JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف البروتوكول الحالي نموذجا للقوارض لإصابة نقص التأكسج عند الأطفال حديثي الولادة لتحديد التغيرات المبكرة في الأنسجة الدماغية عن طريق التشكل الإجمالي والتصوير بالرنين المغناطيسي. هذا له فوائد على النماذج الحالية ، والتي يمكن استخدامها لدراسة الإصابة المتأخرة ولكنها لا تسمح بتقييم التغييرات المبكرة القابلة للتكرار.

Abstract

اعتلال الدماغ نقص التأكسج الإقفاري في الفترة المحيطة بالولادة هو مرض حاد قد يصيب الأطفال حديثي الولادة ، مما يؤدي إلى نتائج نموية عصبية متغيرة طويلة وقصيرة الأجل. التشخيص المبكر أمر بالغ الأهمية لتحديد الرضع الذين قد يستفيدون من التدخل. ومع ذلك ، يعتمد التشخيص المبكر بشكل كبير على المعايير السريرية. لم تظهر أي اختبارات جزيئية أو إشعاعية نتائج واعدة في الكشف عن الإصابة الدماغية المبكرة. أظهرت الدراسات أن التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) يمكن أن يظهر تغيرات في كل من تدفق الدم / نقص التروية واضطراب التمثيل الغذائي. ومع ذلك ، فقد تم استخدامها جميعا لتقييم المرحلة الثانوية من المرض (>12 ساعة) بعد ظهور الإصابة. التشخيص المبكر أمر بالغ الأهمية لبدء انخفاض حرارة الجسم العلاجي بسرعة عند الرضع المؤهلين ، والذي يوصى حاليا بالبدء به في غضون 6 ساعات من الولادة. تم تطوير نموذج الفئران لإصابة نقص التأكسج الإقفارية في عام 1981 وتم التحقق من صحته واستخدامه على نطاق واسع لدراسة التغيرات في نضح الدماغ وعلامات الإصابة الدماغية والمورفولوجيا. ومع ذلك ، فقد تم استخدامه في المقام الأول "كنموذج متأخر" ، حيث تم تقييم الإصابة بعد عدة أيام من الإهانة الإقفارية الأولية. من المعروف أن النموذج لديه حساسية ضعيفة في تقييم التغيرات الدماغية المبكرة الموثوقة والقابلة للتكرار. كان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير نموذج موثوق به لدراسة العلامات المورفولوجية والإشعاعية الإجمالية المبكرة ل HIE باستخدام التلوين المرضي والتصوير بالرنين المغناطيسي الدماغي / التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي.

Introduction

الاعتلال الدماغي الإقفاري الناجم عن نقص التأكسج هو حالة مدمرة ناتجة عن عوامل مختلفة عند الأطفال حديثيالولادة 1. قد يؤدي الاختناق في الفترة المحيطة بالولادة و / أو اضطراب تدفق الدم الدماغي إلى تغيرات إقفارية بؤرية أو عالمية في الدماغ2. ويبلغ معدل حدوث الولادة حوالي 1.6 من كل 000 1 مولود حي، ولكنه قد يصل إلى 12.1 من كل 000 1 مولود حي في البلدان النامية. تؤدي هذه الحالة إلى ارتفاع معدل الوفيات (20٪ -50٪) ، بينما من المحتمل أن يعاني 25٪ من أولئك الذين بقوا على قيد الحياة من إعاقة عصبية طويلة الأمد مثل التخلف العقلي أو الصرع أو الشللالدماغي 4. التدخل العلاجي الوحيد الذي أثبت فعاليته في الإصابات الخفيفة إلى المتوسطة هو انخفاض حرارة الجسم العلاجي ، والذي يجب أن يبدأ في غضون 6 ساعات من الولادة5،6،7،8،9. في حين أن هذا قد يساعد في منع التغيرات الأيضية التي تؤدي إلى إصابة ثانوية ، فقد يكون هناك أيضا احتمال حدوث آثار جانبية مثل انخفاض ضغط الدم ، وقلة الصفيحات ، ووقت التخثر المطول ، والنزيف داخل الجمجمة ، وخلل النظم القلبي ، ونخر الدهون ، واختلال توازن المنحل بالكهرباء في الدم4،5. غالبا ما يكون التشخيص المبكر ل HIE عند الأطفال صعبا لأن المعايير ذاتية وتعتمد بشكل كبير على نتائج الفحص البدني ، والتي تتطور بمرور الوقت. قد يظهر التصوير بالرنين المغناطيسي تغيرات تعكس الإصابة بعد عدة أيام إلى أسابيع من الإصابة. ومع ذلك، يمكن أن تكون التغيرات المورفولوجية في التصوير بالرنين المغناطيسي T1/T2 طبيعية في ما يصل إلى ثلثي الاعتلال الدماغي المعتدل، وهي فئة الرضع الأكثر احتمالا للاستفادة من انخفاض حرارة الجسم العلاجي10. وفقا للتقارير الأخيرة ، قد يظهر التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي (MRS) تغييرات مبكرة مرتبطة ب HIE11 لحديثي الولادة. ومع ذلك، لم يتم إجراء أي توحيد أو تدقيق حتى الآن.

يعتمد العديد من الباحثين على النماذج الحيوانية لتقييم التدخلات التشخيصية أو العلاجية المحتملة لإصابة الأوعية الدموية الدماغية. الطريقة الأكثر استخداما لإنشاء احتشاء هي ربط الشريان الدماغي الأوسط للقوارض12،13. على الرغم من استخدامه غالبا لدراسة السكتة الدماغية الإقفارية لدى البالغين ، إلا أن هذا يمثل تحديا تقنيا في القوارض حديثي الولادة نظرا لصغر حجم وهشاشة الجراء في سن تعادل مرض حديثي الولادة البشري. علاوة على ذلك ، فإنه لا يمثل التغيرات الإقفارية الدماغية العالمية التي من المحتمل أن تظهر في HIE. تم استخدام نموذج Rice-Vanucci14 لربط الشريان السباتي أحادي الجانب في الفئران منذ الثمانينيات كنموذج قوارض فعال من حيث التكلفة لدراسة إصابة الدماغ نقص التأكسج. ومع ذلك ، هناك تباين كبير في التغيرات الدماغية الوعائية المبكرة وارتفاع معدل الوفيات في التجارب السابقة. تشير معظم الدراسات إلى الإصابة الدماغية في تغيرات طويلة المدى (أي بعد 24 ساعة من الإصابة) ، وهي أكثر اتساقا. تهدف هذه الدراسة إلى تطوير نهج لتقييم التغيرات الجزيئية والإشعاعية المبكرة (في غضون 6 ساعات) في نموذج الفئران من HIE. تم تصميم البروتوكول لضمان نقص التروية في سن مبكرة (مكافئ حديثي الولادة) وزيادة بقاء الجراء ، خاصة أثناء التعرض لنقص الأكسجة. تم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي / التصوير بالرنين المغناطيسي لتقييم الأدلة الإشعاعية على تغير التدفق وتغيرات الأنسجة الدماغية والتغيرات الأيضية في غضون 6 ساعات من الإصابة. كما تم إجراء تقييم مورفولوجي إجمالي لمناطق الاحتشاء. تم إجراء مزيد من التحقق من صحة التكاثر عن طريق تكرار التجارب في فضلات متعددة.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة رعاية واستخدام المؤسسي التابعة لمؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية (OMRF) (بروتوكول IACUC # 17-17). تم استخدام صغار الفئران الحوامل من إناث Sprague-Dawley في E14 في الدراسة الحالية. تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد).

1. تحضير

  1. تأقلم في منشأة قبل تسليم الفضلات.
  2. حافظ على جميع الفئران على 12 ساعة ضوء / Darkcycleand تغذية الراتشو القياسي.
  3. بعد تسليم الفضلات ، احتفظ بالجراء مع السدود الخاصة بهم. استخدم كلا الجنسين للتجارب.
  4. في سن ما بعد الولادة 10 (P10) ، قم بترتيب الجراء بشكل عشوائي إما لمجموعات زائفة أو HYE.
    ملاحظة: تم تصوير الجدول الزمني التجريبي في الشكل 1. تم إجراء جميع التجارب في نفس اليوم في P10.

2. ربط الشريان السباتي (CAL) لمجموعة HIE التجريبية

  1. ضع صغار الفئران على وسادة تسخين.
  2. ابدأ التخدير بنسبة 4٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين (0.6 لتر في المليون) باستخدام مخروط الأنف حتى يختفي منعكس القرصة. خفض تدفق الغاز إلى 0.5٪ -2٪ للحفاظ على التخدير. تأكد من أن الجراء فاقدون للوعي دون قمع الدافع التنفسي.
  3. ضع علامة على الجراء على الذيل لتحديد هويتها وقم بتقييدها برفق بشريط لاصق على الأطراف الأربعة.
  4. حلق منطقة الرقبة وتعقيمها بمسحات محلول اليود وبوفيدون بنسبة 70٪ (انظر جدول المواد).
  5. باستخدام شفرة # 11 ، قم بعمل شق رقبة خط الوسط بطول 1 سم عبر الجلد. قم بتشريح الغدة النكفية اليسرى واللفافة بعناية حتى ينكشف الشريان السباتي الأيسر. قم بتحريك الوعاء برفق باستخدام مرقئ لتحريره من اللفافة.
  6. باستخدام مرقئ صغير ، مرر خيوطا 5-0 بعناية (انظر جدول المواد) حول الوعاء ، على بعد 0.5 سم ، واربطهما بإحكام.
  7. باستخدام مقص صغير ، قم بقطع الشريان بين الغرزتين لضمان انقطاع تدفق الدم. أغلق الجلد واللفافة ب 5-0 خيوط حريرية (انظر جدول المواد).
  8. حقن البوبرينورفين (10 وحدات في 800 ميكرولتر من المحلول الملحي العادي المعقم) داخل الصفاق و 800 ميكرولتر أخرى من المحلول الملحي العادي تحت الجلد في مؤخرة الرقبة لمنع الجفاف.
    ملاحظة: يجب إكمال الإجراء في غضون 10-12 دقيقة.
  9. أعد الجراء إلى الأقفاص مع سدودها واسمح للجراء بالاستيقاظ والتعافي لمدة 1-2 ساعة.

3. إجراء جراحي زائف للمجموعة الضابطة

  1. ضع صغار الفئران على وسادة تسخين.
  2. ابدأ التخدير بنسبة 4٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين (0.6 لتر في المليون) باستخدام مخروط الأنف حتى يختفي منعكس القرصة. خفض تدفق الغاز إلى 0.5٪ -2٪ للحفاظ على التخدير. تأكد من أن الجراء فاقدون للوعي دون قمع الدافع التنفسي.
  3. ضع علامة على الجراء على الذيل لتحديد هويتها وقم بتقييدها برفق بشريط لاصق على الأطراف الأربعة.
  4. حلق منطقة الرقبة وتعقيمها بمسحات محلول اليود وبوفيدون بنسبة 70٪.
  5. باستخدام شفرة # 11 ، قم بعمل شق رقبة خط الوسط بطول 1 سم عبر الجلد ثم أغلقه بخيوط حريرية 5-0.
  6. اتبع نفس الترطيب والتسكين ورعاية ما بعد الجراحة كما هو الحال بالنسبة لمجموعة HI (الخطوات 2.8-2.9).

4. التعرض لنقص الأكسجة لكل من مجموعات CAL والوهم

  1. قم بإعداد غرفة نقص الأكسجة الشفافة المصنوعة من زجاج شبكي (انظر جدول المواد) عن طريق ربط الأنبوب بغطاء الغرفة لتوفير تدفق هواء مستمر يبلغ 6 LPM من خليط غاز نقص الأكسجة (8٪ أكسجين ، 92٪ نيتروجين).
  2. ضع وسادة ماصة زرقاء في الغرفة وضع صغار الفئران من كلتا المجموعتين على الفور في الغرفة. اسمح للجراء بالبقاء في غرفة نقص الأكسجة لمدة 45 دقيقة.
  3. اغمر الغرفة في حمام مائي بالماء الدافئ المتدفق باستمرار للحفاظ على درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية داخل الغرفة.
  4. رطب الجراء بمحلول ملحي عن طريق الفم عن طريق تزقيم 600 ميكرولتر قبل وضعها في غرفة نقص الأكسجة و 600 ميكرولتر في نهاية 45 دقيقة.
  5. قم بإزالة جميع الجراء إلى أقفاص بسدودها (تجريبية وصورية) واسمح لها بالتعافي لمدة ساعتين في غرفة بجوار مرفق تصوير الصغيرة.

5. التصوير بالرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي

  1. إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي والتصوير بالرنين المغناطيسي لتحديد وتقييم العلامات الإشعاعية والتمثيل الغذائي بعد 4 ساعات من انتهاء ربط الشريان السباتي. قم بإجراء العملية تحت التخدير مع المراقبة المستمرة للقلب والأوعية الدموية في منشأة تصوير الصغيرة.
  2. قم بتخدير كل (بنسبة 1.5٪ إيزوفلوران و 0.7 لتر / دقيقة من الأكسجين) وضعه في مسبار التصوير بالرنين المغناطيسي (انظر جدول المواد) في وضع ضعيف على وسادة ماصة زرقاء تغطي وسادة تسخين. راقب معدل تنفس باستمرار باستخدام وسادة هوائية للبطن (انظر جدول المواد).
  3. استخدم ملف سطح الرأس كمستقبل إشارة وقم بإرسال نبضات الترددات الراديوية إلى العينة من خلال ملف حجم تربيعي (القطر الداخلي 72 مم ، انظر جدول المواد).
  4. قم بإجراء التصوير بالرنين المغناطيسي لتقييم كل من التغيرات في تدفق الدم الدماغي (CBF) والتغيرات في ثوابت انتشار الماء (ADC) باتباع الطرق المنشورةسابقا 15،16،17. إجراء مورفولوجيا التصوير بالرنين المغناطيسي (T1 و T2) والانتشار والتروية لتحديد المناطق الأكثر تضررا والأقل انتشارا في الدماغ.
    ملاحظة: تتم مقارنة متوسط قيم التروية والانتشار (ADC) في كل مجموعة بين الجانب المرتبط وجانب التحكم (جانب الشريان السباتي السليم).
  5. قم بإجراء MRS باتباع الطرق المنشورةسابقا 15،17 والتحليل باستخدام برنامج مشفر داخلي باستخدام برنامج Mathematica (انظر جدول المواد).
  6. قم بقياس أطياف MR بأجزاء في المليون (جزء في المليون) عن طريق المعايرة مقابل ذروة الماء (4.78 جزء في المليون). تحديد قمم التمثيل الغذائي الرئيسية في الدماغ مثل N-acetylaspartate (NAA) عند 2.02 جزء في المليون, الكولين (Cho) في 3.22 جزء في المليون, الكرياتين (Cr) عند 3.02 جزء في المليون, وميو-الإينوزيتول عند 3.53 جزء في المليون.
    ملاحظة: تستخدم قياسات مساحة الذروة للمستقلبات لحساب النسب التالية: NAA إلى Cho (NAA / Cho) ، Cr إلى Cho (Cr / Cho) ، و Myo-Ins إلى Cho (Myo-Ins / Cho) 15.

6. تحليل المصل والأنسجة الدماغية

  1. إجراء أخذ عينات الدم بعد 5.5 ساعة بعد ربط الشريان السباتي أو الإجراء الوهمي وفقا للطرق المنشورةسابقا 18.
  2. قم بتخدير الجراء مرة أخرى باستخدام 4٪ من الأيزوفلوران.
  3. باستخدام شفرة حادة # 11 ، قم بعمل شق في البطن ، متبوعا بشق في الحجاب الحاجز لكشف القلب.
  4. إجراء أخذ عينات الدم عن طريق ثقب القلب كما هو موضحسابقا 18. باختصار ، أدخل إبرة 32 جم على حقنة سعة 1 مل في حجرة القلب اليمنى وشفط 1 مل من الدم برفق.
  5. اسمح للدم كله بالتخثر ، متبوعا بالطرد المركزي عند 1,000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. يتم فصل المصل إلى أنابيب نظيفة لأجهزة الطرد المركزي الدقيقة.
  6. اقطع رأس رأس الجرو بالكامل للتقييم الإجمالي لأمراض الدماغ ثم اغمره في الجليد لمدة دقيقتين.
  7. قم بعمل شق في فروة الرأس الظهرية من قاعدة الجمجمة إلى طرف الأنف وقشر عظام الجمجمة من جميع أنحاء الدماغ. قم بإزالة الدماغ كله السليم في طبق بتري نظيف.
  8. ضع علامة على الجانب الأيمن من الدماغ بعلامة غير سامة. ضع الدماغ مع سطح رأسي الرأس لأعلى بحيث يكون نصفي الكرة الأرضية مرئيين. باستخدام شفرة حلاقة مثلجة ، قم بتقطيع الدماغ إلى أربعة أقسام متساوية موازية للمستوى الإكليلي.
  9. اغمر أقسام الدماغ في محلول 2،3،5-ثلاثي فينيلترازوليوم كلوريد (TTC ، انظر جدول المواد) في طبق بتري مغطى بورق الألمنيوم لمنع التحسس الضوئي واحتضانه لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: يتم تحديد المناطق المحشوة بالمناطق البيضاء الخالية من صبغة TTC الحمراء.
  10. إذا كانت الاحتشاء خفية أو يصعب اكتشافها ، فقم بحقن 0.5-1 مل من TTC (1٪) في محلول ملحي مخزن بالفوسفات مباشرة في القلب الأيمن بعد شق البطن وبضع الصدر ، واتركه لمدة دقيقتين قبل قطع رأس الجرو.
  11. قم بتخزين أنسجة المخ والمصل عند -80 درجة مئوية إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من التحليل.

النتائج

كان البروتوكول الحالي لإنتاج وتقييم التغيرات الدماغية المبكرة بعد HIE سهل التنفيذ وسمح بالتصور المرضي والإشعاعي الجسيم للإصابة الدماغية في غضون 6 ساعات من الإهانة في صغار الفئران في P10. تم تصوير الخطة التجريبية في الشكل 1. تم تحليل كلا الجنسين معا ، وتم فحص...

Discussion

تم تصميم بروتوكول بحث في صغار الفئران حديثي الولادة بنجاح لتصور وتحليل العلامات المبكرة للإصابة الدماغية في HIE. حتى الآن ، هناك نقص في أدوات التقييم الموضوعية للكشف عن الإصابات الدماغية المبكرة لدى الولدان. بعد إصابة HI ، هناك مرحلة (1-6 ساعات) يكون فيها ضعف التمثيل الغذائي...

Disclosures

لا يوجد تضارب في المصالح لأي من المؤلفين.

Acknowledgements

نشكر الموظفين البيطريين في مؤسسة أوكلاهوما للأبحاث الطبية على خبرتهم ومساعدتهم في تعديل بروتوكولات رعاية.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% Normal salineFisher ScientificZ1376
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)Millipore SigmaT8877
Abdominal pneumatic pillowSA Instruments, Inc., Stony Brook, NY
Absorbent Underpads with Waterproof Moisture Barrier, 58.4 x 91.4 cm, 680 mLFisher Scientific501060566
BD 30 G Needle and syringeFisher ScientificCatalog No.14-826-10
Biospec 7.0 Tesla/30 cm horizontal-bore magnet small animal imaging systemBruker Biospin, Ettlingen, Germany
BuprenorphineProvided by veterenary medicine
Compact Thermometer with ProbeFisher ScientificS01549
Gas mixture 92% nitrogen 8% oxygenAirgas
Head surface coilBruker BioSpin MRI Gmbh, Ettlingen, Germany
Isoflurane gasProvided by veterenary medicine
Isotemp Immersion Circulator 2100Fisher ScientificDiscontinuedImmersed in water bath chamber with continous flowing water via tubing
Lead Ring Flask WeightsVWR29700-060Water bath weights to ensure rodent chamber stays submerged in water bath
Mathematica SoftwareWolfram Research, Champaign, IL, USAversion 6.0
Pedialyte Electrolyte Solution, Hydration Drink, 1 Liter, UnflavoredPedialyteObtained from CVS
Phosphate-buffered saline (DPBS, 1X), Dulbecco's formulaMillipore SigmaJ67670.AP
Plastic clear bucketWe used an old rodent housing cage- this is a good alternative: Cambro 182615CW135 Camwear Food Storage Box, 18" X 26" X 15", Model #:182615CW135
Plexiglass Rodent Restraint ChamberPedialyte/CVSVetinary medicine provided a small chamber used to restrain rodents. Approximately 6x4x4 inches
Pregnant Sprague Dawley rats at E14Charles RiverStrain Code 400
Purdue Products Betadine SwabsticksFisher Scientific19-061617
Quadrature volume coil (72-mm inner diameter)Bruker BioSpin MRI Gmbh, Ettlingen, Germany
Stoelting Silk SutureFisher ScientificCatalog No.10-000-656
Vicryl 5-0 sutureFisher Scientific NC1985424

References

  1. Douglas-Escobar, M., Weiss, M. D. Hypoxic-ischemic encephalopathy: A review for the clinician. JAMA Pediatrics. 169 (4), 397-403 (2015).
  2. Bano, S., Chaudhary, V., Garga, U. C. Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy: A radiological review. Journal of Pediatric Neurosciences. 12 (1), 1-6 (2017).
  3. Lee, A. C., et al. Intrapartum-related neonatal encephalopathy incidence and impairment at regional and global levels for 2010 with trends from. Pediatric Research. 74, 50-72 (2013).
  4. American College of Obstetricians and Gynecologists Task Force on Neonatal Encephalopathy. Executive summary: Neonatal encephalopathy and neurologic outcome, second edition. Report of the American College of Obstetricians and Gynecologists Task Force on Neonatal Encephalopathy. Obstetrics & Gynecology. 123 (4), 896-901 (2014).
  5. Jacobs, S. E., et al. Whole-body hypothermia for term and near-term newborns with hypoxic-ischemic encephalopathy: A randomized controlled trial. Archives of Pediatrics and Adolescent. 165 (8), 692-700 (2011).
  6. Drury, P. P., Gunn, E. R., Bennet, L., Gunn, A. J. Mechanisms of hypothermic neuroprotection. Clinics in Perinatology. 41 (1), 161-175 (2014).
  7. Higgins, R. D., et al. Hypothermia and other treatment options for neonatal encephalopathy: An executive summary of the Eunice Kennedy Shriver NICHD workshop. The Journal of Pediatrics. 159 (5), 851-858 (2011).
  8. Patel, S. D., et al. Therapeutic hypothermia and hypoxia-ischemia in the term-equivalent neonatal rat: characterization of a translational preclinical model. Pediatric Research. 78 (3), 264-271 (2015).
  9. Park, W. S., et al. Hypothermia augments neuroprotective activity of mesenchymal stem cells for neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy. PLoS One. 10 (3), 0120893 (2015).
  10. Agut, T., et al. Early identification of brain injury in infants with hypoxic ischemic encephalopathy at high risk for severe impairments: Accuracy of MRI performed in the first days of life. BMC Pediatrics. 14, 177 (2014).
  11. Guo, L., et al. Early identification of hypoxic-ischemic encephalopathy by combination of magnetic resonance (MR) imaging and proton MR spectroscopy. Experimental and Therapeutic Medicine. 12 (5), 2835-2842 (2016).
  12. Ashwal, S., Cole, D. J., Osborne, S., Osborne, T. N., Pearce, W. J. A new model of neonatal stroke: reversible middle cerebral artery occlusion in the rat pup. Pediatric neurology. 12 (3), 191-196 (1995).
  13. Larpthaveesarp, A., Gonzalez, F. F. Transient middle cerebral artery occlusion model of neonatal stroke in P10 rats. Journal of Visualized Experiments. (122), e54830 (2017).
  14. Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Annals of Neurology. 9 (2), 131-141 (1981).
  15. Bozza, F. A., et al. Sepsis-associated encephalopathy: A magnetic resonance imaging and spectroscopy study. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 30 (2), 440-448 (2010).
  16. Garteiser, P., et al. Multiparametric assessment of the anti-glioma properties of OKN007 by magnetic resonance imaging. Journal of Magnetic Resonance Imaging. 31 (4), 796-806 (2010).
  17. Towner, R. A., et al. Anti-inflammatory agent, OKN-007, reverses long-term neuroinflammatory responses in a rat encephalopathy model as assessed by multi-parametric MRI: implications for aging-associated neuroinflammation. Geroscience. 41 (4), 483-494 (2019).
  18. Adeghe, A. J., Cohen, J. A better method for terminal bleeding of mice. Lab Animal. 20 (1), 70-72 (1986).
  19. Rodriguez, M., Valez, V., Cimarra, C., Blasina, F., Radi, R. Hypoxic-ischemic encephalopathy and mitochondrial dysfunction: Facts, unknowns, and challenges. Antioxiddants & Redox Signaling. 33 (4), 247-262 (2020).
  20. Vannucci, R. C., Towfighi, J. Experimental models of hypothermic circulatory arrest. Seminars in Pediatric Neurology. 6 (1), 48-54 (1999).
  21. Sarkar, S., Barks, J. D. Systemic complications and hypothermia. Seminars in Fetal and Neonatal Medicine. 15 (5), 270-275 (2010).
  22. Chiamulera, C., Terron, A., Reggiani, A., Cristofori, P. Qualitative and quantitative analysis of the progressive cerebral damage after middle cerebral artery occlusion in mice. Brain Research. 606 (2), 251-258 (1993).
  23. Hatfield, R. H., Mendelow, A. D., Perry, R. H., Alvarez, L. M., Modha, P. Triphenyltetrazolium chloride (TTC) as a marker for ischaemic changes in rat brain following permanent middle cerebral artery occlusion. Neuropathology and Applied Neurobiology. 17 (1), 61-67 (1991).
  24. Goldlust, E. J., Paczynski, R. P., He, Y. Y., Hsu, C. Y., Goldberg, M. P. Automated measurement of infarct size with scanned images of triphenyltetrazolium chloride-stained rat brains. Stroke. 27 (9), 1657-1662 (1996).
  25. Robertson, N. J., Thayyil, S., Cady, E. B., Raivich, G. Magnetic resonance spectroscopy biomarkers in term perinatal asphyxial encephalopathy: From neuropathological correlates to future clinical applications. Current Pediatric Reviews. 10 (1), 37-47 (2014).
  26. Gano, D., et al. Evolution of pattern of injury and quantitative MRI on days 1 and 3 in term newborns with hypoxic-ischemic encephalopathy. Pediatric Research. 74 (1), 82-87 (2013).
  27. da Silva, L. F., Hoefel Filho, J. R., Anes, M., Nunes, M. L. Prognostic value of 1H-MRS in neonatal encephalopathy. Pediatric Neurology. 34 (5), 360-366 (2006).
  28. van de Looij, Y., Chatagner, A., Huppi, P. S., Gruetter, R., Sizonenko, S. V. Longitudinal MR assessment of hypoxic ischemic injury in the immature rat brain. Magnetic Resonance in Medicine. 65 (2), 305-312 (2011).
  29. Shibasaki, J., et al. Changes in brain metabolite concentrations after neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy. Radiology. 288 (3), 840-848 (2018).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

HIE

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved