خرائط Mycorrhizal كأداة لاستكشاف أنماط الاستعمار والاستراتيجيات الفطرية في جذور Festuca rubra و Zea mays

Summary

يصف البروتوكول هنا طرق تقييم أنماط الاستعمار الفطري المفصلي والاستراتيجية في الجذور لنوعين: Zea mays و Festuca rubra. يسمح استخدام طريقة MycoPatt بحساب المعلمات ، وتحويل الهياكل الفطرية إلى بيانات رقمية ، ورسم خرائط لموقعها الحقيقي في الجذور.

Abstract

الفطريات الفطرية المفصلية هي متكافلات في جذور النباتات. ويتمثل دورها في الحفاظ على تنمية المضيف والحفاظ على التوازن الغذائي في النظم الإيكولوجية. تعتمد عملية الاستعمار على عدة عوامل مثل بيئة التربة ، والتنوع الجيني للفطريات والمضيف ، والممارسات الزراعية. يؤدي عملها المتزامن إلى تطوير شبكة واصلة معقدة ويؤدي إلى التطور الثانوي للحويصلات والمفصليات في الخلايا الجذرية. كان الهدف من هذا البحث هو تحليل كفاءة طريقة أنماط الميكوريزال (MycoPatt) لتحديد مواقع الهياكل الفطرية في جذور Festuca rubra و Zea mays. كان الهدف الآخر هو استكشاف استراتيجية الاستعمار الفطري كما كشفت عنها الخرائط الفطرية لكل نوع. يسمح الحصول على صور مجهرية متعددة وتجميعها بتقييم الاستعمار الفطري في كل من نباتات الذرة والبراز الأحمر لتوفير معلومات عن الوضع الواقعي للهياكل المتقدمة. تسلط أنماط الميكوريزال المرصودة الضوء على الكفاءة المتغيرة لكل نبات من حيث تطوير الروابط مع الفطريات التكافلية للتربة ، الناجمة عن العلاجات التطبيقية ومرحلة النمو. الخرائط التفصيلية Mycorrhizal التي تم الحصول عليها من خلال طريقة MycoPatt مفيدة للكشف المبكر عن كفاءة النبات في الاستحواذ التكافلي من التربة.

Introduction

فطريات الميكوريزا المفصلية (AM) هي فئة من النباتات الداخلية التي تنقلها التربة والتي تعد باستمرار مجالا لاهتمام الباحثين. وجودها في جذور معظم النباتات ومشاركتها في دورات المغذيات يجعلها مكونات حيوية في استقرار كل نظام بيئي حيث توجد النباتات العشبية ^1,2. من خلال الميسيليوم خارج الجذر ، يعمل AM كامتداد فطري لجذور النباتات ، خاصة في المناطق التي يصعب الوصول إليها³. النشاط الرئيسي هو في جذور النباتات المضيفة ، حيث تقوم AM بتطوير شبكات hyphae كبيرة وهياكل محددة داخل الخلايا تسمى arbuscules. يسمح عدم وجود خصوصية للمضيف للتكافل باستعمار أنواع متعددة في نفس الوقت. توفر هذه القدرة ل AM دور تخصيص الموارد وتنظيم المغذيات في النظام الإيكولوجي ؛ يوفر الفطر أيضا الدعم في بقاء النبات ويساعد في أداء النبات⁴،^5،6،7. يكون تفاعل أنواع AM مع الجذور المضيفة مرئيا في امتداد وموقع الميسيليوم داخل الجذر ووجود وشكل المفصليات التي تطورت داخل الخلايا. تعمل المفصليات داخل الخلايا كنقطة تبادل بين المتكافلتين وتمثل مناطق تتميز بعمليات نقل سريعة. تعتمد الهياكل التي تنتجها AM على الأنواع ، وبالإضافة إلى arbuscules ، في الجذور ، فإنها تطور أيضا حويصلات وجراثيم وخلايا مساعدة.

هناك العديد من التحديات في تقييم التكافل AM في جذور النباتات ^8,9. الأول هو تطورها المستمر خلال فترة الغطاء النباتي بأكملها للمضيفين ، مما يؤدي إلى تغييرات متعددة في البنية المفصلية الواصلة. المراحل المختلفة من النمو المفصلي ، حتى انهيارها ، موجودة بوضوح في الجذور ، ولكن يتم هضم هياكل AM الشائخة في بعض الأحيان ، مما يجعلها مرئية جزئيا فقط¹⁰. ويتمثل التحدي الثاني في طريقة التلطيخ وبروتوكوله ، والتنوع الكبير في أنظمة الجذر ، وأبعاد خلاياها ، والاختلافات في السمك ، مما يجعل من الصعب اقتراح طريقة موحدة. ويتمثل التحدي الأخير في تقييم وتسجيل الاستعمار AM. هناك العديد من الطرق التي تسجل AM بدرجات مختلفة من الموضوعية ، ولا يزال معظمها مقتصرا على تقنيات الفحص المجهري. تعتمد الهياكل البسيطة على وجود / عدم وجود هياكل في قشرة الجذر ، في حين أن الهياكل الأكثر تعقيدا تستند إلى التسجيل البصري واستخدام فئات الاستعمار ، مع دمج تواتر وشدة ظاهرة الاستعمار. تم إنتاج الكثير من البيانات في العقود الأخيرة حول الحالة الفطرية لأنواع متعددة ، ولكن معظم الطرق تقتصر على القيمة الملحوظة للاستعمار دون الإشارة إلى الموقع الحقيقي لكل هيكل في قشرة الجذر. استجابة لضرورة الحصول على نتائج أكثر دقة حول استعمار AM ، تم تطوير طريقة تعتمد على التحليل المجهري لأنماط mycorrhizal (MycoPatt) في الجذور لتجميع ، في شكل رقمي ، خرائط mycorrhizal التفصيلية¹¹. أيضا ، تسمح الطريقة بالحساب الموضوعي لمعلمات الاستعمار وتحديد الموضع الفعلي لكل هيكل في الجذر.

يمكن أن يكون موضع الهياكل الفطرية AM مهما في الإجابة على السؤالين التاليين. الأول يتعلق بتحليل الاستعمار في لحظة واحدة محددة من دورة الغطاء النباتي للنبات. في هذا السياق ، من المفيد جدا مراقبة وفرة المفصليات / الحويصلات ، والإبلاغ عن كيفية وجودها في الجذر ، وتقديم صورة ومعلمات استعمارية واضحة للغاية. والثاني يتعلق بالكشف عن الاستراتيجية الفطرية وتوجهها وحتى التنبؤ بتطورها المستقبلي. يمكن أن يكون أحد تطبيقات MycoPatt للنباتات التي يتم تحليلها يوميا ، كل 2-3 أيام ، أسبوعيا ، أو خلال مراحل النمو المختلفة. في هذا السياق ، يعد موقع الحويصلات / arbuscules مهما لفهم الآلية البيولوجية لاستعمار AM بشكل أفضل. هذه المعلمات والملاحظات مفيدة جدا لتكملة المعلمات الرياضية.

الهدف من هذه المقالة هو إظهار قدرة نظام MycoPatt على استكشاف إمكانات واستراتيجية استعمار الفطريات AM الأصلية في جذور Zea mays (الذرة) خلال مراحل التطور المختلفة وفي جذور Festuca rubra (الفسكو الأحمر) في ظل ظروف إخصاب مختلفة طويلة الأجل. لتحقيق الهدف ، تم تحليل قاعدتي بيانات كبيرتين من تجربتين. تم تأسيس تجربة الذرة في كوجوكنا (46°44′56" lat. N و 23°50′0" طويلة. E) ، في المزرعة التعليمية التجريبية بجامعة العلوم الزراعية والطب البيطري كلوج على phaeoziom مع تربة طميية الملمس¹². تجربة الفسكو الأحمر هي جزء من موقع تجريبي أكبر تم إنشاؤه في عام 2001 في غيتشاري ، جبال أبوسيني (46 ° 49'064 " lat. N و 22 ° 81'418 ''' طويلة. E) ، على نوع التربة preluvosol (terra rossa)^13,14. تم جمع الذرة في خمس مراحل ظاهرية مختلفة للنمو¹²: B1 = 2-4 أوراق (كنقطة تحكم لبدء الاستعمار الفطري) ؛ B2 = 6 أوراق; B3 = 8-10 أوراق ؛ B4 = تكوين قطعة خبز. B5 = النضج الفسيولوجي. بدءا من مرحلة 2-4 أوراق (A0) ، تم تطبيق معالجة عضوية ، مما أدى إلى عامل التخرج المزدوج (A1 = التحكم و A2 = المعالجة). تم جمع جذور الفسكو الأحمر عند الإزهار من تجربة مع خمسة تسميد طويل الأجل^13,14: V1 = التحكم ، غير المخصب. V2 = 10 t·^ha-1 السماد; V3 = 10 t·ha-1 السماد + N 50 كجم ·ha-1 ، P 2 O₅ 25 kg·ha-1 ، K₂O 25 kg ·^ha-1 ؛ V4 = N 100 kg·ha-1, P 2 O₅ 50 kg·ha-1, K₂O 50 kg·^ha-1; V5 = 10 t·ha-1 السماد + N 100 kg·ha-1, P 2 O₅ 50 kg·ha-1, K₂O 50 kg·^ha-1. تم جمع خمسة نباتات في كل مرحلة تطوير من كل متغير تسميد. تم تحليل بروتوكولات التلطيخ وأدائها من حيث وقت معالجة العينات وجودة التلطيخ. تم تحليل العلاقة بين تطور AM-hyphae ووجود هياكلها في الجذور بشكل منفصل لكل نوع واستمرت مع تحديد الجذور الأكثر تساهلا للاستعمار. تم تحليل أنماط الاستعمار المحددة لكل نظام جذر بناء على خرائط الاستعمار وقيمة معلمات AM.

الذرة هي نبات سنوي ، مما يعني النمو المستمر للجذور ، وكان هذا هو السبب الرئيسي لتطبيق MycoPatt في مراحل النمو. Red fescue هو نبات معمر من أرض عشبية تعامل لفترة طويلة بأسمدة مختلفة. جذورها لها تطور أقصر من 1 سنة ، ويعتبر anthesis كنقطة الغطاء النباتي عندما يغير النبات عملية التمثيل الغذائي من الخضري إلى التوليدية. للقبض على هذه النباتات خلال فترات النشاط المكثف هذه ، تم اختيار النقاط الزمنية المذكورة أعلاه. أخذ العينات خلال فترة الغطاء النباتي أمر صعب بالنسبة لهذا النوع عندما يزرع في الأراضي العشبية الطبيعية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. اختيار المواد البيولوجية ، وأخذ عينات الجذر ، والتخزين

1. جمع الجذر الكامل للنباتات مع مجرفة (الشكل 1A) بشكل منفصل لكل متغير وتكرارها. إزالة بلطف ، باليد ، مجاميع التربة الكبيرة من الجذور. اغسل نظام الجذر بأكمله وقم بقياسه على مقياس بخلايا 1 سم × 1 سم (الشكل 1B). قطع الجذور بشكل منفصل لكل نبات ، ووضعها في كيس بلاستيكي.
2. جمع جميع الجذور النظيفة من كل نبات في كيس بلاستيكي ، وجمع جميع العينات من متغير واحد في كيس واحد أكبر. اكتب على كل حقيبة اسم المرحلة / البديل وتاريخ أخذ العينات. قم بتخزين الجذور في ثلاجة أو فريزر عند درجة حرارة تتراوح بين -4 درجة مئوية و -20 درجة مئوية حتى المعالجة.

2. معالجة الجذر ، والمقاصة ، وتلطيخ للفحص المجهري

ملاحظة: استخدم قفازات وقناعا وغطاء ميكروبيولوجيا / كيميائيا لهذه الخطوة من البروتوكول.

1. تأكد من أن عملية ذوبان الجذر تتم ببطء في درجة حرارة الغرفة. لجميع خطوات المعالجة ، استخدم الجرار الصغيرة (30-50 مل) لتقليل كمية العوامل الضرورية.
2. نفذ الخطوات الأربع التالية من إجراء التنظيف والتلطيخ البطيء¹⁵. قم بجميع الخطوات في درجة حرارة الغرفة. تسمح هذه الطريقة بمعالجة عدد كبير من العينات في نفس الوقت دون استخدام حمام مائي للغليان.
   1. تطهير الجذر: ضع جميع الجذور من نبات واحد في جرة. تحضير محلول NaOH بنسبة 10٪ مع ماء الصنبور وصبه في كل جرة حتى يغطي الجذور بالكامل. هز الجرار بقوة لمدة 1 دقيقة أو 2 دقيقة لإنتاج تشتت متجانس لمحلول التطهير في الجذور. كرر هذا الإجراء بعد 24 ساعة واترك الجذور في محلول المقاصة لمدة 48 ساعة على الأقل.
      ملاحظة: الجذور النظيفة لها جانب أصفر شاحب (يصل إلى الأبيض) ، والاتساق ناعم (يمكن سحقها بسهولة عن طريق الضغط باستخدام الملقط).
   2. شطف الجذر: مرر محتوى جرة واحدة في كل مرة من خلال غربال. أعد تدوير حل المقاصة. شطف الجذور عدة مرات في ماء الصنبور حتى تتم إزالة محلول المقاصة تماما.
      ملاحظة: إذا لم تتم إزالة محلول الإزالة بالكامل ، فسيؤثر ذلك على جودة إجراء التلطيخ.
   3. تلطيخ الجذر: ضع الجذور المغسولة في وعاء نظيف. تحضير محلول خل الحبر بنسبة 5٪: 5٪ بماء الصنبور (5 مل من الحبر الأزرق + 5 مل من حمض الخليك بنسبة 9٪ + 90 مل من ماء الصنبور). صب المحلول في كل جرة حتى يغطي الجذور بالكامل. هز الجرار بقوة لمدة 1 دقيقة أو 2 دقيقة لإنتاج تشتت متجانس لمحلول التلطيخ في الجذور. كرر هذا الإجراء بعد 24 ساعة واترك الجذور في هذا المحلول لمدة 48 ساعة.
      ملاحظة: الجذور الملطخة لها لون أزرق مكثف.
   4. إزالة البقع الجزئية من الجذر: شطف الجذور الملطخة في ماء الصنبور لمدة 1-2 دقيقة. رج الجرار بقوة لإزالة محلول التلطيخ الإضافي. كرر الإجراء إذا كان التلطيخ شديدا جدا ولا يسمح بإجراء تقييم مجهري واضح.
      ملاحظة: يمكن الاحتفاظ بالجذور الملطخة في ماء الصنبور لمدة تصل إلى 1 أسبوع في درجة حرارة الغرفة دون تغيير جودة التلطيخ (الشكل 2). لفترات أطول ، يمكن الحفاظ على الجذور لمدة تصل إلى 2-3 أشهر في محلول خل التفاح التجاري بنسبة 5٪ (5٪ حمض الخليك).

3. معالجة الجذر للفحص المجهري

1. تجزئة الجذر: ضع الجذور الملطخة من كل عينة على لوح تقطيع متدرج (الشكل 3A). قطع الجذور إلى شرائح 1 سم (الشكل 3B). اختر 15 شريحة لكل متغير.
2. طريقة التكسير اللطيفة لإعداد الجزء: انشر الجذور على شريحة. استخدم حقيبة ترقق لتغطية الجذور وسحقها بلطف بدءا من حافة (الشكل 3C ، D). استخدم أداة بلاستيكية ناعمة، على سبيل المثال، ملاقط أو مقبض مشرط أو قلم رصاص أو قلم رصاص مزود بممحاة، لعرض الجذور ببطء على الشريحة. قم بإزالة الحقيبة الترققية بعناية وقم بتغطية العينة بغطاء (الشكل 3E).
   ملاحظة: الجذور لها شكل أنبوبي ، لذلك من الضروري فصلها في مستوى ثنائي الأبعاد. يفترض هذا الإجراء فصل الجذور على النقطة الوسطى ، مما يؤدي إلى عرض جزأين من القطر الداخلي. يسمح استخدام أكياس الترقق في إجراء التكسير اللطيف بعرض الجذور ، التي لها شكل أسطوانة ، في قطعتين - واحدة على اليسار والأخرى على اليمين - نحو نقطة الوسط. وبهذه الطريقة ، يتم تحليل الجذر بأكمله بعمق ، ودرجة الاستعمار هي المعلمة التي تظهر الاستعمار الحجمي (الموصوف في العمل الأصلي على MycoPatt¹¹). في الأساس ، نقطع أسطوانة إلى نصفين ، وبعد ذلك ، نعيد بناءها رياضيا.
3. أضف الماء إلى زاوية من الشريحة باستخدام ماصة واترك الماء ينتشر ببطء على الشريحة (الشكل 3F). قم بإزالة الماء الزائد بمنشفة ورقية.

4. التحليل المجهري لعينات الجذر

1. استخدم مجهرا مزودا بكاميرا جيدة الدقة.
2. تحليل الشرائح بدءا من طرف. التقط كل حقل مجهري. أعد تسمية كل صورة تم التقاطها باستخدام رمز يسمح بتجميع أجزاء الجذر الحقيقية بعد التجميع. بالنسبة للجذور السميكة، استخدم التكبير 10x أو 40x، وبالنسبة للجذور الرقيقة، استخدم التكبير 40x. استخدم نفس الهدف والتكبير لمجموعة كاملة من الجذور من الأنواع.

5. تجميع الصور بعد الفحص المجهري

1. استخدم برنامج العرض التقديمي لتصميم لوحة رسم لتجميع الصور. اضبط العرض 2-3 سم أوسع من عرض الصورة. أضف جميع الصور الملتقطة من مقطع واحد حسب ترتيب التقاطها وأعد بناء كامل طول مقطع الجذر (الشكل 4A).
   1. باختصار ، اجمع ما مجموعه 15 صورة لكل مقطع طوله 1 سم وقم بتنظيمها عموديا ، بدءا من 1 إلى 15 ، في برنامج العرض التقديمي لإعادة بناء الشريحة.
2. محاذاة الصور في المنتصف. استخدم المحاذاة الرأسية للتأكد من أن كل صورة تتبع الصورة السابقة. في جميع الصور، ضع شبكة من 10 خلايا × 150 خلية لتغطية الجزء الجذر بأكمله.
   1. بالإضافة إلى ذلك، في كل صورة على حدة، ضع شبكة 10 × 10، وفي كل خلية من هذه الشبكة، أدخل رقما من واحد إلى ستة إذا كانت بنية AM مرئية أو اتركها فارغة إذا لم تكن بنية AM موجودة. وبهذه الطريقة ، تكون دقة العملية قصوى مع عدم وجود أخطاء في موقع هياكل AM التي تتم ملاحظتها.
3. أضف جدولا لشبكة من 10 خلايا بعرض وطول 150 خلية (15 مربعا من 10 خلايا × 10 خلايا). تغيير أبعاد عرض الجدول إلى عرض الصور. قم بتغيير طول الجدول ليشمل جميع الصور (الشكل 4B).

6. تسجيل الاستعمار الفطري

1. استخدم الرقم الفريد لتسجيل كل نوع من أنواع البنية كما هو موضح في طريقة أنماط mycorrhizal¹¹: 1 ل hyphae ؛ 2 ل arbuscules. 3 للحويصلات. 4 للجراثيم. 5 للخلايا المساعدة. و 6 لنقاط الدخول (الشكل 4 جيم). سجل كل بنية فطرية ملحوظة من كل خلية من الشبكات المطبقة سابقا (الشكل 4D).

7. تحليل البيانات الخام واستخراج النتائج

1. أدخل جميع الدرجات التي تم الحصول عليها في جدول بيانات MycoPatt¹¹. استخدم وظيفة النسخ / اللصق لنقل جميع الدرجات من العرض التقديمي إلى الورقة الأولى المسماة rawdata (الشكل 5).
2. التحليل الأولي للنتائج: استخدم الورقة الثالثة المسماة المعلمات في أداة جدول بيانات MycoPatt لتصور النتائج كنسب مئوية (٪) بشكل منفصل في ثلاثة أشكال (الشكل 6A-C). استخدام الأعمدة من A إلى K لتحليل الصورة الأفقية للاستعمار؛ الأعمدة من M إلى W لتحليل الصورة الرأسية للاستعمار ؛ والأعمدة Y إلى الذكاء الاصطناعي لتحليل الاستعمار المستعرض (المتوسط) لكل من المربعات 15 10 × 10 (الأسطر 2-17) ومتوسط الاستعمار النهائي (الأسطر 19-20).
   ملاحظة: يستخدم متوسط الاستعمار المستعرض لحساب معلمات الاستعمار الحقيقية ، المتعلقة بكل من التحليل الأفقي والرأسي. وبهذه الطريقة ، لا يمكن ارتكاب أي أخطاء مقارنة بما إذا تم استخدام التحليل الأفقي أو الرأسي فقط (الموضح بالتفصيل في العمل الأصلي¹¹). أيضا ، يتم حساب هذه المجموعة من المعلمات لكامل سطح الحقل المجهري.
   1. استخدم التعاريف والصيغ، الخاصة بكل معلمة، لتحليل النتائج¹¹. استخدم معلمات الاستعمار التالية: تواتر الاستعمار (٪) ، شدة الاستعمار (٪) ، arbuscules (٪) والحويصلات (٪) ، الجراثيم (٪) والخلايا المساعدة (٪) ، نقاط الدخول (٪) ، النسبة المئوية للمناطق غير الفطرية (٪) ، درجة الاستعمار الإجمالية (٪) ، وتقرير المناطق الفطرية / غير الفطرية.
      ملاحظة: إذا كانت المفصليات والحويصلات والجراثيم والخلايا المساعدة ونقاط الدخول مفقودة من العينات التي تم تحليلها، فسيقوم جدول بيانات MycoPatt بتسجيلها على أنها صفر (0).
3. إنتاج واستخراج الخرائط الفطرية: تصور الصورة التي تم الحصول عليها من تحويل رمز الهياكل الفطرية إلى ألوان في الورقة الثانية من الرسوم البيانية المسماة MycoPatt (الشكل 7A). تصدير الصورة الناتجة في ورقة الرسوم البيانية كصورة (الشكل 7B). استخدم رمز اللون في وسيلة الإيضاح لتحليل أنماط الميكورهازال.
4. تحليل خريطة الميكورهازال: تحديد أهم الهياكل وتجميعها على الخرائط الفطرية. وصف نمط الاستعمار الفطري الذي لوحظ في الجذور التي تم تحليلها. وصف استراتيجية الاستعمار الفطري على أساس التطور الهيكلي الملحوظ في الجذر ، ونمط التفرع ، وتطوير arbuscule / vesicle.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

يوفر الاستخدام الصحيح لطريقة التكسير اللطيفة للجذور بعد إجراءات التلطيخ تفاصيل جيدة عن الهياكل الفطرية ، لكل من Zea mays (الشكل 8A-C) و Festuca rubra (الشكل 9A-E) ، والتباين الجيد بين الهياكل الفطرية والخلايا الجذرية ، وتأكيد اللوح بسبب اللون الأزرق...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

الدراسات حول الاستعمار الفطري حيوية لتطوير استراتيجية جديدة في المجال الزراعي. إن قدرة النباتات المزروعة المتعددة على تكوين ارتباط تكافلي مع الميكوريزا المفصلية جعلتها مكونا مهما في التنمية المستدامة للنظام الإيكولوجي الزراعي والحفاظ على صحته¹⁶،^17،

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Apple vinegar 5%	FABRICA DE CONSERVE RAURENI S.R.L.	O?ET DE MERE	https://www.raureni.ro/ro-ro/produs/otet-de-mere
Blue Ink	Pelikan	4001	https://www.pelikan.com/pulse/Pulsar/ro_RO.Store.displayStore.224848./cerneal%C4%83-4001-de-la-pelikan
Cover slips	Menzel-Glaser	D 263 M	https://si.vwr.com/store/product/20545757/cover-glasses-menzel-glaser
Forceps, PMP	Vitalab	9.171 411	http://shop.llg.de/info881_Forceps_PMP_lang_UK. htm?UID=55005bf838d8000000000000 &OFS=33
Glass jar 47 mL	Indigo Cards	BORCAN 47 ML HEXAGONAL	https://indigo.com.ro/borcan-47-ml-hexagonal
Laminating Pouches	Peach	PP525-08	Business Card (60x90mm) / https://supremoffice.ro/folie-laminare-60x90mm-125mic-carte-vizita-100-top-peach-pp525-08-510328
Microflow Class II ABS Cabinet	Bioquell UK Ltd	Microflow Class II ABS Cabinet	http://www.laboratoryanalysis.co.uk/graphics/products/034_11%20CLASS%202BSC%20(STD).pdf
Microscope slides	Deltalab	D100001	https://distrimed.ro/lame-microscop-matuite-la-un-capat-26x76-mm-deltalab/?utm_source=Google%20Shopping&utm_campaign= google%20shopping%20distrimed&utm_medium=cpc& utm_term=1647&gclid=CjwKCAjwu YWSBhByEiwAKd_n_odzr8CaCXQ hl9VQkAB3p-ODo2Ssuou9cnoRtz1Gb xsjqPY7F05HmhoCj6oQAvD_BwE
Microsoft Office 365	Microsoft	Office 365	Excel and Powerpoint; spreadsheet and presentation
NaOH	Oltchim	01-2119457892-27-0065	http://www.sodacaustica.com.ro/pdf/fisa-tehnica-soda-caustica.pdf
Nitrile gloves	SemperGuard	816780637	https://www.sigmaaldrich.com/RO/en/product/aldrich/816780637?gclid=CjwKCAjwuYWSBhByEiwAKd _n_rmo4RRt8zBql7ul8ox AAYhwhxuXHWZcw4hlR x0Iro_4IyVt69aFHRoCmd wQAvD_BwE
Optika camera	OPTIKA	CP-8; P8 Pro Camera, 8.3 MP CMOS, USB 3.0	https://www.optikamicroscopes.com/optikamicroscopes/product/c-p-series/
Optika Microscope	OPTIKA	B383pL	https://www.optikamicroscopes.com/optikamicroscopes/product/b-380-series/
Protective mask FFP3	Hermes Gift	HERMES000100	EN 149-2001+A1:2009 / https://www.emag.ro/set-10-masti-de-protectie-respiratorie-hermes-gift-ffp3-5-straturi-albe-hermes000100/pd/DTZ8CXMBM/#specification-section
Scalpel	Cutfix	9409814	https://shop.thgeyer-lab.com/erp/catalog/search/search.action;jsessionid=C258CA 663588CD1CBE65BF 100F85241B?model.query=9409809
White wine vinegar 9%	FABRICA DE CONSERVE RAURENI S.R.L.	O?ET DE VIN ALB	https://www.raureni.ro/ro-ro/produs/otet-de-vin-alb