيك التقيد، مورفولوجيا تنتجها الخلايا الليفية مثل نموذجي. وهذه تمثل عدد سكان العالية غير متجانسة مع الحيوانات المستنسخة مميزة والاختلافات في القدرات التكاثري والتفريق^7،8. هدبسكس التعبير عن علامات محددة للخلايا الجذعية الوسيطة (أي CD44، CD90، CD73، CD105، قامت-1)، وهي سلبية لبعض العلامات المكونة للدم (مثل CD14 و CD19) وهي قادرة على التمايز في المختبر مولتيلينيجي^{9، 10،11}.

وقد أظهرت العديد من المؤلفين أن هذه الخلايا غير قادرة على التمييز في الخلايا العصبية مثل استخدام البروتوكولات المختلفة، التي تشمل إضافة ستموت، بفجف، لو في تركيبة مع محدد وسائط الإعلام والملاحق^7،12. أيضا، تشارك العديد من البروتينات أثناء عملية تمايز الخلايا العصبية، ومن بين هذه، تظهر عدة ورقات دور ذات الصلة والتعبير كبيرة من بروتين بريون الخلوية (PrP^ج)، سواء في الخلايا الجذعية الجنينية والبالغة^{13، 14}-يمثل الحزب الثوري^ج جزيء بليوتروبيك قادرة على أداء وظائف مختلفة داخل الخلايا كالنحاس الأيض، المبرمج، والتشديد على المقاومة للأكسدة^15،،من^{1617 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22}.

لدينا ورقة السابقة²³، نحن التحقيق في دور الحزب الثوري^ج في عملية تمايز الخلايا العصبية هدبسكس. وفي الواقع، هدبسكس إكسبريس بريكوسيوسلي PrP^ج ، وبعد التفريق بين الخلايا العصبية، كان من الممكن نلاحظ زيادة إضافية. مؤلفين آخرين الافتراض بدور محتمل للحزب الثوري^ج في عمليات تمييز الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية. وفي الواقع، محركات PrP^ج التفريق بين الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في الخلايا العصبية، وأوليجوديندروسيتيس، وأستروسيتيس²⁴. وكان الغرض من هذه الدراسة التأكيد على المنهجية للحصول على الخلايا الجذعية من لب الأسنان وعملية التمايز ودور الحزب الثوري^ج خلال تمايز الخلايا العصبية.

Protocol

وقد اقتطعت الأضراس الثالثة المستخدمة في الدراسة من المرضى (13-19 سنة) مع لا تاريخ مسبق لاستهلاك الكحول أو المخدرات، والتدخين جميع وصحة الفم والأسنان المناسبة. اليوم من التفسير، في قسم علوم طب الأسنان والفكين في جامعة روما "سابينزا"، تم الحصول على الموافقة المستنيرة من المرضى أو الآباء والأمهات. تم الحصول على الموافقة المستنيرة على أساس الاعتبارات الأخلاقية وموافقة لجنة الأخلاقيات.

1-الأسنان واستخراج لب الأسنان

1. إعداد الوسيلة المناسبة للحفظ أو النقل.
   1. إعداد "تعديل النسر" دولبيكو متوسط تركيز منخفض من الجلوكوز (دميم-L) مع لام الجلوتامين (494.5 مل).
   2. إضافة 5 مل من البنسلين/ستربتوميسين (1%) و 0.5 مل الامفوتريسين (0.1%).
2. استخراج المولى الثالث من المريض، بسرعة شطفة مع برنامج تلفزيوني، ووضعت في أنبوب اختبار 15 مل مع المتوسط ونقلها إلى المختبر في أقل من 2 ح.
3. تحت غطاء واقية، فتح الأسنان مع قاطع بتمرير قطع الاكليلية المماس سقف قاعة اللب ومتوازية.
4. بلطف إزالة اللب مع حفارة صغيرة ووضعها في أنبوب اختبار.
5. أغسل ثلاث مرات ببرنامج تلفزيوني والطرد المركزي في س 2,500 ز لمدة 10 دقائق في الرايت

2-معالجة لب الأسنان والإفراج عن الخلايا الجذعية

1. إزالة المادة طافية، ريسوسبيند بيليه في الحل في هانك ووضعه في طبق بتري. احتضانها ح 2 في 37 درجة مئوية في شركة 5%₂.
2. اكتب الرابع كولاجيناز إعداد الحل.
   1. إعداد 0.8 مل من دميم-l.
   2. تذوب 1 مغ من النوع الرابع كولاجيناز مل 0.8 L دميم ودوامه لمدة عدة دقائق.
   3. إضافة دميم-L تصل إلى 1 مل أن يكون تركيز نهائي 1 ملغ/مل.
   4. تصفية الحل مع عامل تصفية 0.22 ميكرومتر.
3. إزالة الحل هانك بواسطة الطرد المركزي في س 2,500 ز لمدة 10 دقائق في الرايت ويقسم اللب إلى شرائح صغيرة أبروكسيماتيفيلي 1 مم كل واحد مع مشرط المتاح.
4. وضع شرائح اللب في طبق بتري واحتضان مع 1 مل من النوع الرابع كولاجيناز لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية في شركة 5%₂.
5. إعداد الثقافة المتوسطة (500 مل).
   1. إلى 445 مل من دميم-L مع لام الجلوتامين.
   2. إضافة 50 مل مصل البقري الجنين (FBS) (10%).
   3. إضافة 5 مل من البنسلين/ستربتوميسين (1%).
6. الطرد المركزي العينة في س 2,500 ز لمدة 10 دقائق في الرايت، إزالة المادة طافية، ريسوسبيند بيليه في الأجل المتوسط (الخطوة 2، 5) والثقافة في قارورة T25 محددة للخلايا الجذعية في 37 درجة مئوية في شركة 5%₂.

3-الخلايا الجذعية الثقافة والنشر

1. كل يوم تحقق الثقافة، وبعد 3 أيام نمو، مراقبة مختلفة استنساخ الخلايا ملتصقة داخل قارورة.
2. تغيير كل 3 أيام المتوسطة الثقافة.
3. بين 7 و 12 يوما، بمجرد الوصول إلى التقاء الخلايا ملتصقة، فصل لهم بعلاج الخلايا مع 1 مل يدتا التربسين لمدة 3 دقائق في 37 درجة مئوية أو برفق باستخدام مكشطة خلية.
4. إضافة 4 مل (نسبة 1:5) للثقافة المتوسطة (الخطوة 2.5) لوقف عمل التربسين.
5. الطرد المركزي من تعليق خلية لمدة 6 دقائق في 259 x زوإزالة المادة طافية ووضع الخلايا في قارورة T25 للنشر.
   ملاحظة: كل 3 أيام تصل الخلايا إلى التقاء.
6. تنتشر الخلايا تصل إلى 21 أو 28 يوما (حوالي 6-8 فقرات) لتجنب الوجود غير الجذعية مثل الخلايا في الثقافة.
7. فصل الخلايا مع 1 مل يدتا التربسين لمدة 3 دقيقة في 37 درجة مئوية أو إلغاء بلطف. الطرد المركزي بتعليق خلية لمدة 6 دقائق في 259 x ز.
8. إزالة المادة طافية واختبار الخلايا لتحليل سيتوفلوريميتريك (الخطوة 6).

4-عابر PrP^ج سيلينسينج ب siRNA

1. الثقافة هدبسكسين 6-جيدا لوحات (2 × 10⁵ خلية/مل) مع 2 مل من الثقافة المتوسطة (الخطوة 2.5) ح 24.
2. اليوم التالي، إعداد siRNA PrP المتوسطة (400 ميليلتر).
   1. إضافة إلى أنبوب اختبار عقيمة، 384 ميليلتر دميم-l.
   2. إضافة 1 ميليلتر لكل نوع من siRNA الحزب الثوري إلى دميم-L يكون تركيز نهائي من 5 نانومتر (siRNA 4 تستخدم الحزب الثوري والتحقق من قبل المورد لضمان نسبة % إيه سيفن زيرو كفاءة ضربة قاضية).
   3. إضافة 12 ميليلتر من ترانسفيكتيونريجينت إلى دميم-l.
   4. دوامة الخليط واحتضان لمدة 10 دقيقة على RT للسماح بتشكيل مجمعات تعداء.
3. إضافة 400 ميكروليتر siRNA PrP متوسطة لكل عينة واحتضانها ح 6 عند 37 درجة مئوية.
4. دون تجاهل siRNA PrP المتوسطة، إضافة 1.6 مل (نسبة 1 إلى 5) من الثقافة المتوسطة (الخطوة 2، 5).
5. ترك الخلايا ح 72 في 37 درجة مئوية.
6. إزالة المادة طافية ويغسل 3 مرات مع 2 مل من برنامج تلفزيوني في الرايت
7. إضافة 2 مل من الخلايا العصبية الثقافة المتوسطة لمدة 7 أو 14 يوما (الخطوة 5، 1).
8. تغيير المتوسطة ثقافة العصبية كل 3 أيام.
   ملاحظة: استبدال siRNA حل الحزب الثوري كل وقت استبدال المتوسطة ثقافة العصبية.
9. في نهاية الوقت، يغسل 3 مرات مع 2 مل من برنامج تلفزيوني في الرايت واختبار الخلايا العصبية المستضدات السطحية بتحليل "لطخة الغربية".

5-الخلايا العصبية عملية الاستقراء من هدبسكس

1. إعداد الخلايا العصبية الثقافة المتوسطة (500 مل).
   1. إعداد مل 444.7 وسائط القاعدية للخلايا العصبية.
   2. للمتوسط إضافة 50 مل ملحق خالية من المصل يستخدم لدعم استمرارية على المدى الطويل للخلايا الجذعية العصبية الجنينية والكبار (10%).
   3. إضافة 200 ميليلتر من أساسية "تنتجها الخلايا الليفية عامل النمو" (بفجف) (تركيز النهائي 40 نانوغرام/ملليلتر) و 100 ميليلتر من عامل نمو البشرة (لو) إلى المتوسطة (التركيز النهائي 20 نانوغرام/ملليلتر).
   4. إضافة 5 مل من البنسلين/ستربتوميسين (1%) إلى المتوسط.
2. هدبسكس الثقافة في لوحات 6-جيدا (2 × 10⁵ خلية/مل) تصل إلى 28 يوما من فصل اللب وتحفيز لهم مع 2 مل من الخلايا العصبية الثقافة المتوسطة.
3. كل 3 أيام تجاهل المادة طافية ويغسل 3 مرات مع 2 مل من برنامج تلفزيوني في الرايت واستبدال 2 مل المتوسطة ثقافة العصبية.
4. وبعد أيام 7 و/أو 14، فصل الخلايا مع 1 مل يدتا التربسين لمدة 3 دقائق في 37 درجة مئوية أو بلطف مكشطة.
5. إضافة 4 مل (نسبة 1:5) للثقافة المتوسطة (الخطوة 2.5) لوقف عمل التربسين.
6. اختبار وجود المستضدات السطحية العصبية (الخطوة 6) أو تعبير بروتين بريون (الخطوة 7) عن طريق تحليل التدفق الخلوي.

6-وصف هدبسكس "التدفق الخلوي"

1. تحديد الوسيطة stromal (MSC)-المستضدات السطحية محددة أو الخلايا العصبية.
2. الثقافة هدبسكس في لوحات 6-جيدا (2 × 10⁵ خلية/مل) مع 2 مل من الثقافة المتوسطة (الخطوة 2، 5).
3. فصل هدبسكس في 28 يوما من فصل لب الأسنان أو بعد 14 يوما من الخلايا العصبية الثقافة المتوسطة (الخطوة 5، 1) مع 1 مل يدتا التربسين لمدة 3 دقيقة في 37 درجة مئوية أو مكشطة بلطف.
4. إضافة 4 مل (نسبة 1:5) للثقافة المتوسطة (الخطوة 2.5) لوقف عمل التربسين وسينتريفوجاتي في 259 x ز لمدة 6 دقائق في الرايت يغسل آخر مرة 2 مع 2 مل من برنامج تلفزيوني في الرايت
5. فيكس هدبسكس غير المعالجة أو المعالجة مع بارافورمالدهيد 4% في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
6. بيرميبيليزي هدبسكس مع الفاعل غير الأيونية 0.1% (v/v) في برنامج تلفزيوني عن 10 دقيقة إضافية في الرايت
7. تنفيذ حظر مع الحليب المجفف الخالي 5% في 1 مل من برنامج تلفزيوني عن ح 1 في الرايت
8. أغسل 3 مرات مع 1 مل من برنامج تلفزيوني واحتضان الخلايا مع مكافحة--CD105 (1: 100/5 × 10 الخلايا⁵ )، CD44 مكافحة (1: 100/5 × 10 الخلايا⁵ ) المضادة-قامت-1 (1: 100/5 × 10⁵ خلايا)، مكافحة--CD90 (1: 100/5 × 10 الخلايا⁵ )، مكافحة--CD73 (1: 100/5 × 10⁵ الخلايا)، مكافحة β3-Tubulin (1: 100/5 × 10⁵ خلايا)، مكافحة--الشركة (1: 100/5 × 10⁵ خلايا) ومكافحة GAP43 (1: 100/5 × 10⁵ خلايا) ماب ح 1 في الرايت
9. تغسل الخلايا 3 مرات مع 1 مل من برنامج تلفزيوني واحتضان مع الماوس المضادة PE (01:50/5 × 10⁵ خلايا) أو CY5 أرنب المضادة الإنسان والمحيط الحيوي (01:50/5 × 10⁵ خلايا) ح 1 إضافية في الرايت
10. استخدام الأجسام المضادة الثانوية النابضة الخلايا إيمونوبوسيتيفي (PE الماوس المضادة أو أرنب المضادة CY5 ماب) وتحليل جميع العينات مع سيتوميتير تدفق والحصول على الأحداث على الأقل 20,000.

7-تقييم التعبير PrP^ج في هدبسكس بتحليل التدفق الخلوي

1. الثقافة هدبسكسين 6-جيدا لوحات (2 × 10⁵ خلية/مل) مع 2 مل من الثقافة المتوسطة (الخطوة 2، 5).
2. فصل هدبسكس في 21 و 28 يوما من فصل لب الأسنان وبعد أيام 7 و/أو 14 مع الخلايا العصبية الثقافة المتوسطة (الخطوة 5، 1) مع 1 مل من التربسين-يدتا ووقف عمل التربسين كما هو موضح في الخطوة 6، 4. إصلاح العينات مع بارافورمالدهيد 4% في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
3. بيرميبيليزي مع سورفاكتانتين غير الأيونية 0.1% (v/v) برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في إزالة الرايت المادة طافية ووصمة عار الخلايا مع أرنب PrP مكافحة ماب EP1802Y (01:50/5 × 10⁵ خلايا) ماب ح 1 في الرايت إينكوباتي مع أرنب المضادة CY5 (01:50/5 × 10⁵ خلايا) للإنسان والمحيط الحيوي ل ح 1 إضافية في الرايت
4. تحليل جميع العينات مع سيتوميتير تدفق وتكتسب الأحداث 20,000 على الأقل.

النتائج

إجراءات العزل والفصل هدبسكس من لب الأسنان، التي تم الحصول عليها من المولى الثالث، هي العمليات المعقدة التي يمكن أن تؤدي التغييرات الصغيرة نتيجة مدمرة. في هذه الورقة، ونحن استخدام البروتوكول لآرثر et al. ¹² مع العديد من التحسينات. ويرد في الشكل 1<...

Discussion

في هذا العمل، وركزنا على منهجية للعزل والتفريق بين الخلايا العصبية هدبسكس؛ وعلاوة على ذلك، يمكننا تقييم دور الحزب الثوري^ج في هذه العملية. هناك عدة طرق لعزل والتفريق بين هدبسكس في الخلايا مثل الخلايا العصبية والخطوات الحاسمة خلال العملية. هدبسكس قادرين على التفريق في الأنساب عدة مث?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Amphotericin B solution	Sigma-Aldrich	A2942	It is use to supplement cell culture media, it is a polyene antifungal antibiotic from Streptomyce
Anti-B3tubulin	Cell Signaling Technology	#4466	One of six B-tubulin isoform, it is expressed highly during fetal and postnatal development, remaining high in the peripheral nervous system
Anti-CD105	BD Biosciences	611314	Endoglin (CD105), a major glycoprotein of human vascular endothelium, is a type I integral membrane protein with a large extracellular region, a hydrophobic transmembrane region, and a short cytoplasmic tail
Anti-CD44	Millipore	CBL154-20ul	Positive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
Anti-CD73	Cell Signaling Technology	13160	CD73 is a 70 kDa glycosyl phosphatidylinositol-anchored, membrane-bound glycoprotein that catalyzes the hydrolysis of extracellular nucleoside monophosphates into bioactive nucleosides
Anti-CD90	Millipore	CBL415-20ul	Positive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
Anti-GAP43	Cell Signaling Technology	#8945	Is a nervous system specific, growth-associated protein in growth cones and areas of high plasticity
Anti-mouse PE	Abcam	ab7003	Is an antibody used in in flow cytometry or FACS analysis
Anti-NFH	Cell Signaling Technology	#2836	Is an antibody that detects endogenous levels of total Neurofilament-H protein
Anti-PrP mAb EP1802Y	Abcam	ab52604	Rabbit monoclonal [EP 1802Y] to Prion protein PrP
Anti-rabbit CY5	Abcam	ab6564	Is an antibody used in in flow cytometry or FACS analysis
Anti-STRO 1	Millipore	MAB4315-20ul	Positive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
B27 Supp XF CTS	Gibco by life technologies	A14867-01	B-27  can be used to support induction of human neural stem cells (hNSCs) from pluripotent stem cells (PSCs), expansion of hNSCs, differentiation of hNSCs, and maintenance of mature differentiated neurons in culture
BD Accuri C6 flow cytometer	BD Biosciences	AC6531180187	Flow cytometer equipped with a blue laser (488 nm) and a red laser (640 nm)
BD Accuri C6 Software	BD Biosciences		Controls the BD Accuri C6 flow cytometer system in order to acquire data, generate statistics, and analyze results
bFGF	PeproThec, DBA	100-18B	basic Fibroblast Growth Factor
Centrifuge CL30R	Termo fisher Scientific	11210908	it is a device that is used for the separation of fluids,gas or liquid, based on density
CO2 Incubator 3541	Termo fisher Scientific	317527-185	it ensures optimal and reproducible growth conditions for cell cultures
Collagenase, type IV	Life Technologies	17104019	Collagenase is a protease that cleaves the bond between a neutral amino acid (X) and glycine in the sequence Pro-X-Glyc-Pro, which is found with high frequency in collagen
Disposable scalpel	Swann-Morton	501	It is use to cut tissues
DMEM-L	Euroclone	ECM0060L	Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose with L-Glutamine with Sodium Pyruvate
EGF	PeproThec, DBA	AF-100-15	Epidermal Growth Factor
Fetal Bovine Serum	Gibco by life technologies	10270-106	FBS is a popular media supplement because it provides a wide array of functions in cell culture. FBS delivers nutrients, growth and attachment factors and protects cells from oxidative damage and apoptosis by mechanisms that are difficult to reproduce in serum-free media (SFM) systems
Filtropur BT50 0.2,500 mL Bottle top filter	Sarstedt	831,823,101	it is a device that is used for filtration of solutions
Flexitube GeneSolution for PRNP	Qiagen	GS5621	4 siRNAs for Entrez gene 5621. Target sequence N.1 TAGAGATTTCATAGCTATTTA  N.2 CAGCAAATAACCATTGGTTAA  N.3. CTGAATCGTTTCATGTAAGAA  N.4  CAGTGACTATGAGGACCGTTA
Hank's solution 1x	Gibco by life technologies	240200083	The essential function of Hanks′ Balanced Salt solution is to maintain pH as well as osmotic balance. It also provides water and essential inorganic ions to cells
HiPerFect Transfection Reagent	Qiagen	301705	HiPerFect Transfection Reagent is a unique blend of cationic and neutral lipids that enables effective siRNA uptake and efficient release of siRNA inside cells, resulting in high gene knockdown even when using low siRNA concentrations
Neurobasal A	Gibco by life technologies	10888022	Neurobasal-A Medium is a basal medium designed for long-term maintenance and maturation of pure post-natal and adult brain neurons
Paraformaldehyde	Sigma-Aldrich	30525-89-4	Paraformaldehyde has been used for fixing of cells and tissue sections during staining procedures
penicillin/streptomycin	Euroclone	ECB3001D	It is use to supplement cell culture media to control bacterial contamination
Phosphate buffered saline  (PBS)	Euroclone	ECB4004LX10	PBS is a balanced salt solution used for the handling and culturing of mammalian cells. PBS is used to to irrigate, wash, and dilute mammalian cells. Phosphate buffering maintains the pH in the physiological range
TC-Platte 6 well, Cell+,F	Sarstedt	833,920,300	It is a growth surface for adherent cells
Tissue culture flask T-25,Cell+,Vented Cap	Sarstedt	833,910,302	Tissue culture flask T-25, polystyrene, Cell+ growth surface for sensitive adherent cells, e.g. primary cells, canted neck, ventilation cap, yellow, sterile, Pyrogen-free, non-cytotoxic, 10 pcs./bag
Triton X-100	Sigma-Aldrich	9002-93-1	Widely used non-ionic surfactant for recovery of membrane components under mild non-denaturing conditions
Trypsin-EDTA	Euroclone	ECB3052D	Trypsin will cleave peptides on the C-terminal side of lysine and arginine amino acid residues. Trypsin is used to remove adherent cells from a culture surface
Tube	Sarstedt	62,554,502	Tube 15 mL, 120 mm x17 mm, PP
VBH 36 C2 Compact	Steril	ST-003009000	Offers totally protection for the enviroment and worker
ZEISS Axio Vert.A1 – Inverted Microscope	Zeiss	3849000962	ZEISS Axio Vert.A1 provides a unique entry level price and can provide all contrasting techniques, including brightfield, phase contrast, PlasDIC, VAREL, improved Hoffman Modulation Contrast (iHMC), DIC and fluorescence. Incorporate LED illumination for gentle imaging for fluorescently-labeled cells. Axio Vert.A1 is ergonomically designed for routine work and compact enough to sit inside tissue culture hoods.