JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada insan diş Pulp kök hücre izolasyon ve yayılması için bir protokol Nöronal Farklılaşma süreci sırasında prion protein ifade değerlendirmek için mevcut.

Özet

Embriyonik kök hücre manipülasyon ilgili Biyoetik sorunları tıbbi araştırma alanındaki gelişmeler engelliyordu. Bu nedenle, farklı dokuların yağ, göbek kordonu, kemik iliği ve kan gibi yetişkin kök hücre elde etmek çok önemlidir. Biyoetik konuları ile ilgili olarak elde etmek kolaydır çünkü olası kaynaklar arasında diş pulp özellikle ilginçtir. Nitekim, insan diş Pulp kök hücreleri (hDPSCs) erişkin kök hücreleri nöronal benzeri hücrelerde ayırt etmek güçlü bir türüdür ve sağlıklı hastalar (13-19 yaş) üçüncü molar elde edilebilir. Özellikle, diş hamuru bir ekskavatör ile kaldırıldı, küçük dilimler halinde kesip, IV collagenase ile tedavi ve bir şişeye kültürlü. Nöronal Farklılaşma ikna etmek için hDPSCs 2 hafta boyunca EGF/bFGF ile teşvik. Daha önce ayırt etme işlemi sırasında Protein hDPSCs (PrPC) hücresel prion içeriğini artış göstermiştir. Cytofluorimetric analiz artmış Nöronal Farklılaşma süreci sonrasında PrPC erken ifadesi gösterdi. PrPC ablasyon siRNA tarafından PrP Nöronal Farklılaşma EGF/bFGF tarafından indüklenen engelledi. Bu yazıda, biz gibi biz yalıtım, ayrılık ve vitro yetiştirme yöntemleri hDPSCs birkaç kolay yordamlar ile gelişmiş, daha verimli Hücre klonlar Mezenkimal kök hücrelerin (MSCs) elde edilen ve büyük ölçekli genişleme olduğunu göstermek gözlenmiştir. Biz de nasıl iletişim kuralında, ayrıntılı yöntemleri ile elde edilen hDPSCs, MSCs Nöronal Farklılaşma süreci ve sonraki hücresel ve moleküler eğitim için mükemmel bir deneysel model olduğunu göster.

Giriş

Mezenkimal kök hücrelerin kemik iliği, göbek kordon kanı, insan diş pulp, yağ dokusu ve kan1,2,3,4,5 de dahil olmak üzere birkaç dokulardan izole edilmiştir , 6. çeşitli yazarlar tarafından bildirildiği gibi hDPSCs plastik bağlılık, tipik bir fibroblast benzeri Morfoloji göster. Bunlar farklı klonlar ve proliferatif ve farklılaştırıcı kapasitesi7,8farklılıkları ile son derece heterojen bir nüfusu temsil etmektedir. hDPSCs hızlı Mezenkimal Kök hücre (yani CD44, CD90, CD73, CD105, STRO-1) için belirli işaretleri, onlar bazı hematopoetik işaretleri (örneğin CD14 ve CD19) negatif ve yeteneğine sahip tüp bebek multilineage farklılaşma9/, 10,11.

Birden çok yazar bu hücreler NGF, bFGF, EGF12belirli medya ve takviyeleri7,ile birlikte ek içeren farklı protokolleri kullanarak nöron benzeri hücrelerine ayırt etmek mümkün olduğunu göstermiştir. Ayrıca, birçok protein Nöronal Farklılaşma işlemi sırasında söz konusu ve bunlar arasında bir ilgili rolü ve önemli ifade hücresel prion protein (PrPC), embriyonik ve yetişkin kök hücreleri13, her ikisi de birkaç belgelerini göster 14. PrPC temsil eden bir pleiotropic molekül hücrelere farklı işlevler bakır metabolizması, Apoptozis, sahip ve direnç oksidatif stres15,16,17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22.

Bizim önceki kağıt23' te, biz PrPC hDPSCs Nöronal Farklılaşma sürecindeki rolü araştırdık. Aslında, hDPSCs tanımışlar PrPC hızlı ve Nöronal Farklılaşma sonra ek artış gözlemlemek mümkün. Diğer yazarlar PrPC kök hücrelerin Nöronal Farklılaşma süreçlerde olası bir rol olan. Nitekim, PrPC insan embriyonik kök hücre farklılaşma nöronlar, oligodendrocytes ve astrocytes24götürmek. Bu çalışmada kök hücre diş pulp, onun farklılaşma süreci ve PrPC rolünü Nöronal Farklılaşma sırasında elde etmek için metodoloji vurgulamak oldu.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Üçüncü büyük azı dişleri çalışmada kullanılan hastalarda (13-19 yaş arası) uyuşturucu ya da alkol tüketimi önceki öyküsü, tüm sigara ve uygun ağız hijyeni ile eksize. Açıklama, bilim diş hekimliği bölümü ve "Sapienza" Roma Üniversitesi, Maxillofacial gününde aydınlatılmış onam hastalar veya veliler elde edildi. Aydınlatılmış onam dayalı etik kaygılar ve Etik Kurulu onayı alındı.

1. diş ve diş Pulp çıkarma

  1. Koruma veya ulaşım için uygun ortamı hazırlanması.
    1. Dulbecco'nın modifiye kartal orta düşük konsantrasyon glikoz (DMEM-L) L-glutamin (494.5 mL) ile hazırlayın.
    2. 5 mL penisilin/streptomisin (% 1) ekleyin ve Amfoterisin (% 0,1) 0.5 mL.
  2. Üçüncü molar hasta--dan hulâsa, hızlı bir şekilde PBS ile durulayın, orta ile 15 mL tüp bebek koymak ve az 2 h laboratuvarda aktarmak.
  3. Biohazard başlık altında dişin koronal kesme pass paralel ve teğet hamuru oda tavana bir kesici ile açın.
  4. Yavaşça hamuru ile küçük bir ekskavatör çıkarın ve bir test tüpü yerleştirin.
  5. PBS ile üç kez yıkayın ve 2500 x g 10 dk RT. az için santrifüj kapasitesi

2. diş Pulp ve kök hücre yayın işleme

  1. Süpernatant çıkarın, pelet Hank'in çözümde resuspend ve bir Petri kabına yerleştirin. %5 CO237 ° C'de 2 h için kuluçkaya.
  2. IV collagenase eriyik hazırlığı yazın.
    1. DMEM-L. 0.8 mL hazırlamak
    2. Türü IV collagenase DMEM-L ve birkaç dakika için girdap 0.8 ml 1 mg eritebilir.
    3. DMEM-L eklemek son bir konsantrasyon olması 1 mL 1 mg/mL.
    4. Çözüm 0,22 µM filtre ile filtre.
  3. Hank'in çözüm Santrifüjü 2500 x g RT, 10 min için de kaldırmak ve hamuru küçük dilimler halinde approximatively 1 mm her biri tek kullanımlık bir neşter ile ayırın.
  4. Hamuru dilimleri bir petri kabına yerleştirin ve tip IV collagenase %5 CO237 ° C'de 15 dakika 1 mL ile kuluçkaya.
  5. Orta kültür hazırlama (500 mL).
    1. DMEM-l L-glutamin ile 445 mL için.
    2. 50 mL Fetal sığır Serum (FBS) (%10) ekleyin.
    3. 5 mL penisilin/streptomisin (% 1) ekleyin.
  6. 2500 x g RT, 10 dk da örneğine santrifüj kapasitesi, süpernatant kaldırmak, pelet orta (Adım 2,5) ve T25 şişesi kök hücre için belirli kültüründe % 5 CO237 ° C'de resuspend.

3. kök hücre kültür ve yayılma

  1. Her gün kültür denetleyin ve büyüme 3 gün sonra balonun içindeki yapışık hücreleri farklı klonlar gözlemlemek.
  2. 3 günde kültür orta değiştirin.
  3. Yapışık hücreleri ulaşmak izdiham sonra 7 ve 12 gün arasında onları tripsin-EDTA 3 dk. 37 ° c için 1 mL hücrelerle tedavi veya hafifçe bir hücre kazıyıcı kullanarak ayırabilirsiniz.
  4. 4 ml (oranı 1:5) kültür tripsin eylemi durdurmak için orta (Adım 2.5) ekleyin.
  5. Hücre süspansiyon için 259 x gde 6 dk santrifüj kapasitesi, süpernatant kaldırmak ve hücreleri yaymak için bir T25 şişeye koyun.
    Not: 3 günde hücreleri izdiham ulaşmak.
  6. Hücreleri olmayan kök hücreler kültür gibi varlığı önlemek için 21-28 gün (yaklaşık 6-8 pasajlar) kadar yaymak.
  7. Tripsin-EDTA 3 dk. 37 ° C veya hafifçe kazıma için 1 mL hücrelerle bağlantısını kesin. Hücre süspansiyon için 259 x gde 6 dk santrifüj kapasitesi.
  8. Süpernatant kaldırmak ve test hücreleri cytofluorimetric analizi (adım 6) için.

4. geçici PrPC Silencing siRNA tarafından

  1. Kültür orta (Adım 2.5) için 24 h 2 mL ile hDPSCsin 6-şey plaka (2 x 105 hücre/mL) kültür.
  2. Bir gün sonra siRNA PrP orta (400 µL) hazırlayın.
    1. Steril tüp bebek için 384 µL eklemek DMEM-L.
    2. DMEM-L için 5 son bir konsantrasyon olması siRNA PrP her türü için 1 µL eklemek nM (PrP kullanılan ve devirme verimlilik ≥70% güvence altına almak için tedarikçi tarafından doğrulanmadı 4 siRNA).
    3. Transfectionreagent 12 µL DMEM-L. için ekleyin
    4. Girdap karışımı ve RT transfection kompleksleri oluşumu izin vermek için 10 min için kuluçkaya.
  3. Her örnek için 400 μL siRNA PrP orta ekleyin ve 37 ° C'de 6 h için kuluçkaya
  4. SiRNA PrP orta atarak olmadan, 1.6 mL (1-5 oranında) kültür orta (Adım 2.5) ekleyin.
  5. 37 ° C'de 72 h için hücre bıraktığınızdan
  6. Süpernatant kaldırmak ve 3 kez PBS RT., 2 mL ile yıkayın
  7. Nöronal kültür orta 2 mL 7/veya 14 gün (Adım 5.1) ekleyin.
  8. Nöronal kültür orta 3 günde değiştirin.
    Not: SiRNA PrP çözüm her zaman değiştir nöronal kültür orta yerine.
  9. Zaman sonunda, 3 kez PBS RT, 2 mL ile yıkama ve nöronal yüzey antijenleri için Western Blot analizi ile test.

5. nöronal indüksiyon sürecinin hDPSCs

  1. Nöronal kültür orta hazırlık (500 mL).
    1. Bazal medya için nöronal hücre formüle 444.7 mL hazırlayın.
    2. Orta olarak embriyonik ve yetişkin nöron kök hücreleri (% 10) uzun vadeli canlılığı desteklemek için kullanılan serum ücretsiz ek 50 mL ekleyin.
    3. 200 µL temel Fibroblast büyüme faktörü (bFGF) (son konsantrasyonu 40 ng/mL) ve 100 µL Epidermal büyüme faktörü (EGF), orta (son konsantrasyonu 20 ng/mL) ekleyin.
    4. 5 mL penisilin/streptomisin (% 1) ekleyin Orta olarak.
  2. 6-şey plaka (2 x 105 hücre/mL) kültür hDPSCs için 28 gün hamuru ayrılması ve onları nöronal kültür orta 2 mL ile teşvik.
  3. 3 günde süpernatant atmak, 3 kez PBS RT, 2 mL ile yıkayın ve 2 mL nöronal kültür orta yerine.
  4. 7 ve/veya 14 gün sonra hücreleri tripsin-EDTA 3 dk. 37 ° c için 1 mL veya hafifçe bir kazıyıcı ile bağlantısını kesin.
  5. 4 mL (oranı 1:5) kültür tripsin eylemi durdurmak için orta (Adım 2.5) ekleyin.
  6. Nöronal yüzey antijenleri (adım 6) varlığı veya prion protein deyim (7. adım) için Akış Sitometresi Analizi ile test.

6. hDPSCs Akış Sitometresi tarafından karakterizasyonu

  1. Mezenkimal stromal (MSC) seçin-özel veya nöronal yüzey antijenleri.
  2. 6-şey plaka (2 x 105 hücre/mL) 2 mL kültür orta (Adım 2.5) ile hDPSCs kültür.
  3. HDPSCs, 28 gün diş pulp ayrılması veya 3 dk. 37 ° C veya hafifçe kazıyıcı için 1 mL tripsin-EDTA ile nöronal kültür ortamının (Adım 5.1) 14 gün sonra bağlantısını kesin.
  4. 4 ml (oranı 1:5) kültür tripsin eylemi durdurmak için orta (Adım 2.5) ekleyin ve centrifugate 259 x g 6 dk RT. az için yıkama başka bir PBS 2 mL ile 2 kez RT.
  5. Tedavi edilmemiş veya tedavi hDPSCs 4 ° C'de 10 dakika için PBS içinde %4 paraformaldehyde ile saptamak
  6. HDPSCS %0,1 (v/v) iyonik olmayan yüzey aktif PBS içinde RT., ek 10 dk ile permeabilize
  7. PBS 1 ml RT. 1 h için %5 yağsız kuru süt ile engelleme gerçekleştirmek
  8. Yıkama PBS ile 3 kez 1 mL ve anti-CD105 hücrelerle kuluçkaya (1: 100 / 5 x 105 hücreleri), anti-CD44 (1: 100 / 5 x 105 hücreleri), anti-STRO-1 (1: 100 / 5 x 105 hücreleri), anti-CD90 (1: 100 / 5 x 105 hücreleri), anti-CD73 (1: 100 / 5 x 105 hücreleri), β3-tübülin anti (1: 100 / 5 x 105 hücreleri), anti-NFH (1: 100 / 5 x 105 hücreleri) ve anti-GAP43 (1: 100 / 5 x 105 hücreleri) mAb RT. 1 h için
  9. 3 kez PBS 1 mL içeren hücreleri yıkama ve anti-fare PE (1:50 / 5 x 105 hücreleri) veya anti-tavşan CY5 ile kuluçkaya (1:50 / 5 x 105 hücreleri) mAb RT. ek 1 h için
  10. İkincil antikorlar (Anti-fare PE ya da anti-tavşan CY5 mAb) immunopositive hücreleri geçişi için kullanın ve bir Akış Sitometresi ile tüm örneklerini analiz ve en az 20.000 olaylar elde etmek.

7. hDPSCs Akış Sitometresi Analizi tarafından ifadede PrPC değerlendirilmesi

  1. Kültür orta (Adım 2.5) 2 mL ile hDPSCsin 6-şey plaka (2 x 105 hücre/mL) kültür.
  2. HDPSCs at 21 ve 28 gün diş pulp ayrılması ve nöronal kültür orta (Adım 5.1) ile 1 mL tripsin-EDTA ile 7 ve/veya 14 gün sonra bağlantısını kesin ve tripsin eylem 6.4 adımda anlatıldığı gibi durdurun. Numune 4 ° C'de 10 dakika için PBS içinde %4 paraformaldehyde ile saptamak
  3. %0,1 (v/v) non-iyonik surfactantin PBS 10 dakika dik kaldır at ile süpernatant permeabilize ve tavşan anti-PrP mAb EP1802Y hücrelerle (1:50 / 5 x 105 hücreleri) leke mAb Anti-tavşan CY5 ile dik Incubate (1:50 / 5 x 105 hücreleri), 1 h için mAb için RT ek 1 h
  4. Akış Sitometresi ile tüm örneklerini ve en az 20.000 olaylar elde etmek.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

HDPSCs gelen diş pulp, üçüncü molar elde edilen yalıtım ve ayrımı prosedürleri küçük değişiklikler yıkıcı bir sonuç açabilir karmaşık işlemlerdir. Bu yazıda, Arthur ve diğerleri. iletişim kuralı kullanın 12 birkaç yenilik. Yordamlar temsilcisi düzeninin şekil 1' de gösterilen.

hDPSCs hücreleri farklı klonlar ve proliferatif ve farkl?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bu çalışmada, yalıtım ve hDPSCs Nöronal Farklılaşma için metodoloji üzerinde duruldu; Ayrıca, PrPC bu süreçte rol değerlendirildi. Yalıtmak ve hDPSCs nöron benzeri hücreler ve kritik adımları işlemi sırasında ayırt etmek için birkaç yöntem vardır. hDPSCs chondroblasts, adipositler, dokusunu ve sinir hücreleri gibi birkaç soy ayırt edebiliyoruz. Bizim gazetede Nöronal Farklılaşma mekanizmaları ve PrPCvarlığı araştırıldı. Yukarıda da açıklandığı gibi bu h...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser "Fondazione Varrone" ve Rieti Üniversitesi Hub Vincenzo Mattei için "Sabina Universitas" tarafından desteklendi.

Şekil 5 (A, B) Taylor & Francis Ltd yayımcı izni ile yayımlanmaktadır: rol Prion protein-EGFR multimolecular karmaşık insan diş hamuru elde edilen kök hücreleri Nöronal Farklılaşma sırasında. Martellucci, S., Manganelli V., Santacroce C., Santilli F., Piccoli L., Sorice M., Mattei V. deli dana. 2018 4 Mart. Taylor & Francis Ltd.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Amphotericin B solutionSigma-AldrichA2942It is use to supplement cell culture media, it is a polyene antifungal antibiotic from Streptomyce
Anti-B3tubulinCell Signaling Technology #4466One of six B-tubulin isoform, it is expressed highly during fetal and postnatal development, remaining high in the peripheral nervous system
Anti-CD105 BD Biosciences611314Endoglin (CD105), a major glycoprotein of human vascular endothelium, is a type I integral membrane protein with a large extracellular region, a hydrophobic transmembrane region, and a short cytoplasmic tail
Anti-CD44MilliporeCBL154-20ulPositive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
Anti-CD73 Cell Signaling Technology 13160CD73 is a 70 kDa glycosyl phosphatidylinositol-anchored, membrane-bound glycoprotein that catalyzes the hydrolysis of extracellular nucleoside monophosphates into bioactive nucleosides
Anti-CD90MilliporeCBL415-20ulPositive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
Anti-GAP43 Cell Signaling Technology #8945Is a nervous system specific, growth-associated protein in growth cones and areas of high plasticity
Anti-mouse PE Abcamab7003Is an antibody used in in flow cytometry or FACS analysis
Anti-NFH Cell Signaling Technology #2836Is an antibody that detects endogenous levels of total Neurofilament-H protein
Anti-PrP mAb EP1802Y Abcamab52604Rabbit monoclonal [EP 1802Y] to Prion protein PrP
Anti-rabbit CY5 Abcamab6564Is an antibody used in in flow cytometry or FACS analysis
Anti-STRO 1MilliporeMAB4315-20ulPositive cell markers antibodies directed against mesenchymal stem cells
B27 Supp XF CTSGibco by life technologiesA14867-01B-27  can be used to support induction of human neural stem cells (hNSCs) from pluripotent stem cells (PSCs), expansion of hNSCs, differentiation of hNSCs, and maintenance of mature differentiated neurons in culture
BD Accuri C6 flow cytometer BD BiosciencesAC6531180187Flow cytometer equipped with a blue laser (488 nm) and a red laser (640 nm)
BD Accuri C6 Software BD BiosciencesControls the BD Accuri C6 flow cytometer system in order to acquire data, generate statistics, and analyze results
bFGFPeproThec, DBA100-18Bbasic Fibroblast Growth Factor 
Centrifuge CL30RTermo fisher Scientific11210908it is a device that is used for the separation of fluids,gas or liquid, based on density
CO2 Incubator 3541Termo fisher Scientific317527-185it ensures optimal and reproducible growth conditions for cell cultures
Collagenase, type IV Life Technologies17104019Collagenase is a protease that cleaves the bond between a neutral amino acid (X) and glycine in the sequence Pro-X-Glyc-Pro, which is found with high frequency in collagen
Disposable scalpel Swann-Morton501It is use to cut tissues
DMEM-LEurocloneECM0060LDulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose with L-Glutamine with Sodium Pyruvate
EGFPeproThec, DBAAF-100-15Epidermal Growth Factor 
Fetal Bovine SerumGibco by life technologies10270-106FBS is a popular media supplement because it provides a wide array of functions in cell culture. FBS delivers nutrients, growth and attachment factors and protects cells from oxidative damage and apoptosis by mechanisms that are difficult to reproduce in serum-free media (SFM) systems
Filtropur BT50 0.2,500 mL Bottle top filterSarstedt831,823,101it is a device that is used for filtration of solutions
Flexitube GeneSolution for PRNPQiagenGS56214 siRNAs for Entrez gene 5621. Target sequence N.1 TAGAGATTTCATAGCTATTTA  N.2 CAGCAAATAACCATTGGTTAA  N.3. CTGAATCGTTTCATGTAAGAA  N.4  CAGTGACTATGAGGACCGTTA
Hank's solution 1xGibco by life technologies240200083The essential function of Hanks′ Balanced Salt solution is to maintain pH as well as osmotic balance. It also provides water and essential inorganic ions to cells
HiPerFect Transfection Reagent Qiagen301705HiPerFect Transfection Reagent is a unique blend of cationic and neutral lipids that enables effective siRNA uptake and efficient release of siRNA inside cells, resulting in high gene knockdown even when using low siRNA concentrations
Neurobasal A Gibco by life technologies10888022Neurobasal-A Medium is a basal medium designed for long-term maintenance and maturation of pure post-natal and adult brain neurons 
ParaformaldehydeSigma-Aldrich30525-89-4Paraformaldehyde has been used for fixing of cells and tissue sections during staining procedures
penicillin/streptomycin EurocloneECB3001D It is use to supplement cell culture media to control bacterial contamination
Phosphate buffered saline  (PBS)EurocloneECB4004LX10 PBS is a balanced salt solution used for the handling and culturing of mammalian cells. PBS is used to to irrigate, wash, and dilute mammalian cells. Phosphate buffering maintains the pH in the physiological range
TC-Platte 6 well, Cell+,FSarstedt833,920,300It is a growth surface for adherent cells
Tissue culture flask T-25,Cell+,Vented CapSarstedt833,910,302Tissue culture flask T-25, polystyrene, Cell+ growth surface for sensitive adherent cells, e.g. primary cells, canted neck, ventilation cap, yellow, sterile, Pyrogen-free, non-cytotoxic, 10 pcs./bag
Triton X-100 Sigma-Aldrich9002-93-1Widely used non-ionic surfactant for recovery of membrane components under mild non-denaturing conditions
Trypsin-EDTA EurocloneECB3052D Trypsin will cleave peptides on the C-terminal side of lysine and arginine amino acid residues. Trypsin is used to remove adherent cells from a culture surface
TubeSarstedt62,554,502Tube 15 mL, 120 mm x17 mm, PP
VBH 36 C2 CompactSterilST-003009000Offers totally protection for the enviroment and worker
ZEISS Axio Vert.A1 – Inverted MicroscopeZeiss3849000962ZEISS Axio Vert.A1 provides a unique entry level price and can provide all contrasting techniques, including brightfield, phase contrast, PlasDIC, VAREL, improved Hoffman Modulation Contrast (iHMC), DIC and fluorescence. Incorporate LED illumination for gentle imaging for fluorescently-labeled cells. Axio Vert.A1 is ergonomically designed for routine work and compact enough to sit inside tissue culture hoods.

Referanslar

  1. Robey, P. G., Kuznetsov, S. A., Riminucci, M., Bianco, P. Bone marrow stromal cell assays: in vitro and in vivo. Methods in Molecular Biology. 1130, 279-293 (2014).
  2. Jiang, Y., et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature. 418, 1-49 (2002).
  3. Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells. 24, 1294-1301 (2006).
  4. Zannettino, A. C. W., et al. Multi-potential Human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo. Journal of Cellular Physiology. 214, 413-421 (2008).
  5. Mattei, V., et al. Role of lipid rafts in neuronal differentiation of dental pulp-derived stem cells. Experimental Cell Research. 339, 231-240 (2015).
  6. Jansen, J., Hanks, S., Thompson, J. M., Dugan, M. J., Akard, L. P. Transplantation of hematopoietic stem cells from the peripheral blood. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 9 (1), 37-50 (2005).
  7. Young, F. I., et al. Clonal heterogeneity in the neuronal and glial differentiation of dental pulp stem/progenitor cells. Stem Cells International. 2016, 1290561(2016).
  8. Pisciotta, A., et al. Human dental pulp stem cells (hDPSCs): isolation, enrichment and comparative differentiation of two sub-populations. BMC Developmental Biology. 15, 14(2015).
  9. Atari, M., et al. Dental pulp of the third molar: a new source of pluripotent-like stem cells. Journal of Cell Science. 125, 3343-3356 (2012).
  10. Koyama, N., Okubo, Y., Nakao, K., Bessho, K. Evaluation of pluripotency in human dental pulp cells. Journal of oral and maxillofacial surgery: official journal of the American Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 67, 501-506 (2009).
  11. Gronthos, S., et al. Stem cell properties of human dental pulp stem cells. Journal of Dental Research. 81, 531-535 (2002).
  12. Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues. Stem Cells. 7, 1787-1795 (2008).
  13. Lee, Y. J., Baskakov, I. V. The cellular form of the prion protein is involved in controlling cell cycle dynamics, self-renewal, and the fate of human embryonic stem cell differentiation. Journal of Neurochemistry. 124, 310-322 (2013).
  14. Steele, A. D., Emsley, J. G., Ozdinler, P. H., Lindquist, S., Macklis, J. D. Prion protein (PrPc) positively regulates neural precursor proliferation during developmental and adult mammalian neurogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 3416-3421 (2006).
  15. Wulf, M. A., Senatore, A., Aguzzi, A. The biological function of the cellular prion protein: an update. BMC Biology. 15, 34(2017).
  16. Mattei, V., et al. Recruitment of cellular prion protein to mitochondrial raft-like microdomains contributes to apoptosis execution. Molecular Biology of the Cell. 22, 4842-4853 (2011).
  17. Linden, R. The Biological Function of the Prion Protein: A Cell Surface Scaffold of Signaling Modules. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 77(2017).
  18. Garofalo, T., et al. Role of mitochondrial raft-like microdomains in the regulation of cell apoptosis. Apoptosis. , 621-634 (2015).
  19. Watt, N. T., et al. Reactive oxygen species-mediated beta-cleavage of the prion protein in the cellular response to oxidative stress. The Journal of Biological Chemistry. 280, 35914-35921 (2005).
  20. Mattei, V., et al. Morphine Withdrawal Modifies Prion Protein Expression in Rat Hippocampus. PLoS One. 12, 0169571(2017).
  21. Hu, W., et al. Prion proteins: physiological functions and role in neurological disorders. Journal of the Neurological Sciences. 264, 1-8 (2008).
  22. Sorice, M., et al. Trafficking of PrPC to mitochondrial raft-like microdomains during cell apoptosis. Prion. 6, 354-358 (2012).
  23. Martellucci, S., et al. Role of Prion protein-EGFR multimolecular complex during neuronal differentiation of human dental pulp-derived stem cells. Prion. 12 (2), 117-126 (2018).
  24. Lee, Y. J., Baskokov, I. V. The cellular form of the prion protein guides the differentiation of human embryonic stem cell into neuron-, oligodendrocyte- and astrocyte-committed lineages. Prion. 8, 266-275 (2014).
  25. Huang, G. T., Sonoyama, W., Chen, J., Park, S. H. In vitro characterization of human dental pulp cells: various isolation methods and culturing environments. Cell and Tissue Research. 324, 225-236 (2006).
  26. Suchanek, J., et al. Dental pulp stem cells and their characterization. Biomedical papers of the Medical Faculty of the University Palacký. 153, Olomouc, Czechoslovakia. 31-35 (2009).
  27. Bressan, E., et al. Donor age-related biological properties of human dental pulp stem cells change in nanostructured scaffolds. PLoS One. 7 (11), 49146(2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Geli im biyolojisisay 145di pulperi kin k k h creleriMezenkimal K k h crefarkl la ma s reciprion proteinPrionlar

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır