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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

Qui presentiamo un protocollo per isolamento umano Dental Pulp Stem Cells e propagazione al fine di valutare l'espressione della proteina del prion durante il processo di differenziamento neuronale.

Abstract

Questioni bioetiche relazionati alla manipolazione delle cellule staminali embrionali hanno ostacolato i progressi nel campo della ricerca medica. Per questo motivo, è molto importante ottenere cellule staminali adulte da diversi tessuti quali adiposo, cordone ombelicale, midollo osseo e del sangue. Tra le possibili fonti, polpa dentale è particolarmente interessante perché è facile da ottenere per quanto riguarda considerazioni bioetiche. Infatti, le cellule staminali dentarie polpa umana (hDPSCs) sono un tipo di cellule staminali adulte in grado di differenziare in cellule di un neurone-come e può essere ottenuta dal terzo molare di pazienti sani (età 13-19). In particolare, la polpa dentale è stato rimosso con un escavatore, tagliata a fette piccole, trattata con collagenasi IV e coltivata in un matraccio da. Per indurre il differenziamento neuronale, hDPSCs sono stati stimolati con EGF/bFGF per 2 settimane. Precedentemente, abbiamo dimostrato che durante il processo di differenziazione il contenuto cellulare prion proteina (PrPC) in hDPSCs aumentato. L'analisi citofluorimetrica ha mostrato un'espressione precoce di PrPC che aumentato dopo il processo di differenziamento neuronale. Ablazione di PrPC di siRNA PrP ha impedito il differenziamento neuronale indotta da EGF/bFGF. In questa carta, illustriamo come abbiamo migliorato l'isolamento, separazione e metodi di coltivazione in vitro di hDPSCs con diverse procedure di facile, più efficienti cloni a cellula sono stato ottenuto e su larga scala l'espansione delle cellule staminali mesenchimali (MSCs) è stato osservato. Indichiamo anche come hDPSCs, ottenuti con metodi dettagliati nel protocollo, sono un eccellente modello sperimentale per studiare il processo di differenziamento di cellule staminali mesenchimali e successivi processi cellulari e molecolari.

Introduzione

Cellule staminali mesenchimali sono state isolate da diversi tessuti, compreso il midollo osseo, sangue del cordone ombelicale, polpa dentaria umana, tessuto adiposo e sangue1,2,3,4,5 , 6. come riportato da diversi autori, hDPSCs Visualizza plastica aderenza, una tipica morfologia di fibroblasto-come. Questi rappresentano una popolazione altamente eterogenea con cloni distinti e le differenze nella capacità proliferativa e differenziante7,8. hDPSCs express markers specifici per le cellule staminali mesenchimali (cioè CD44, CD90, CD73, CD105, STRO-1), esse sono negativi per alcuni marcatori ematopoietici (quali CD14 e CD19) e sono capaci di differenziazione in vitro di multilineage9, 10,11.

Diversi autori hanno dimostrato che queste cellule sono in grado di differenziarsi in cellule del neurone-come utilizzando protocolli diversi, che includono l'aggiunta di NGF, bFGF, EGF in combinazione con la specifica media e integratori7,12. Inoltre, molte proteine sono coinvolti durante il processo di differenziamento neuronale e, tra queste, parecchie carte mostrano un ruolo rilevante e significativa espressione della proteina prionica cellulare PrP (C), sia in cellule staminali embrionali ed adulte13, 14. PrPC rappresenta una molecola pleiotropica capace di svolgere diverse funzioni all'interno delle cellule come metabolismo del rame, apoptosi, e resistenza a ossidativo stress15,16,17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22.

Nel nostro precedente carta23, abbiamo studiato il ruolo della PrPC nel processo di differenziazione di un neurone di hDPSCs. Infatti, hDPSCs express precocemente PrPC e, dopo il differenziamento neuronale, è stato possibile osservare un aumento supplementare. Altri autori hanno supposto un ruolo possibile di PrPC nei processi di differenziamento delle cellule staminali. Infatti, PrPC spinge la differenziazione delle cellule staminali embrionali umane in neuroni, oligodendrociti e astrociti24. Lo scopo di questo studio era quello di sottolineare la metodologia per ottenere cellule staminali da polpa dentaria, il processo di differenziazione e il ruolo di PrPC durante il differenziamento neuronale.

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Protocollo

Terzi molari utilizzati nello studio sono stati asportati dai pazienti (13-19 anni) con senza precedenti di droga o alcol, tutte per non fumatori e con una adeguata igiene orale. Il giorno della spiegazione, presso il dipartimento di scienza odontoiatria e maxillo-facciale dell'Università "Sapienza" di Roma, il consenso informato è stato ottenuto da pazienti o i genitori. Il consenso informato è stato ottenuto basato su considerazioni etiche e approvazione del comitato etico.

1. dente ed estrazione della polpa dentale

  1. Preparazione del mezzo appropriato per la conservazione o il trasporto.
    1. Preparare medio bassa concentrazione per volta dell'Aquila di Dulbecco di glucosio (DMEM-L) con L-Glutammina (494,5 mL).
    2. Aggiungere 5 mL di penicillina/streptomicina (1%) e 0,5 mL di amfotericina (0,1%).
  2. Estrarre il terzo molare dal paziente, rapidamente sciacquare con PBS, messo in una provetta da 15 mL con il mezzo e trasferirlo al laboratorio in meno di 2 ore.
  3. Sotto una cappa biohazard, aprire il dente con una fresa di passata di taglio coronale parallelo e tangente attraverso il tetto della camera pulpare.
  4. Rimuovere la polpa con un piccolo escavatore delicatamente e metterlo in una provetta.
  5. Lavare le tre volte con PBS e centrifugare a 2.500 x g per 10 minuti a TA.

2. trattamento della polpa dentale e rilascio di cellule staminali

  1. Eliminare il surnatante, risospendere il pellet in soluzione di Hank e metterlo in una capsula di Petri. Incubare per 2 ore a 37 ° C in 5% CO2.
  2. Digitare preparazione soluzione della collagenosi di IV.
    1. Preparare 0,8 mL di DMEM-L.
    2. Sciogliere 1 mg di collagenosi di IV tipo in 0,8 mL di DMEM-L e vortexare per diversi minuti.
    3. Aggiungere DMEM-L fino a 1 mL per avere una concentrazione finale di 1 mg/mL.
    4. Filtrare la soluzione con un filtro da 0,22 µM.
  3. Rimuovere la soluzione di Hank mediante centrifugazione a 2.500 x g per 10 min a RT e dividere la polpa in fettine di circa 1 mm ciascuno con un bisturi monouso.
  4. Mettere le fettine di polpa in una capsula di Petri e incubare con 1 mL di collagenasi di tipo IV per 15 min a 37 ° C in 5% CO2.
  5. Preparazione di coltura media (500 mL).
    1. A 445 mL di DMEM-L con L-glutammina.
    2. Aggiungere 50 mL di siero bovino fetale (FBS) (10%).
    3. Aggiungere 5 mL di penicillina/streptomicina (1%).
  6. Centrifugare il campione a 2.500 x g per 10 min a RT, rimuovere il supernatante e risospendere il pellet in mezzo (punto 2.5) e cultura nella beuta T25 specifico di cellule staminali a 37 ° C in 5% CO2.

3. propagazione e coltura della cellula formativa di

  1. Ogni giorno controllare la cultura e, dopo 3 giorni di crescita, osservare diversi cloni di cellule aderenti all'interno della beuta.
  2. Ogni 3 giorni cambiare il terreno di coltura.
  3. Tra 7 e 12 giorni, una volta che le celle aderenti hanno portata confluenza, staccarli trattando le cellule con 1 mL di tripsina-EDTA per 3 min a 37 ° C o delicatamente utilizzando un raschietto di cella.
  4. Aggiungere 4 ml (rapporto 1:5) nel terreno di coltura (punto 2.5) per interrompere l'azione della tripsina.
  5. Centrifugare la sospensione cellulare per 6 min a 259 x g, rimuovere il supernatante e inserire le celle in una boccetta di T25 di propagare.
    Nota: Ogni 3 giorni le cellule raggiungono la confluenza.
  6. Propagare le cellule fino a 21 o 28 giorni (circa 6-8 passaggi) per evitare la presenza di non-staminali come le cellule nella cultura.
  7. Staccare le cellule con 1 mL di tripsina-EDTA per 3 min a 37 ° C o raschiare delicatamente. Centrifugare la sospensione cellulare per 6 min a 259 x g.
  8. Rimuovere il supernatante e testare le cellule per analisi citofluorimetrica (passaggio 6).

4. transitoria PrPC tacitazione di siRNA

  1. Coltura del hDPSCsin 6 pozzetti (2 x 105 cellule/mL) con 2 mL di terreno di coltura (punto 2.5) per 24 h.
  2. Il giorno dopo, preparare siRNA PrP medie (400 µ l).
    1. In una provetta sterile, µ l 384 DMEM-L.
    2. Aggiungere 1 µ l per ogni tipo di siRNA PrP in DMEM-L per avere una concentrazione finale di 5 nM (4 siRNA PrP sono stati utilizzati e verificati dal fornitore per garantire un atterramento efficienza ≥ 70%).
    3. Aggiungere 12 µ l di transfectionreagent in DMEM-L.
    4. Vortice la miscela e incubare per 10 min a RT per consentire la formazione di complessi di transfezione.
  3. Aggiungere 400 μL di siRNA PrP medio per ogni campione e incubare per 6 h a 37 ° C.
  4. Senza scartare siRNA PrP medio, aggiungere 1,6 mL (rapporto di 1 a 5) di terreno di coltura (punto 2.5).
  5. Lasciare le cellule per 72 h a 37 ° C.
  6. Eliminare il surnatante e lavare 3 volte con 2 mL di PBS a TA.
  7. Aggiungere 2 mL di terreno di coltura neuronale per 7 o 14 giorni (punto 5.1).
  8. Cambiare il terreno di coltura neuronale ogni 3 giorni.
    Nota: Sostituire il siRNA PrP soluzione sostituire ogni volta il terreno di coltura neuronale.
  9. Alla fine del tempo, lavare 3 volte con 2 mL di PBS a RT e test per gli antigeni di superficie neuronali mediante analisi Western Blot.

5. un neurone processo di induzione di hDPSCs

  1. Preparazione del terreno di coltura neuronale (500 mL).
    1. Preparare 444,7 mL di media basale formulato di cellule neuronali.
    2. Sul supporto di aggiungere 50 mL di supplemento privo di siero utilizzato per sostenere la redditività a lungo termine delle cellule staminali embrionali ed adulte neuronale (10%).
    3. Aggiungere 200 µ l di basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) (concentrazione finale 40 ng/mL) e 100 µ l di fattore di crescita epidermico (EGF) al mezzo (concentrazione finale 20 ng/mL).
    4. Aggiungere 5 mL di penicillina/streptomicina (1%) al mezzo.
  2. Cultura hDPSCs in piastre da 6 pozzetti (2 x 105 cellule/mL) fino a 28 giorni dalla separazione della polpa e stimolarli con 2 mL di terreno di coltura neuronale.
  3. Ogni 3 giorni scartare il surnatante, lavare 3 volte con 2 mL di PBS a RT e sostituire 2 mL di terreno di coltura neuronale.
  4. Dopo 7 o 14 giorni, staccare le cellule con 1 mL di tripsina-EDTA per 3 min a 37 ° C o delicatamente con un raschietto.
  5. Aggiungere 4 mL (rapporto 1:5) del terreno di coltura (punto 2.5) per interrompere l'azione della tripsina.
  6. Verificare la presenza di antigeni di superficie neuronali (passaggio 6) o l'espressione della proteina prionica (passaggio 7) analisi di citometria a flusso.

6. caratterizzazione di hDPSCs tramite flusso Cytometry

  1. Selezionare stromali mesenchimali (MSC)-neuronali o specifici antigeni di superficie.
  2. Cultura hDPSCs in piastre da 6 pozzetti (2 x 105 cellule/mL) con 2 mL di terreno di coltura (punto 2.5).
  3. Staccare hDPSCs a 28 giorni dalla separazione della polpa dentale o dopo 14 giorni di un neurone di coltura (passaggio 5.1) con 1 mL di tripsina-EDTA per 3 min a 37 ° C o delicatamente un raschietto.
  4. aggiungere 4 ml (rapporto 1:5) del terreno di coltura (punto 2.5) per interrompere l'azione della tripsina e centrifugato a 259 x g per 6 minuti a TA. altro lavare 2 volte con 2 mL di PBS a TA.
  5. Difficoltà il hDPSCs non trattata o trattata con paraformaldeide al 4% in PBS per 10 min a 4 ° C.
  6. Permeabilize hDPSCS con tensioattivi non ionici 0.1% (v/v) in PBS per altri 10 min a TA.
  7. Eseguire il blocco con 5% latte scremato in polvere in 1 mL di PBS per 1 h a TA.
  8. Lavare 3 volte con 1 mL di PBS e incubare le cellule con anti-CD105 (1: 100 / 5 x 105 cellule), anti-CD44 (1: 100 / 5 x 105 cellule), anti-STRO-1 (1: 100 / 5 x 105 cellule), anti-CD90 (1: 100 / 5 x 105 cellule), anti-CD73 (1: 100 / 5 x 105 cellule), anti β3-tubulina (1: 100 / 5 x 105 cellule), anti-NFH (1: 100 / 5 x 105 cellule) e anti-GAP43 (1: 100 / 5 x 105 cellule) mAb per 1 h a TA.
  9. Lavare le cellule 3 volte con 1 mL di PBS e incubare con PE anti-topo (01:50 / 5 x 105 cellule) o anti-coniglio CY5 mAb (01:50 / 5 x 105 celle) per ulteriore 1 h a TA.
  10. Utilizzare gli anticorpi secondari per gating le cellule immunopositive (anti-topo PE o anti-coniglio CY5 mAb) e analizzare tutti i campioni con un citometro a flusso e acquisire almeno 20.000 eventi.

7. valutazione dell'espressione di PrPC in hDPSCs di analisi di citometria a flusso

  1. Cultura la hDPSCsin 6 pozzetti (2 x 105 cellule/mL) con 2 mL di terreno di coltura (punto 2.5).
  2. Staccare hDPSCs alle 21 e 28 giorni dalla separazione della polpa dentale e dopo 7 o 14 giorni con terreno di coltura neuronale (azione 5.1) con 1 mL di tripsina-EDTA e fermare l'azione di tripsina, come descritto al punto 6.4. Difficoltà gli esemplari con paraformaldeide al 4% in PBS per 10 min a 4 ° C.
  3. Permeabilize con 0.1% (v/v) non ionici surfactantin PBS per 10 min a RT. rimuovere il surnatante e macchia le celle con coniglio anti-PrP mAb EP1802Y (01:50 / 5 x 105 celle) mAb per 1h a RT. Incubare con anti-coniglio CY5 (01:50 / 5 x 105 celle) mAb per ulteriore 1 h a TA.
  4. Analizzare tutti i campioni con un citometro a flusso e acquisire almeno 20.000 eventi.

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Risultati

Le procedure di isolamento e la separazione di hDPSCs da polpa dentaria, ottenuta dal terzo molare, sono processi complessi, in cui piccoli cambiamenti possono portare un risultato rovinoso. In questa carta, utilizziamo il protocollo di Arthur et al.. 12 con molti nuovi miglioramenti. Uno schema rappresentativo delle procedure è illustrato nella Figura 1.

hDPSCs rap...

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Discussione

In questo lavoro, ci siamo concentrati sulla metodologia per l'isolamento e la differenziazione di un neurone di hDPSCs; Inoltre, abbiamo valutato il ruolo di PrPC in questo processo. Esistono diversi metodi per isolare e differenziare hDPSCs nel neurone-come le cellule e passaggi critici durante il processo. hDPSCs sono in grado di differenziare in diversi lignaggi quali condroblasti, adipociti, osteoblasti e neuroni. Nella nostra carta, abbiamo studiato i meccanismi di differenziamento neuronale e la presenz...

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Divulgazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Riconoscimenti

Questo lavoro è stato supportato da "Fondazione Varrone" e Hub di Università di Rieti "Sabina Universitas" a Vincenzo Mattei.

Figura 5 (A, B) ristampato con il permesso dell'editore Taylor & Francis Ltd da: complesso multimolecolare di ruolo del Prion protein-EGFR durante il differenziamento neuronale della polpa dentale umane cellule staminali. Martellucci, S., Manganelli V., C. Santacroce, F. Santilli, L. Piccoli, M. Sorice, V. Mattei Prion. 2018 Mar 4. Taylor & Francis Ltd.

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Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
Amphotericin B solutionSigma-AldrichA2942It is use to supplement cell culture media, it is a polyene antifungal antibiotic from Streptomyce
Anti-B3tubulinCell Signaling Technology #4466One of six B-tubulin isoform, it is expressed highly during fetal and postnatal development, remaining high in the peripheral nervous system
Anti-CD105 BD Biosciences611314Endoglin (CD105), a major glycoprotein of human vascular endothelium, is a type I integral membrane protein with a large extracellular region, a hydrophobic transmembrane region, and a short cytoplasmic tail
Anti-CD44MilliporeCBL154-20ulPositive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
Anti-CD73 Cell Signaling Technology 13160CD73 is a 70 kDa glycosyl phosphatidylinositol-anchored, membrane-bound glycoprotein that catalyzes the hydrolysis of extracellular nucleoside monophosphates into bioactive nucleosides
Anti-CD90MilliporeCBL415-20ulPositive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
Anti-GAP43 Cell Signaling Technology #8945Is a nervous system specific, growth-associated protein in growth cones and areas of high plasticity
Anti-mouse PE Abcamab7003Is an antibody used in in flow cytometry or FACS analysis
Anti-NFH Cell Signaling Technology #2836Is an antibody that detects endogenous levels of total Neurofilament-H protein
Anti-PrP mAb EP1802Y Abcamab52604Rabbit monoclonal [EP 1802Y] to Prion protein PrP
Anti-rabbit CY5 Abcamab6564Is an antibody used in in flow cytometry or FACS analysis
Anti-STRO 1MilliporeMAB4315-20ulPositive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
B27 Supp XF CTSGibco by life technologiesA14867-01B-27  can be used to support induction of human neural stem cells (hNSCs) from pluripotent stem cells (PSCs), expansion of hNSCs, differentiation of hNSCs, and maintenance of mature differentiated neurons in culture
BD Accuri C6 flow cytometer BD BiosciencesAC6531180187Flow cytometer equipped with a blue laser (488 nm) and a red laser (640 nm)
BD Accuri C6 Software BD BiosciencesControls the BD Accuri C6 flow cytometer system in order to acquire data, generate statistics, and analyze results
bFGFPeproThec, DBA100-18Bbasic Fibroblast Growth Factor 
Centrifuge CL30RTermo fisher Scientific11210908it is a device that is used for the separation of fluids,gas or liquid, based on density
CO2 Incubator 3541Termo fisher Scientific317527-185it ensures optimal and reproducible growth conditions for cell cultures
Collagenase, type IV Life Technologies17104019Collagenase is a protease that cleaves the bond between a neutral amino acid (X) and glycine in the sequence Pro-X-Glyc-Pro, which is found with high frequency in collagen
Disposable scalpel Swann-Morton501It is use to cut tissues
DMEM-LEurocloneECM0060LDulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose with L-Glutamine with Sodium Pyruvate
EGFPeproThec, DBAAF-100-15Epidermal Growth Factor 
Fetal Bovine SerumGibco by life technologies10270-106FBS is a popular media supplement because it provides a wide array of functions in cell culture. FBS delivers nutrients, growth and attachment factors and protects cells from oxidative damage and apoptosis by mechanisms that are difficult to reproduce in serum-free media (SFM) systems
Filtropur BT50 0.2,500 mL Bottle top filterSarstedt831,823,101it is a device that is used for filtration of solutions
Flexitube GeneSolution for PRNPQiagenGS56214 siRNAs for Entrez gene 5621. Target sequence N.1 TAGAGATTTCATAGCTATTTA  N.2 CAGCAAATAACCATTGGTTAA  N.3. CTGAATCGTTTCATGTAAGAA  N.4  CAGTGACTATGAGGACCGTTA
Hank's solution 1xGibco by life technologies240200083The essential function of Hanks′ Balanced Salt solution is to maintain pH as well as osmotic balance. It also provides water and essential inorganic ions to cells
HiPerFect Transfection Reagent Qiagen301705HiPerFect Transfection Reagent is a unique blend of cationic and neutral lipids that enables effective siRNA uptake and efficient release of siRNA inside cells, resulting in high gene knockdown even when using low siRNA concentrations
Neurobasal A Gibco by life technologies10888022Neurobasal-A Medium is a basal medium designed for long-term maintenance and maturation of pure post-natal and adult brain neurons 
ParaformaldehydeSigma-Aldrich30525-89-4Paraformaldehyde has been used for fixing of cells and tissue sections during staining procedures
penicillin/streptomycin EurocloneECB3001D It is use to supplement cell culture media to control bacterial contamination
Phosphate buffered saline  (PBS)EurocloneECB4004LX10 PBS is a balanced salt solution used for the handling and culturing of mammalian cells. PBS is used to to irrigate, wash, and dilute mammalian cells. Phosphate buffering maintains the pH in the physiological range
TC-Platte 6 well, Cell+,FSarstedt833,920,300It is a growth surface for adherent cells
Tissue culture flask T-25,Cell+,Vented CapSarstedt833,910,302Tissue culture flask T-25, polystyrene, Cell+ growth surface for sensitive adherent cells, e.g. primary cells, canted neck, ventilation cap, yellow, sterile, Pyrogen-free, non-cytotoxic, 10 pcs./bag
Triton X-100 Sigma-Aldrich9002-93-1Widely used non-ionic surfactant for recovery of membrane components under mild non-denaturing conditions
Trypsin-EDTA EurocloneECB3052D Trypsin will cleave peptides on the C-terminal side of lysine and arginine amino acid residues. Trypsin is used to remove adherent cells from a culture surface
TubeSarstedt62,554,502Tube 15 mL, 120 mm x17 mm, PP
VBH 36 C2 CompactSterilST-003009000Offers totally protection for the enviroment and worker
ZEISS Axio Vert.A1 – Inverted MicroscopeZeiss3849000962ZEISS Axio Vert.A1 provides a unique entry level price and can provide all contrasting techniques, including brightfield, phase contrast, PlasDIC, VAREL, improved Hoffman Modulation Contrast (iHMC), DIC and fluorescence. Incorporate LED illumination for gentle imaging for fluorescently-labeled cells. Axio Vert.A1 is ergonomically designed for routine work and compact enough to sit inside tissue culture hoods.

Riferimenti

  1. Robey, P. G., Kuznetsov, S. A., Riminucci, M., Bianco, P. Bone marrow stromal cell assays: in vitro and in vivo. Methods in Molecular Biology. 1130, 279-293 (2014).
  2. Jiang, Y., et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature. 418, 1-49 (2002).
  3. Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells. 24, 1294-1301 (2006).
  4. Zannettino, A. C. W., et al. Multi-potential Human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo. Journal of Cellular Physiology. 214, 413-421 (2008).
  5. Mattei, V., et al. Role of lipid rafts in neuronal differentiation of dental pulp-derived stem cells. Experimental Cell Research. 339, 231-240 (2015).
  6. Jansen, J., Hanks, S., Thompson, J. M., Dugan, M. J., Akard, L. P. Transplantation of hematopoietic stem cells from the peripheral blood. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 9 (1), 37-50 (2005).
  7. Young, F. I., et al. Clonal heterogeneity in the neuronal and glial differentiation of dental pulp stem/progenitor cells. Stem Cells International. 2016, 1290561(2016).
  8. Pisciotta, A., et al. Human dental pulp stem cells (hDPSCs): isolation, enrichment and comparative differentiation of two sub-populations. BMC Developmental Biology. 15, 14(2015).
  9. Atari, M., et al. Dental pulp of the third molar: a new source of pluripotent-like stem cells. Journal of Cell Science. 125, 3343-3356 (2012).
  10. Koyama, N., Okubo, Y., Nakao, K., Bessho, K. Evaluation of pluripotency in human dental pulp cells. Journal of oral and maxillofacial surgery: official journal of the American Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 67, 501-506 (2009).
  11. Gronthos, S., et al. Stem cell properties of human dental pulp stem cells. Journal of Dental Research. 81, 531-535 (2002).
  12. Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues. Stem Cells. 7, 1787-1795 (2008).
  13. Lee, Y. J., Baskakov, I. V. The cellular form of the prion protein is involved in controlling cell cycle dynamics, self-renewal, and the fate of human embryonic stem cell differentiation. Journal of Neurochemistry. 124, 310-322 (2013).
  14. Steele, A. D., Emsley, J. G., Ozdinler, P. H., Lindquist, S., Macklis, J. D. Prion protein (PrPc) positively regulates neural precursor proliferation during developmental and adult mammalian neurogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 3416-3421 (2006).
  15. Wulf, M. A., Senatore, A., Aguzzi, A. The biological function of the cellular prion protein: an update. BMC Biology. 15, 34(2017).
  16. Mattei, V., et al. Recruitment of cellular prion protein to mitochondrial raft-like microdomains contributes to apoptosis execution. Molecular Biology of the Cell. 22, 4842-4853 (2011).
  17. Linden, R. The Biological Function of the Prion Protein: A Cell Surface Scaffold of Signaling Modules. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 77(2017).
  18. Garofalo, T., et al. Role of mitochondrial raft-like microdomains in the regulation of cell apoptosis. Apoptosis. , 621-634 (2015).
  19. Watt, N. T., et al. Reactive oxygen species-mediated beta-cleavage of the prion protein in the cellular response to oxidative stress. The Journal of Biological Chemistry. 280, 35914-35921 (2005).
  20. Mattei, V., et al. Morphine Withdrawal Modifies Prion Protein Expression in Rat Hippocampus. PLoS One. 12, 0169571(2017).
  21. Hu, W., et al. Prion proteins: physiological functions and role in neurological disorders. Journal of the Neurological Sciences. 264, 1-8 (2008).
  22. Sorice, M., et al. Trafficking of PrPC to mitochondrial raft-like microdomains during cell apoptosis. Prion. 6, 354-358 (2012).
  23. Martellucci, S., et al. Role of Prion protein-EGFR multimolecular complex during neuronal differentiation of human dental pulp-derived stem cells. Prion. 12 (2), 117-126 (2018).
  24. Lee, Y. J., Baskokov, I. V. The cellular form of the prion protein guides the differentiation of human embryonic stem cell into neuron-, oligodendrocyte- and astrocyte-committed lineages. Prion. 8, 266-275 (2014).
  25. Huang, G. T., Sonoyama, W., Chen, J., Park, S. H. In vitro characterization of human dental pulp cells: various isolation methods and culturing environments. Cell and Tissue Research. 324, 225-236 (2006).
  26. Suchanek, J., et al. Dental pulp stem cells and their characterization. Biomedical papers of the Medical Faculty of the University Palacký. 153, Olomouc, Czechoslovakia. 31-35 (2009).
  27. Bressan, E., et al. Donor age-related biological properties of human dental pulp stem cells change in nanostructured scaffolds. PLoS One. 7 (11), 49146(2012).

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