JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يوضح هذا البروتوكول أن الأكسجين عالي الضغط يمكن أن يعزز تثبيط التكاثر وموت الخلايا المبرمج لخلايا الورم الدبقي U251 المعالجة بالأشعة السينية عن طريق منع الخلايا في مرحلة G2 / M. هذا يحسن الحساسية الإشعاعية لخطوط خلايا الورم الدبقي البشري.

Abstract

كان الهدف من هذه الدراسة هو استكشاف استخدام الأكسجين عالي الضغط لتعزيز الحساسية الإشعاعية لخلايا الورم الدبقي البشري. تم تقسيم خلايا الورم الدبقي البشري U251 المزروعة بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات: مجموعة تحكم غير معالجة ، والخلايا المعالجة بالأكسجين عالي الضغط (HBO) فقط ، والخلايا المعالجة بالأشعة السينية (الأشعة السينية) فقط ، والخلايا المعالجة بكل من HBO والأشعة السينية. لوحظ مورفولوجيا الخلايا ونشاط تكاثر الخلايا وتوزيع دورة الخلية وموت الخلايا المبرمج في هذه المجموعات لتقييم دور HBO في تحسين الحساسية الإشعاعية لخلايا الورم الدبقي. مع الزيادة في جرعات الأشعة السينية (0 Gy ، 2 Gy ، 4 Gy ، 6 Gy ، 8 Gy) ، انخفض جزء البقاء على قيد الحياة (SF) لخلايا الورم الدبقي تدريجيا.

لوحظ انخفاض ملحوظ في SF للخلايا المعالجة ب HBO والأشعة السينية معا مقارنة بمجموعة الأشعة السينية لكل جرعة (كل P < 0.05). كان تثبيط الانتشار أعلى بشكل ملحوظ في HBO جنبا إلى جنب مع مجموعة الأشعة السينية مقارنة بمجموعة الأشعة السينية لكل جرعة (كل P < 0.05) لخط الخلايا U251. كانت النسبة المئوية لخلايا الطور G2 / M أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة HBO جنبا إلى جنب مع مجموعة الأشعة السينية (2 Gy) (26.70٪ ± 2.46٪) ومجموعة HBO (22.36٪ ± 0.91٪) مقارنة بالمجموعة الضابطة (11.56٪ ± 2.01٪) ومجموعة الأشعة السينية (2 Gy) (10.35٪ ± 2.69٪) (كل P < 0.05٪). كان موت الخلايا المبرمج لخلايا U251 أعلى بكثير في HBO جنبا إلى جنب مع مجموعة الأشعة السينية (2 Gy) مقارنة بمجموعة HBO ، ومجموعة الأشعة السينية (2 Gy) ، والمجموعة الضابطة (كل P < 0.05). نستنتج أن HBO يمكن أن يعزز تثبيط التكاثر وموت الخلايا المبرمج لخلايا الورم الدبقي U251 عن طريق منع خلايا الورم الدبقي في مرحلة G2 / M وتحسين الحساسية الإشعاعية لخلايا الورم الدبقي U251.

Introduction

الورم الدبقي هو ورم أساسي داخل الجمجمة ينشأ من الخلايا الدبقية في الجهاز العصبي المركزي1. استراتيجية العلاج الحالية للورم الدبقي هي الجراحة جنبا إلى جنب مع العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي. يمكن أن يوفر العلاج الإشعاعي بعد الجراحة للورم الدبقي فوائد البقاء على قيد الحياة (دليل الدرجة الأولى) ، ويمكن للعلاج الإشعاعي المبكر بعد الجراحة أن يطيل بقاء المريض على قيد الحياة بشكل فعال (دليل من الدرجة الثانية)2. بالنسبة للأورام الدبقية عالية الدرجة (الدرجة الثالثة أو الرابعة)، وخاصة الورم الأرومي الدبقي شديد الخبيث والغازي (أدلة الدرجة الثالثة)3، يجب إجراء العلاج الإشعاعي بعد الجراحة في أقرب وقت ممكن (<6 أسابيع). ومع ذلك ، على الرغم من التدخل المبكر ، لا يزال الورم الدبقي يعاني من معدل تكرار مرتفع وتشخيص ضعيف بعد العلاج الشامل. ترتبط هذه النتائج بشكل أساسي بانخفاض الحساسية الإشعاعية للورم الدبقي. تشمل العوامل المتعلقة بالحساسية الإشعاعية للورم الحساسية الإشعاعية المتأصلة في الخلايا السرطانية ، والخلايا السرطانية الناقصة أو غير الناقصة للأكسجين ، ونسبة الخلايا السرطانية الناقصة للأكسجين ، وقدرة الأنسجة المحيطة بالورم على إصلاح الضرر الإشعاعي4.

من بين هذه العوامل ، الخلايا السرطانية الناقصة أو غير الناقصة للأكسجين ونسبة الخلايا السرطانية الناقصة للأكسجين لها تأثيرات مهمة على الحساسية الإشعاعية للورم. يمكن للأكسجين عالي الضغط (HBO) تحسين تخزين الأكسجين في الأنسجة عن طريق زيادة توتر الأكسجين في الأنسجة وانتشار الأكسجين في الدم. قد تنتج HBO أيضا سلسلة من التأثيرات الكيميائية الحيوية والخلوية والفسيولوجيةالمفيدة 5. على سبيل المثال ، HBO له تأثير تعويضي ملحوظ على الضرر الإشعاعي الناجم عن العلاج الإشعاعي. على الرغم من أن HBO جنبا إلى جنب مع العلاج الإشعاعي أو العلاج الكيميائي يحسن الفعالية السريرية للعلاج الإشعاعي أو العلاج الكيميائي للورم الدبقي6 ، إلا أن هناك ججلا كبيرا حول كيفية تأثير HBO وحده على نمو الورم الدبقي الخبيث. أظهر كل من Ding et al.7 و Wang et al.8 أن HBO يعزز نمو الورم الدبقي في الموقع في الفئران عبر الآليات التي تنطوي على تثبيط موت الخلايا المبرمج وتعزيز تكوين الأوعية الدموية. في ظل الظروف الفسيولوجية ، تم الإبلاغ عن أن HBO يعزز تكوين الأوعية الدموية للورم عن طريق إحداث الإجهاد التأكسدي9.

ومع ذلك ، أشارت إحدى الدراسات إلى أن التعرض قصير المدى ل HBO يعزز تكاثر الخلايا السرطانية ، في حين أن التعرض المطول ل HBO يعزز موت الخلايا المبرمج ويمنع التكاثر10. لذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لاستكشاف ما إذا كان HBO يعزز أو يثبط نمو الورم الدبقي وكيف يمكن أن يؤدي HBO جنبا إلى جنب مع العلاج الإشعاعي أو العلاج الكيميائي إلى تحفيز الحساسية العلاجية. على وجه الخصوص ، هناك حاجة إلى تفاصيل ميكانيكية حول كيفية تحسين HBO للحساسية الإشعاعية للورم الدبقي. لاستكشاف كيفية تحسين HBO للحساسية الإشعاعية لخلايا الورم الدبقي U251 البشرية في هذه الدراسة ، استخدمنا HBO جنبا إلى جنب مع تشعيع الأشعة السينية على تكاثر خلايا الورم الدبقي ولاحظنا التأثيرات على توزيع دورة الخلية وموت الخلايا المبرمج.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تمت الموافقة على جميع طرق الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية ولجنة الأخلاقيات في المستشفى الثاني التابع لجامعة لانتشو وتم إجراؤها وفقا للإرشادات واللوائح ذات الصلة.

1. علاج خلايا الورم الدبقي

ملاحظة: تم استخدام خط خلايا الورم الدبقي U251 في هذه التجربة.

  1. زراعة الخلايا U251
    1. زرع خلايا U251 في أطباق متعددة مع DMEM يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) وزراعتها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
    2. عند الوصول إلى التقاء 50٪ -60٪ ، قم بفصل الخلايا باستخدام محلول التربسين-EDTA (0.25٪ ، بدون الفينول الأحمر) ثم اسمح لها بالنمو إلى 80٪ من التقاء.
  2. تشعيع الأشعة السينية
    1. قم بتغطية ألواح الثقافة أو القوارير بمعوض أنسجة مكافئ يصل سمكه إلى 1 سم. بعد ذلك ، قم بتعريض الخلايا لإشعاع الأشعة السينية الذي يتم توصيله من مسرع خطي 6 ميجافولت بمسافة خلية مصدر تبلغ 100 سم ، يتم ضبطها بالنقر فوق زر التدوير على لوحة التحكم عن بعد.
    2. اطلب من الفيزيائي قياس جرعة الإشعاع وتصحيح التوهين. كعنصر تحكم ، ضع قوارير تحتوي على وسائط في كاشف قبل تشعيع الأشعة السينية.
  3. الأكسجين عالي الضغط (HBO)
    1. قم بتطهير غرفة HBO عن طريق تشغيل الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة ثم إغراقها ب 0.02 ميجا باسكال من الأكسجين النقي لمدة 5 دقائق.
    2. بعد وضع الخلايا في ألواح أو قوارير مزرعة في الغرفة ، انقر فوق زر منظم الضغط على لوحة التحكم خارج الغرفة لزيادة ضغط HBO في الغرفة إلى 0.2 ميجا باسكال (2.0 ATA) في غضون 30 دقيقة من التشعيع.
    3. بعد ثلاثين دقيقة ، انقر فوق زر منظم الضغط لتقليل ضغط HBO إلى مستوى الضغط السابق (0.1 ميجا باسكال). بعد ذلك ، عالج زجاجات أو أطباق الاستزراع باستخدام HBO 1x يوميا لمدة 3 أيام متتالية.

2. خلايا الورم الدبقي U251 في مجموعات مختلفة

  1. قم بتعيين مجموعة تحكم ، ومجموعة الأشعة السينية (2 Gy) ، و HBO جنبا إلى جنب مع مجموعة الأشعة السينية (2 Gy) لحساب منحنيات نمو الخلية.
  2. قم بإعداد معلقات أحادية الخلية من خلايا الورم الدبقي U251 التي تظهر معدلات النمو القصوى (انظر الخطوة 1.1.2). اضبط كثافة الخلية على 1 × 106 / مل عن طريق عد الخلايا باستخدام شريحة مقياس الدم. بعد ذلك ، أضف 1 مل من تعليق الخلية إلى زجاجة مزرعة (كثافة الخلية: 1 × 106 / زجاجة) مع ثلاث زجاجات منفصلة لكل مجموعة.
  3. قم بتقييم مورفولوجيا الخلية عند تكبير 100x باستخدام مجهر المجال الساطع لتعداد الخلايا الملتصقة في 24 ساعة و 48 ساعة و 72 ساعة من الزراعة.

3. الحساسية الإشعاعية لخلايا الورم الدبقي U251 (مقايسة تكوين الاستنساخ) في غضون 30 دقيقة بعد HBO

  1. قم بزرع معلق U251 أحادي الخلية في جميع أنحاء الآبار عند 5 × 102 خلية / مل في ألواح 6 آبار ثم تعريضها للجرعة المحددة من تشعيع الأشعة السينية (0 Gy و 2 Gy و 4 Gy و 6 Gy و 8 Gy) ، مع فحص ثلاث عينات متوازية لكل جرعة من الأشعة السينية.
  2. بالنسبة لمجموعة HBO جنبا إلى جنب مع مجموعة الأشعة السينية (2 Gy) ، قم بتعريض الخلايا للإشعاع بالأشعة السينية في غضون 30 دقيقة من علاج HBO. بعد العلاج ، قم بزراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة 14 يوما.
  3. بعد أن تظهر المستنسخة ، قم بإزالة الوسيط واغسل المستنسخة 2x باستخدام PBS.
  4. ثبت الخلايا في 1 مل من الميثانول بنسبة 10٪ لمدة 15 دقيقة قبل تلطيخها ب 1 مل من البنفسجي البلوري 0.1٪ لمدة 20 دقيقة.
  5. بعد التلوين ، اغسل الخلايا ب 6 مل من الماء المقطر باستخدام ماصة ، ثم استنشق محلول البنفسجي البلوري. اترك الخلايا تجف في الهواء.
  6. احسب المستنسخة التي يتراوح قطرها بين 0.3 مم و 1.0 مم تحت المجهر للتأكد من وجود >50 خلية لكل استنساخ.
  7. احسب كسر البقاء (SF) باستخدام المعادلة (1):
    SF = figure-protocol-3733 × 100٪ (1)
  8. باستخدام البرمجيات الإحصائية، قم بإنشاء منحنى بقاء جرعة الإشعاع بناء على نموذج الضربة الواحدة متعددة الأهداف (SHMT) باستخدام المعادلة (2):
    ق = 1 - (1 - figure-protocol-4032)ن (2)
    حيث S = احتمال البقاء على قيد الحياة ؛ k = متوسط الجرعة المميتة (الجرعة التي تسبب متوسط ضربة واحدة لكل خلية) ؛ x = عدد الزيارات لكل خلية ؛ N = عدد الأهداف (عدد الضربات لموت الخلية).
  9. احسب المعلمات الإشعاعية البيولوجية ، بما في ذلك متوسط الجرعة المميتة (D0) ، والجرعة شبه العتبة (Dq) ، ورقم الاستقراء (N) ، وجزء البقاء على قيد الحياة بجرعة تشعيع تبلغ 2 Gy (SF2) ، ونسبة تعزيز التحسس (D0) (SER = D0 في المجموعة الضابطة / D0 في المجموعة التجريبية) ، و SER (Dq) (SER = Dq في المجموعة الضابطة / Dq في المجموعة التجريبية) لتقييم تأثير HBO على الحساسية الإشعاعية لخلايا الورم الدبقي U251.
    حيث D0 = القيمة المتبادلة لمنحدر الجزء الخطي من منحنى البقاء على قيد الحياة (الجرعة التي تقلل معدل البقاء على قيد الحياة بنسبة 63٪)
    N = قيمة نقطة التقاطع التي تشكلت عن طريق استقراء الجزء الخطي لتلبية الإحداثي (مما يعكس القدرة الخلوية على إصلاح الضرر الناجم عن الإشعاع)
    Dq = قيمة نقطة التقاطع الإسقاطية على الابسيسا والتقاطع المتكون عن طريق رسم خط من خلال 1.0 عند الإحداثي والموازي للخراج لتلبية خط الاستقراء.

4. مقايسة عد الخلايا لتقييم تكاثر خلايا الورم الدبقي U251

  1. قم بتعيين مجموعة تحكم ومجموعة HBO ومجموعات معالجة بالأشعة السينية (0 Gy ، 2 Gy ، 4 Gy ، 6 Gy ، 8 Gy) بمفردها أو جنبا إلى جنب مع HBO.
  2. اضبط كثافة الخلية على 1 × 104 خلايا / مل باستخدام خلايا U251 في معلقات أحادية الخلية.
  3. قم بزرع معلقات الخلية (100 ميكرولتر ، الكثافة: 1 × 103 / بئر) في ألواح 96 بئرا (خمسة آبار لكل مجموعة). قم بإجراء مقايسة عد الخلايا (انظر جدول المواد) ، ثم حدد الكثافة الضوئية (OD) عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة بعد 48 ساعة من الثقافة مع الكاشف.
  4. احسب معدل تثبيط تكاثر الخلايا (IR) وفقا للمعادلة (3):
    الأشعة تحت الحمراء = figure-protocol-6012 × 100٪ (3)

5. الكشف عن موت الخلايا المبرمج لخلايا الورم الدبقي U251

  1. اضبط التحكم و HBO والأشعة السينية (2 Gy) و HBO جنبا إلى جنب مع مجموعات الأشعة السينية (2 Gy).
  2. قم بإزالة الوسيط بعد الثقافة وغسل الخلايا باستخدام 1x PBS.
  3. افصل الخلايا باستخدام التربسين ثم قم بإلغاء تنشيط التربسين عن طريق إضافة DMEM عند ملاحظة مورفولوجيا الخلية المستديرة تحت المجهر.
  4. انقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي وجهاز الطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 200 × جم.
  5. تخلص من المادة الطافية ، وأضف 3 مل من 1x PBS إلى الحبيبات ، وقم بالماصة برفق لإعادة تعليق الخلايا.
  6. الطرد المركزي للخلايا مرة أخرى عند 200 × جم لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، قم بشفط PBS الطافي واغسل الخلايا 2x قبل تعليقها بسحب لطيف في 50 ميكرولتر من Binding Buffer.
  7. أضف 5 ميكرولتر من الملحق V-FITC إلى الخلايا عند 4 درجات مئوية واحتضان الخلايا في الظلام عند 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة قبل إضافة 400 ميكرولتر من المخزن المؤقت للربط. انقل الخليط إلى أنبوب قياس التدفق الخلوي الذي يحتوي على 5 ميكرولتر من محلول صبغة يوديد البروبيديوم (PI) (10 مجم / مل). اكتشف الخلايا المبرمجة بعد 5 دقائق عن طريق قياس التدفقالخلوي 11.
  8. سجل التألق الأحمر عند موجة الإثارة 488 نانومتر ، وأدخلها في جهاز كمبيوتر لتحليل النسبة المئوية لكل دورة خلية في 5000 خلية ، ثم اطبع قمم الخلايا المبرمجة.
  9. اجمع التألق الأحمر والأخضر عن طريق وضع العلامات المزدوجة على الملحق V و PI ، وأدخلها في الكمبيوتر لتحليلها ، ثم اطبع المخطط النقطي.

6. الكشف عن توزيع دورة خلية الورم الدبقي U251

  1. اغسل الخلايا المذكورة أعلاه 2x مع 1 مل من PBS قبل معالجتها بالتربسين.
  2. عندما يتم الكشف عن مورفولوجيا الخلية المستديرة بواسطة الفحص المجهري الضوئي ، أضف DMEM الذي يحتوي على 10٪ FBS.
  3. الطرد المركزي للخلايا لمدة 5 دقائق عند 200 × جم في درجة حرارة الغرفة.
  4. قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق هذه الخلايا في 1 مل من PBS قبل إضافة محلول الإيثانول المبرد مسبقا بنسبة 75٪.
  5. احتضان الخليط لمدة 4 ساعات على الأقل أو طوال الليل عند -20 درجة مئوية.
  6. اغسل الخلايا 2x باستخدام PBS المثلج و 180 ميكرولتر من EDTA (0.1 ملي مولار ، 3.7 مجم من EDTA + 100 مل من PBS) ، 20 ميكرولتر من RNase A (10 مجم / مل) ، 35 ميكرولتر من Triton X-100 (2٪ ، 2 مل من Triton + 98 مل من FBS) ، و 96.5 ميكرولتر من PBS. ثم أضف 17.5 ميكرولتر من محلول PI (1 مجم / مل).
  7. احتضن الخليط على حرارة 4 درجات مئوية في الظلام لمدة 10 دقائق.
  8. اغسل الخلايا في 200 ميكرولتر من PBS ، ثم ضعها في مقياس التدفق الخلوي لتقييم توزيع دورة الخلية ، كما هو موضحسابقا 12.
  9. قم بتشغيل مقياس التدفق الخلوي في وضع الإثارة بالليزر المزدوج ، والفضاء ثلاثي الأبعاد ، مع حجم بقعة 22 ميكرومتر × 66 ميكرومتر و 13 ميكرومتر × 66 ميكرومتر. استخدم غرفة تدفق تبلغ 430 ميكرومتر × 180 ميكرومتر ، وطيف 300-1,100 نانومتر ، وقابلية اكتشاف ≤100 MESF ، ودقة CV <2٪. بعد ذلك ، قم بتعريض الخلايا لضوء الإثارة 488 نانومتر واكتشاف وقياس إشارات التألق باستخدام برنامج أداة لتحديد توزيع دورة الخلية13.
  10. حدد محتوى الحمض النووي ، ثم وفقا لمحتوى الحمض النووي ، قم بتحليل دورة الخلية.

7. التحليل الإحصائي

  1. إجراء التحليلات الإحصائية.
  2. اعرض البيانات كمتوسط ± انحراف معياري.
  3. استخدم اختبار t الخاص بالطالب لمقارنة المجموعات ، مع تعيين الدلالة الإحصائية على أنها P < 0.05.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

مزرعة خلايا الورم الدبقي U251
كان لخلايا الورم الدبقي U251 شكل مغزلي بعد 24 ساعة إلى 48 ساعة من الزراعة في DMEM وكانت ملتزمة. تم استخدام هذه الخلايا لمزيد من الدراسة (الشكل 1).

مورفولوجيا خلايا الورم الدبقي وعددها
كان عدد الخلا?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

يعد خط خلايا الورم الدبقي U251 أحد أكثر خطوط خلايا الورم الدبقي البشري كلاسيكيا ويستخدم على نطاق واسع كنموذج للورم الدبقي في العديد من الدراسات.

آثار HBO على تكاثر خلايا الورم الدبقي U251
يشير HBO عادة إلى استنشاق الأكسجين النقي (تركيز الأكسجين بنسبة 1...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

Acknowledgements

اي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Binding Buffer  Dickinson and CompanyRH10 9RR
CCK-8 test kit DOJINDO NJCell counting assay
CELL FIT cell cycle analysis (DNA content)
CELLQUESTapoptotic cell analysis
DMEM and Annexin V-FITCGibco BRL
flow cytometerDickinson
Glioma U251 and U87 cell lineShanghai Institute of Cell Biology
hyperbaric oxygen chamberHongyuan Institute
medical linear acceleratorElekta Limited Company
microplate reader
MOD FITLT formac v1.01 cell analysis--cell cycle phase
trypsinHyclone Laboratories Inc

References

  1. Louis, D. N., et al. The 2016 World Health Organization Classification the Central Nervous System: A summary. Acta Neuropathologica. 131 (6), 803-820 (2016).
  2. Sun, M. Z., et al. Survival impact of time to initiation of chemoradiotherapy after resection of newly diagnosed glioblastoma. Journal of Neurosurgery. 122 (5), 1144-1150 (2015).
  3. Hegi, M. E., et al. MGMT gene silencing and benefit from temoozolomide in glioblastoma. New England Journal of Medicine. 352 (10), 997-1003 (2005).
  4. Zhu, Y., et al. Involvement of decreased hypoxia-inducible factor 1 activity and resultant G1-S cell cycle transition in radioresistance of perinecrotic tumor cells. Oncogene. 32 (16), 2058-2068 (2013).
  5. Kohshi, K., et al. Potential roles of hyperbaric oxygenation in the treatments of brain tumors. Undersea and Hyperbaric Medicine. 40 (4), 351-362 (2013).
  6. Aghajan, Y., Grover, I., Gorsi, H., Tumblin, M., Crawford, J. R. Use of hyperbaric oxygen therapy in pediatric neuro-oncology: a single institutional experience. Journal Neurooncology. 141 (1), 151-158 (2019).
  7. Ding, J. B., Chen, J. R., Xu, H. Z., Qin, Z. Y. Effect of hyperbaric oxygen on the growth of intracranial glioma in rats. Chinese Medical Journal. 128 (23), 3197-3203 (2015).
  8. Wang, Y. G., et al. Hyperbaric oxygen promotes malignant glioma cell growth and inhibits cell apoptosis. Oncology Letters. 10 (1), 189-195 (2015).
  9. Milovanova, T. N., et al. Hyperbaric oxygen stimulates vasculogenic stem cell growth and differentiation in vivo. Journal of Applied Physiology. 106 (2), 711-728 (2009).
  10. Conconi, M. T., et al. Effects of hyperbaric oxygen on proliferative and apoptotic activities and reactive oxygen species generation in mouse fibroblast 3T3/J2 cell line. Journal of Investigative Medicine. 51 (4), 227-232 (2003).
  11. Vermes, I., Haanen, C., Steffiens-Nakken, H., Reutellingsperger, C. A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V. Journal of Immunological Methods. 184 (1), 39-51 (1995).
  12. Cui, W., Niu, F. -L., He, L. -Y., W, S. -R. Comparison of two softwares for analysing apoptosis with flow cytometry. Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine. 24 (6), 45-47 (2001).
  13. Cecchini, M. J., Amiri, M., Dick, F. A. Analysis of cell cycle position in mammalian cells. Journal of Visualized Experiments. (59), e3491(2012).
  14. Resanovic, I., et al. Effects of hyperbaric oxygen on inducible nitric oxide synthase activity/expression in lymphocytes of type 1 diabetes patients: A prospective pilot study. International Journal of Endocrinology. 2019, 2328505(2019).
  15. Stuhr, L. E., et al. Hyperoxia retards growth and induces apoptosis, changes in vascular density and gene expression in transplanted gliomas in nude rats. Journal of Neuro-Oncology. 85 (2), 191-202 (2007).
  16. Biollaz, G., et al. Site-specific anti-tumor immunity: differences in DC function, TGF-beta production and numbers of intratumoral Foxp3+ Treg. European Journal of Immunology. 39 (5), 1323-1333 (2009).
  17. McKenna, F. W., Ahmad, S. Fitting techniques of cell survival curves in high-dose region for use in stereotactic body radiation therapy. Physics in Medicine and Biology. 54 (6), 1593-1608 (2009).
  18. Malaise, E. P., Lambin, P., Joiner, M. C. Radiosensitivity of human cell lines to small doses. Are there some clinical implications. Radiation Research. 138, S25-S27 (1994).
  19. Björk-Eriksson, T., West, C., Karlsson, E., Mercke, C. Tumor radiosensitivity (SF2) is a prognostic factor for local control in head and neck cancers. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 46 (1), 13-19 (2000).
  20. Bromfield, G. P., Meng, A., Warde, P., Bristow, R. G. Cell death in irradiated prostate epithelial cells: Role of apoptotic and clonogenic cell kill. Prostate Cancer and Prostatic Diseases. 6 (1), 73-85 (2003).
  21. Kalns, J. E., Piepmeier, E. H. Exposure to hyperbaric oxygen induces cell cycle perturbation in prostate cancer cells. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal. 35 (2), 98-101 (1999).
  22. Lakka, S. S., et al. Inhibition of cathepsin B and MMP-9 gene expression in glioblastoma cell line via RNA interference reduces tumor cell invasion, tumor growth and angiogenesis. Oncogene. 23 (27), 4681-4689 (2004).
  23. Li, S., Shi, D., Zhang, L., Yang, F., Cheng, G. Oridonin enhances the radiosensitivity of lung cancer cells by upregulating Bax and downregulating Bcl-2. Experimental and Therapeutic Medicine. 16 (6), 4859-4864 (2018).
  24. Campbell, K. J., Tait, S. W. G. Targeting BCL-2 regulated apoptosis in cancer. Open Biology. 8 (5), 180002(2018).
  25. Rengarajan, T., et al. D-pinitol promotes apoptosis in MCF-7 cells via induction of p53 and Bax and inhibition of Bcl-2 and NF-κB. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 15 (4), 1757-1762 (2014).
  26. Shinagawa, A., et al. The potent peptide antagonist to angiogenesis, C16Y and cisplatin act synergistically in the down-regulation of the Bcl-2/Bax ratio and the induction of apoptosis in human ovarian cancer cells. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 39 (6), 135-164 (2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

U251 G2 M

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved