JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

في هذا البروتوكول ، تم تحسين تقنية معالجة زيت الضأن ل Epimedii folium (EF) من خلال تطبيق منهجية سطح التصميم والاستجابة التجريبية Box-Behnken ، وتم التحقيق بشكل أولي في تأثير EF الخام والمحسنة المستخرجة بالماء على التطور الجنيني لسمك الزرد.

Abstract

كطب صيني تقليدي (TCM) ، فإن Epimedii folium (EF) له تاريخ في الطب والغذاء > عمره 2000 عام. سريريا ، غالبا ما يستخدم EF المعالج بزيت لحم الضأن كدواء. في السنوات الأخيرة ، زادت تدريجيا تقارير مخاطر السلامة وردود الفعل السلبية للمنتجات التي تستخدم EF كمادة خام. يمكن أن تؤدي المعالجة إلى تحسين سلامة الطب الصيني التقليدي بشكل فعال. وفقا لنظرية الطب الصيني التقليدي ، يمكن أن تقلل معالجة زيت الضأن من سمية EF وتعزز تأثيرها التنغيم على الكلى. ومع ذلك ، هناك نقص في البحث والتقييم المنهجي لتكنولوجيا معالجة زيت الضأن EF. في هذه الدراسة ، استخدمنا منهجية سطح التصميم والاستجابة التجريبية Box-Behnken لتحسين المعلمات الرئيسية لتكنولوجيا المعالجة من خلال تقييم محتويات المكونات المتعددة. أظهرت النتائج أن تقنية معالجة زيت الضأن المثلى ل EF كانت على النحو التالي: تسخين زيت لحم الضأن عند 120 درجة مئوية ± 10 درجة مئوية ، وإضافة EF الخام ، وقليه برفق إلى 189 درجة مئوية ± 10 درجة مئوية حتى يصبح لامعا بالتساوي ، ثم إزالته وتبريده. لكل 100 كجم من EF ، يجب استخدام 15 كجم من زيت لحم الضأن. تمت مقارنة السمية والمسخة لمستخلص مائي من EF الخام وزيت الضأن المعالج في نموذج نمو جنين الزرد. أظهرت النتائج أن مجموعة الأعشاب الخام كانت أكثر عرضة للتسبب في تشوهات الزرد ، وكان تركيز EF المميت نصف الأقصى أقل. في الختام ، كانت تقنية معالجة زيت الضأن المحسنة مستقرة وموثوقة ، مع إمكانية تكرار جيدة. عند جرعة معينة ، كان المستخلص المائي من EF ساما لتطور أجنة الزرد ، وكانت السمية أقوى بالنسبة للدواء الخام من الدواء المعالج. أظهرت النتائج أن معالجة زيت الضأن قللت من سمية الخام EF. يمكن استخدام هذه النتائج لتحسين الجودة والتوحيد والسلامة السريرية ل EF المعالج بزيت الضأن.

Introduction

Epimedii folium (EF) هي الأوراق المجففة ل Epimedium brevicornu Maxim. ، Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) مكسيم ، إبيمديوم بوبيسنسنس مكسيم ، أو إبيميديوم كوريانوم ناكاي. يمكن استخدام EF لعلاج هشاشة العظام ومتلازمة انقطاع الطمث وكتل الثدي وارتفاع ضغط الدم وأمراض القلب التاجية وأمراض أخرى1. كطب صيني تقليدي (TCM) ، تتمتع EF بتاريخ في الطب والغذاء لأكثر من 2000 عام. نظرا لانخفاض سعره وتأثيره الملحوظ في تنغيم الكلى ، فإنه يستخدم على نطاق واسع في الأدوية والأطعمة الصحية. تتم معالجة EF عن طريق قليها بزيت لحم الضأن ، وهي عملية تم وصفها لأول مرة في نظرية معالجة Lei Gong التي كتبها Lei Xiao في فترة Liu Song2. تختلف كفاءة EF الخام و EF المقلي تماما. يبدد EF الخام الروماتيزم بشكل أساسي ، في حين أن EF المقلي يسخن الكلى لتعزيز يانغ3. في الوقت الحاضر ، يستخدم EF على نطاق واسع كمادة خام في الأدوية والأطعمة الصحية. هناك 399 دواء صيني مدرج ، وتسعة أغذية صحية مستوردة ، و 455 من الأطعمة الصحية المحلية مع EF كمادة خام4. هذه المواد الطبية لديها آفاق تطبيق كبيرة. ومع ذلك ، في السنوات الأخيرة ، كانت هناك تقارير متزايدة عن ردود الفعل السلبية وإصابة الكبد البشري الناجمة عن الأطعمة الصحية وأدوية براءات الاختراع الصينية التي تستخدم EF كمادة خام ، وقد ذكرت دراسات السمية ذات الصلة5،6،7 أن EF كمادة خام لها مخاطر محتملة على السلامة.

تشير المعالجة الطبية الصينية إلى التقنيات الصيدلانية التي يمكن أن تقلل بشكل فعال أو تقضي على السمية وتحسن سلامة الطب الصيني التقليدي. طريقة المعالجة التقليدية ل EF هي القلي السريع بزيت لحم الضأن ، مما يقلل من سمية EF ويعزز تأثيره في تدفئة الكلى وتعزيز يانغ8. يتم تضمين طريقة المعالجة هذه في دستور الأدوية الصيني ومواصفات المعالجة المختلفة1. يتم تحديد عملية EF فقط على النحو التالي: لكل 100 كجم من EF ، تتم إضافة 20 كجم من الزيت الأمنيوسي (المكرر) ، ويتم إطلاقه بشكل خفيف حتى يصبح موحدا ولامعا1. لا توجد معلمات صارمة لطريقة معالجة EF في المعايير المذكورة أعلاه ، لذلك لم يتم توحيد مواصفات المعالجة المحلية لتوفير الاتساق. لذلك ، سيكون من المفيد إجراء دراسة منهجية لعملية EF. في هذا البحث ، تم استخدام طريقة سطح التصميم والاستجابة التجريبية Box-Behnken لتحسين تقنية معالجة EF.

التصميم التجريبي Box-Behnken هو طريقة تستخدم عادة لتحسين العوامل في العملية. يمكن تحسين معلمات الاستخراج من خلال إنشاء العلاقة الوظيفية بين عوامل ملاءمة معادلة الانحدار المتعددة وقيم التأثير. في الآونة الأخيرة ، تم استخدام هذه الطريقة على نطاق واسع لدراسة استخراج الطب الصيني التقليدي5،6،7 ومعالجة9،10،11. أبلغت دراسات مختلفة عن طرق تحضير الطب الصيني التقليدي التي تتضمن معالجة الملح ومعالجة النبيذ والقلي السريع وفقا لتصميم Box-Behnken ، مثل Psoraleae fructus 12 المعالج بالملح ، و Cnidii fructus13 المعالج بالنبيذ ، و Cinnamomi ramulus14 المحمص. لقد قللت هذه الطريقة من وقت الاختبار ، ودقة الاختبار العالية ، وهي مناسبة للاختبارات متعددة العوامل ومتعددة المستويات. الطريقة أبسط من طريقة اختبار التصميم المتعامد وأكثر شمولا من طريقة التصميم الموحدة15. يمكن للعلاقات التي تم الحصول عليها تحديد القيمة المتوقعة لأي نقطة اختبار ضمن نطاق الاختبار ، وهي ميزة كبيرة. يمكن استخدام نموذج الزرد لاختبار ما إذا كانت EF أقل سمية بعد المعالجة.

في دراسات سمية الطب الصيني التقليدي ، يتمتع نموذج الزرد بمزايا مزدوجة تتمثل في الإنتاجية العالية لتجارب الخلايا وأوجه التشابه مع تجارب القوارض16. يتميز هذا النموذج بصغر حجمه وارتفاع معدل التفريخ ودورة التكاثر القصيرة وسهولة التكاثر. يمكن استخدام النموذج في التجارب المتزامنة واسعة النطاق في لوحات زراعة الخلايا ، وجرعة الدواء التجريبية صغيرة ، والدورة التجريبية قصيرة ، والتكلفة منخفضة ، والعملية التجريبية بأكملها سهلة الملاحظة والتشغيل17. أجنة الزرد شفافة وتتطور بسرعة. لذلك ، يمكن ملاحظة السمية والآثار المسخية للأدوية على الأنسجة الحشوية في مراحل النمو المختلفة مباشرة تحت المجهر18. يصل التماثل الجيني بين الزرد والبشر إلى 85٪ 18. يشبه مسار نقل إشارة الزرد مسار البشر18. التركيب البيولوجي والوظيفة الفسيولوجية لسمك الزرد متشابهان إلى حد كبير مع تلك الموجودة في الثدييات18. لذلك ، يمكن أن يوفر نموذج الزرد لاختبار المخدرات تجريبية موثوقة وقابلة للتطبيق بشكل كامل على البشر19.

في هذه الدراسة ، استخدمنا منهجية سطح استجابة التصميم Box-Behnken لتحسين كمية ودرجة حرارة زيت الضأن ودرجة حرارة القلي المستخدمة في تقنية معالجة EF ، مع محتويات icariin و epimedin A و epimedin B و epimedin C و baohuoside I كمؤشرات تقييم. تم استخدام نموذج الزرد لاستكشاف أولي لتأثير مستخلص الماء EF على التطور الجنيني لسمك الزرد قبل وبعد المعالجة لتقييم تأثير التوهين للمعالجة على EF.

Protocol

أجريت جميع التجارب المتعلقة بالحيوان بموافقة من لجنة أخلاقيات التجارب التابعة لمعهد تشونغتشينغ للطب الصيني التقليدي (رقم شهادة مراجعة أخلاقيات المختبر: ZJS2022-03).

1. تحديد المكونات النشطة بيولوجيا

ملاحظة: الأنواع المستخدمة في هذا البحث كانت Epimedium sagittatum ، وتم جمع العينات في مقاطعة Fengdu ، تشونغتشينغ. تم تحديد العينة على أنها جزء جاف فوق سطح الأرض من E. sagittatum (Sieb. et Zucc.) مكسيم. من قبل باحثين من معهد الطب البيولوجي ، معهد تشونغتشينغ للطب الصيني التقليدي.

  1. قم بإعداد محلول منتج التحكم عن طريق وزن الكمية المناسبة من كل مادة مرجعية بدقة ، وهي icariin و epimedin A (EA) و epimedin B (EB) و epimedin C (EC) و baohuoside I (BI) ، باستخدام ميزان تحليلي إلكتروني ، وتذوب في الميثانول. باستخدام هذه ، قم بإعداد محلول مخزون مرجعي مختلط يحتوي على 381.61 ميكروغرام / مل إيكارين ، 124.14 ميكروغرام / مل EA ، 110.24 ميكروغرام / مل EB ، 1091.75 ميكروغرام / مل EC ، و 184.98 ميكروغرام / مل BI.
  2. قم بإعداد حل منتج الاختبار عن طريق سحق EF من خلال غربال رقم 3. ضع ما يقرب من 0.2 جم (باستخدام ميزان تحليلي إلكتروني) من EF المسحوق في دورق Erlenmeyer سدادة ، وأضف 20 مل من الإيثانول المخفف ، ثم الموجات فوق الصوتية عند طاقة 400 واط وتردد 50 كيلو هرتز لمدة 1 ساعة. رج العبوة جيدا ، وقم بالمرور عبر مرشح غشاء 0.22 ميكرومتر للحصول على محلول الاختبار.
  3. أداء اللوني على النحو التالي. استخدم كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) مع عمود C18 بأبعاد 4.6 مم × 250 مم وقطر داخلي 5 ميكرومتر. استخدم الأسيتونيتريل كمرحلة متنقلة A وماء فائق النقاء كمرحلة متنقلة B. استخدم معلمات شطف التدرج التالية: 0-30 دقيقة ، 24٪ A إلى 26٪ A ؛ 30-31 دقيقة ، 26٪ أ إلى 45٪ أ ؛ 31-45 دقيقة ، 45٪ A إلى 47٪ A. استخدم طولا موجيا للكشف يبلغ 220 نانومتر (للكاشف المستخدم ، انظر جدول المواد). حافظ على درجة حرارة العمود عند 30 درجة مئوية والسرعة الحالية عند 1.0 مل / دقيقة ، واستخدم حجم عينة 10 ميكرولتر.
  4. للتحقق من العلاقة الخطية، استخدم الحل المرجعي المختلط كما في الخطوة 1.1 المخففة مرتين و4 مرات و8 مرات و16 مرة و32 مرة، ل icariin وEA وEB وEC وBI، على التوالي. استخدم الأسيتونيتريل كمرحلة متنقلة A والماء عالي النقاء كمرحلة متنقلة B.
  5. استخدم معلمات شطف التدرج التالية: 0-30 دقيقة ، 24٪ A إلى 26٪ A ؛ 30-31 دقيقة ، 26٪ أ إلى 45٪ أ ؛ 31-45 دقيقة ، 45٪ A إلى 47٪ A. استخدم طولا موجيا للكشف يبلغ 220 نانومتر (للكاشف المستخدم ، انظر جدول المواد). حافظ على درجة حرارة العمود عند 30 درجة مئوية والسرعة الحالية عند 1.0 مل / دقيقة واستخدم حجم عينة 10 ميكرولتر. أخيرا ، سجل مناطق الذروة. ارسم الانحدار الخطي مع التركيز المرجعي (المحور السيني ، ميكروغرام / مل) كإحداثي ومنطقة الذروة (المحور ص) كإحداثي باستخدام برنامج احترافي (انظر جدول المواد).
  6. قم بإجراء اختبار الدقة عن طريق قياس محلول التحكم المختلط ست مرات متتالية بواسطة HPLC باستخدام الظروف الكروماتوغرافية الموضحة في الخطوة 1.3. سجل وقت الكشف ومناطق الذروة لكل تركيبة كيميائية ، واحسب الانحرافات المعيارية النسبية (RSD) لمناطق الذروة لتقييم الدقة (قابلية التكاثر) باستخدام الصيغة أدناه:
    RSD٪ = الانحراف المعياري (SD) / المتوسط الحسابي للنتائج المحسوبة (X) × 100٪
  7. لإجراء اختبار قابلية التكاثر ، قم بوزن مسحوق EF بدقة ، وقم بإعداد ستة أجزاء من محلول منتج الاختبار بالتوازي وفقا للطريقة الواردة في الخطوة 1.2. إخضاع الحلول المعدة ل HPLC في ظل الظروف الكروماتوغرافية المعروضة في الخطوة 1.3. سجل أوقات الاحتفاظ ومناطق الذروة لكل تركيبة كيميائية واحسب كميات كل مركب من منحنى قياسي (مناطق الذروة مقابل التركيزات). احسب RSD٪ على النحو الوارد أعلاه.
  8. لإجراء اختبار الثبات ، قم بتخزين محاليل الاختبار في درجة حرارة الغرفة ، وقم بقياس محتوياتها بطريقة HPLC الموضحة في الخطوة 1.3 عند 0 ساعة و 2 ساعة و 4 ساعات و 8 ساعات و 12 ساعة و 24 ساعة بعد التحضير لتقييم الاستقرار. سجل أوقات الاحتفاظ ومناطق الذروة لكل تركيبة كيميائية واحسب RSD٪ من مناطق الذروة على النحو الوارد أعلاه.
  9. لإجراء اختبار استعادة العينة، قم بوزن 0.2 غرام من مسحوق EF في دورق Erlenmeyer سدادة لستة تكرارات. أضف كمية مناسبة من المحلول المرجعي (كمية المادة المرجعية المضافة إلى العينة تعادل 100٪ من المحتوى المعروف للعينة) وقم بإعداد محلول الاختبار وفقا للطريقة الموضحة في الخطوة 1.2.
  10. حقن العينات في الكروماتوجراف وتحليلها وفقا للظروف الكروماتوغرافية في الخطوة 1.3. سجل مناطق الذروة ، واحسب متوسط قيم الاسترداد و RSD٪ على النحو التالي:
    معدل استرداد العينة المسننة = (محتوى العينة المسننة - محتوى العينة) / مقدار العينة × 100٪

2. تحسين تقنية معالجة زيت الضأن EF باستخدام منهجية سطح استجابة التصميم Box-Behnken

  1. حدد المعلمات الرئيسية في معالجة EF ، مثل كمية زيت لحم الضأن (A ؛ 15٪ -35٪) ، ودرجة حرارة زيت لحم الضأن (B ؛ 50-120 درجة مئوية) ، ودرجة حرارة القلي (C ؛ 80-300 درجة مئوية) ، كعوامل مؤثرة. استخدم الدرجات الشاملة لمحتوى icariin و EA و EB و EC و BI كفهارس تقييم. النسبة المئوية لزيت لحم الضأن هنا هي النسبة المئوية للكتلة.
  2. استخدم برنامج تحليل سطح الاستجابة (انظر جدول المواد) لتصميم تجارب سطح استجابة Box-Behnken ، واستكشاف سطح الاستجابة التربيعي ، وبناء نموذج متعدد الحدود من الدرجة الثانية. حدد تصميم Box-Behnken الجديد ، واضبط خيار العوامل الرقمية على 3 ؛ اضبط العوامل A و B و C. انقر فوق متابعة. قم بتعيين خيار الردود إلى 1 (وهي النتيجة الشاملة). انقر فوق متابعة لإكمال التصميم. تم التخطيط لما مجموعه 17 تجربة (انظر الجدول 1).
    ملاحظة: للاطلاع على المتغيرات المستقلة والتابعة، إلى جانب مستوياتها المنخفضة والمتوسطة والعالية، انظر الجدول 2.
  3. معالجة EF وفقا للمعايير المحددة في الجدول 1 ؛ على سبيل المثال ، بالنسبة للطلب رقم 1 ، قم بوزن زيت لحم الضأن المكرر بنسبة 15٪ فولت / فولت ، ثم سخنه إلى 50 درجة مئوية لإذابته. يضاف EF الخام إلى لحم الضأن المذاب ، ويقلب على نار خفيفة (190 درجة مئوية) حتى يصبح لامعا بالتساوي ، ثم يرفع ويبرد. أجرى 17 عملية تجريبية. تم الحصول على ما مجموعه 17 مجموعة من المنتجات المعالجة EF في هذا العمل.
    ملاحظة: زيت لحم الضأن صلب في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) ويذوب في سائل عند تسخينه. يمكن استخدام زيت لحم الضأن في الحالة السائلة كسواغ.
  4. قم بإعداد حلول الاختبار للمنتجات المصنعة وفقا للطريقة الموضحة في الخطوة 1.2. ثم قم بتحليلها باستخدام HPLC وفقا للظروف الكروماتوغرافية الموضحة في الخطوة 1.3. سجل أوقات الاحتفاظ ومناطق الذروة لكل تركيبة كيميائية ، واحسب محتويات icariin و EA و EB و EC و BI في كل حل اختبار مقابل منحنى قياسي خارجي. استخدم صيغة حساب النتيجة الشاملة أدناه لحساب الدرجات الشاملة للمجموعات التجريبية ال 17:
    الدرجة الشاملة = Z / Zكحد أقصى × 0.5 + BI/ BI بحد أقصى × 0.5
    حيث Z هو مجموع محتويات icariin و EA و EB و EC ؛ Zmax هي القيمة القصوى لمجموع محتويات icariin و EA و EB و EC في 17 مجموعة تجريبية ؛ BI هو محتوى BI. و BImax هي القيمة القصوى لمحتوى BI في 17 مجموعة تجريبية.
  5. استيراد نتائج التسجيل الشاملة لمجموعات التجارب ال 17 إلى برنامج تحليل البيانات (انظر جدول المواد) لتحليل البيانات التجريبية. ضمن عناصر التقييم، حدد خيار ترتيب العملية التربيعية وخيار نوع النموذج متعدد الحدود.

3. اختبار تأثير المعالجة على التطور الجنيني لسمك الزرد

  1. إعداد العينة
    1. سحق الخام ومعالجة EF من خلال غربال رقم 3 (انظر جدول المواد). إلى 100 جم من كل عينة EF ، أضف 1000 مل من الماء عالي النقاء. انقع EF لمدة 0.5 ساعة ، وقم بغلي الماء مرتين لمدة 30 دقيقة لكل منهما ، ثم قم بالتصفية باستخدام ورق الترشيح.
    2. الجمع بين الترشيحات وتركيز العينة عن طريق التسخين. أضف الماء عالي النقاء إلى حجم نهائي يبلغ 100 مل للحصول على حلول مخزون EF (PEF ، 1 جم / مل) والخام EF (CEF ، 1 جم / مل). قياس كمية الدواء الخام في كل محلول مخزون.
    3. ضع حصصا من 1 مل و 1.5 مل و 2.5 مل و 5 مل و 7.5 مل في قوارير حجمية سعة 10 مل ، ثم أضف ماء عالي النقاء إلى الحجم لإعداد محاليل الاختبار بتركيزات 100 مجم / مل ، 150 مجم / مل ، 200 مجم / مل ، 250 مجم / مل ، 500 مجم / مل ، و 750 مجم / مل لدراسة السمية الجنينية لسمك الزرد.
      ملاحظة: تم تحضير تركيزات محاليل الاختبار بالرجوع إلى الأدبيات ذات الصلة 20،21 وبإجراء تجارب أولية لإعطاء تدرج التركيز10 أضعاف المستخدم في علم السموم الطبيعي. وكان المركز عينة غير مجهزة، وكان صندوق PEF عينة أعدت بأفضل تكنولوجيا المعالجة الموصوفة في القسم 2.
  2. تربية الزرد وعلاج الأجنة21
    1. تكييف الزرد من النوع البري (انظر جدول المواد) في درجة حرارة خاضعة للرقابة لمدة 2 أيام ، والاحتفاظ بها في حوض السمك المتدفق في درجة الحموضة 7.0-7.4 وإطعامهم مرتين يوميا.
      ملاحظة: تم تثبيط تكوين الميلانين في الزرد بإضافة 1-فينيل-2-ثيوريا بتركيز 0.003٪ (كتلة / حجم) إلى وسط الاستزراع ، مما أبقى أجسامهم شفافة للمراقبة المورفولوجية.
    2. اختر الزرد البري الخصب البالغ في المساء وافصله باستخدام الحواجز في صناديق التزاوج. قم بإزالة الحواجز في صباح اليوم التالي ، واترك السمك يفرخ لمدة 30 دقيقة. جمع البيض المخصب مع قطارة كل 15 دقيقة. في المجموع ، تم جمع 520 جنينا بريا سليما. احتفظ بأجنة الزرد في حاضنة عند 28.5 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
    3. تعيين الأجنة السليمة بشكل عشوائي في 24 ساعة بعد الإخصاب (hpf) إلى 13 مجموعة ، جنبا إلى جنب مع مجموعة واحدة ، نقع بشكل منفصل في 10 مل من كل من الحلول التالية في طبق الاستزراع: PEF: 100 ميكروغرام / مل ، 150 ميكروغرام / مل ، 200 ميكروغرام / مل ، 250 ميكروغرام / مل ، 500 ميكروغرام / مل ، 750 ميكروغرام / مل ؛ CEF: 100 ميكروغرام / مل ، 150 ميكروغرام / مل ، 200 ميكروغرام / مل ، 250 ميكروغرام / مل ، 500 ميكروغرام / مل ، 750 ميكروغرام / مل. تعامل مع مجموعة التحكم الفارغة مع الوسيط كحل. احتوت كل مجموعة على 40 جنينا في هذه الدراسة.
      ملاحظة: التركيب المتوسط هو 0.15 M NaCl و 5 mM KCl و 0.25 mMNa2 HPO 4 و 0.45 mM KH 2 PO 4 و 1.3 mM CaCl2و 1.0 mM MgSO 4 و 4 mM NaHCO3.
    4. استزرع الزرد في حاضنة درجة حرارة ثابتة تصل إلى 120 حصان. عد عدد اليرقات الميتة كل يوم ، ولاحظ مورفولوجيا الأعضاء الرئيسية لليرقات في كل مجموعة تجريبية تحت المجهر المجسم (شريط المقياس = 500 ميكرومتر ، انظر جدول المواد) ، واحسب تركيز نصف الموت (LC50) لسمك الزرد عند 72 hpf باستخدام برنامج تحليل البيانات (انظر جدول المواد).

النتائج

نتائج التحقيق المنهجي
لوحظت علاقة خطية بين تركيز icariin و EA و EB و EC و BI ومناطق الذروة الكروماتوغرافية (انظر الجدول 3). كانت قيم RSD٪ (n = 6) لمناطق الذروة الكروماتوغرافية ل icariin و EA و EB و EC و BI 0.28٪ و 1.22٪ و 0.65٪ و 1.67٪ و 1.06٪ على التوالي ، مما يشير إلى أن دقة قياسات HPLC كانت جيدة. كانت قيم R...

Discussion

المتغيرات المستقلة وتحديد مستوياتها
تم وصف تقنية معالجة EF فقط في إصدار 2020 من دستور الأدوية الصيني ومواصفات معالجة الأدوية الصينية المحلية المنشورة من قبل 26 مقاطعة وبلدية ومنطقة ذاتية الحكم في جميع أنحاء البلاد1. يتضمن الوصف الخطوات التالية: أخذ زيت لحم الضأن وتسخي...

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

Acknowledgements

يتم دعم هذا العمل من قبل مشروع أعمال البحث العلمي الأساسي لأكاديمية تشونغتشينغ للطب الصيني التقليدي (رقم المشروع: jbky20200013) ، ومشروع توجيه حوافز الأداء لمؤسسات البحث العلمي في تشونغتشينغ (رقم المشروع: cstc2021jxjl 130025) ، ومشروع بناء الانضباط الرئيسي للجنة الصحة البلدية في تشونغتشينغ لمعالجة المواد الطبية الصينية.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileFisher197164
Baohuoside figure-materials-103 (Bfigure-materials-195 ) Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20042402
Chromatographic columnWaters CorporationSymmetry C18
Design Expert softwareStat- Ease Inc., Minneapolis, MNTrial Version8.0.6.1
DetectorWaters Corporation2998
DisintegratorHefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.S-FS553
Electronic analytical balanceMettler-Toledo International Inc.MS205DU
Epimedin A (EA)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-21112118
Epimedin B (EB)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080403
Epimedin C (EC)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080310
EthanolChongqing Chuandong Chemical ( Group ) Co., Ltd.20180801
Graphpad softwareGraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA6.02
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)Waters Corporation2695
IcariinChengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.21091401
MethanolChongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd.20171101
Microporous membraneTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.0.22μm
Mutton oilKuoshan Zhiniu Fresh Food Store20211106
Office Excel office softwareMicrosoftOffice Excel 2021
Pharmacopoeia sieveShaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.R40/3
Pure water machineChongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd.AT Sro 10A
Qualitative filter paperShanghai Leigu Instrument Co., Ltd.18cm
StereomicroscopeCarl Zeiss, Oberkochen, GermanyStemi 2000
Ultrasonic cleanerBranson Ultrasonics (Shanghai) Co.,Ltd.BUG25-12
ZebrafishChina Zebrafish Resource Center (CZRC)The AB strain

References

  1. Chinese Pharmacopoeia Commission. . Chinese Pharmacopoeia. Volume I. , (2020).
  2. Wang, X. T. . Collection of Traditional Chinese Medicine Processing Methods. , (1998).
  3. Chen, L. L., Jia, X. B., Jia, D. S. Advances in studies on processing mechanism of Epimedii Folium. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 12 (12), 2108-2111 (2010).
  4. Zhao, W., et al. Optimized extraction of polysaccharides from corn silk by pulsed electric field and response surface quadratic design. Journal of The Science of Food and Agriculture. 91 (12), 2201-2209 (2011).
  5. Zhao, L. C., et al. The use of response surface methodology to optimize the ultrasound-assisted extraction of five anthraquinones from Rheum palmatum L. Molecules. 16 (7), 5928-5937 (2011).
  6. Mao, W. H., Han, L. J., Shi, B. Optimization of microwave assisted extraction of flavonoid from Radix Astragali using response surface methodology. Separation Science and Technology. 43 (12), 671-681 (2008).
  7. Liu, W., et al. Optimization of total flavonoid compound extraction from Gynura medica leaf using response surface methodology and chemical composition analysis. International Journal of Molecular Sciences. 11 (11), 4750-4763 (2010).
  8. Guo, G. L., et al. Research progress on processing mechanism of Epimedium fried with sheep fat oil based on warming kidney and promoting yang. Journal of Liaoning University of TCM. 22 (07), 1-5 (2020).
  9. Shen, X. J., Zhou, Q., Sun, L. -. L., Dai, Y. -. P., Yan, X. -. S. Optimization for cutting procedure of astragali radix with Box-Behnken design and response surface method. China Journal of Chinese Materia Medica. 39 (13), 2498-2503 (2014).
  10. Wang, L. H., et al. Optimization of processing technology of honey wheat bran based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 52 (12), 3538-3543 (2021).
  11. Zhang, J. B., et al. Study on integrated process of producing area and processing production for Paeoniae Radix Alba based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (18), 5657-5662 (2022).
  12. Li, N., Zhang, X. M., Yao, Y. Y., Chen, Y. L., Fan, Q. Optimization of processing technology for Psoraleae Fructus by D-optimal response surface methodology with UHPLC. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 39 (05), 42-44 (2022).
  13. Jia, Y. Q., et al. Optimization of processing technology with wine of Cnidii Fructus by AHP-entropy weight method combined with response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 10, 2338-2343 (2022).
  14. Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Cinnamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (08), 1838-1842 (2022).
  15. Wang, W. D., et al. Optimization extraction of effective constituents from Epimedii Herba based on central composite design-response surface methodology and orthogonal experimental design. Lishizhen Medicine and Materia Medica. 21 (11), 2766-2768 (2010).
  16. Yang, L., et al. Zebrafish embryos as models for embryotoxic and teratological effects of chemicals. Reproductive Toxicology. 28 (2), 245-253 (2009).
  17. Kanungo, J., Cuevas, E., Ali, S. F., Paule, M. G. Zebrafish model in drug safety assessment. Current Pharmaceutical Design. 20 (34), 5416-5429 (2014).
  18. Jayasinghe, C. D., Jayawardena, U. A. Toxicity assessment of herbal medicine using zebrafish embryos: A systematic review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 7272808 (2019).
  19. Scholz, S. Zebrafish embryos as an alternative model for screening of drug induced organ toxicity. Archives of Toxicology. 87 (5), 767-769 (2013).
  20. Ling, J., et al. Analysis of Folium Epimedium toxicity in combination with Radix Morindae Officinalis based on zebrafish toxicity/metabolism synchronization. Acta Pharmaceutica Sinica. 53 (1), 74 (2018).
  21. Wang, Y., et al. Tri-n-butyl phosphate delays tissue repair by dysregulating neutrophil function in zebrafish. Toxicology and Applied Pharmacology. 449, 116114 (2022).
  22. Sheng, Z. L., Li, J. C., Li, Y. H. Optimization of forsythoside extraction from Forsythia suspensa by Box-Behnken design. African Journal of Biotechnology. 10 (55), 11728-11737 (2011).
  23. Pang, X., et al. Prenylated flavonoids and dihydrophenanthrenes from the leaves of Epimedium brevicornu and their cytotoxicity against HepG2 cells. Natural Product Research. 32 (19), 2253-2259 (2018).
  24. Zhong, R., et al. The toxicity and metabolism properties of Herba Epimedii flavonoids on laval and adult zebrafish. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 3745051 (2019).
  25. Zhang, L., et al. Effect of 2" -O-rhamnosyl icariside II, baohuoside I and baohuoside II in Herba Epimedii on cytotoxicity indices in HL-7702 and HepG2 cells. Molecules. 24 (7), 1263 (2019).
  26. Chen, Y., Yang, R. J., Yu, M., Ding, S. L., Chen, R. Q. Application of response surface methodology in modern production process optimization. Science & Technology Vision. 2016 (19), 36-39 (2016).
  27. Zhang, Y., et al. Progress in using zebrafish as a toxicological model for traditional Chinese medicine. Journal of Ethnopharmacology. 282, 114638 (2022).
  28. Oliveira, R., Domingues, I., Grisolia, C. K., Soares, A. M. V. M. Effects of triclosan on zebrafish early-life stages and adults. Environmental Science and Pollution Research. 16 (6), 679-688 (2009).
  29. Ton, C., Lin, Y., Willett, C. Zebrafish as a model for developmental neurotoxicity testing. Birth Defects Research. Part A, Clinical and Molecular Teratology. 76 (7), 553-567 (2006).
  30. He, Q., et al. Toxicity induced by emodin on zebrafish embryos. Drug and Chemical Toxicology. 35 (2), 149-154 (2012).
  31. Chen, Y., et al. Developmental toxicity of muscone on zebrafish embryos. Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology. (6), 267-273 (2014).
  32. He, Y. L., et al. Effects of shikonin on zebrafish's embryo and angiogenesis. Chinese Traditional Patent Medicine. 38 (2), 241-245 (2016).
  33. Zhou, Y. . The transformation research on the chemical compositions in the processing of Epimedium. , (2016).
  34. Xiao, Y. P., Zeng, J., Jiao, L. -. N., Xu, X. -. Y. Review for treatment effect and signaling pathway regulation of kidney-tonifying traditional Chinese medicine on osteoporosis. China Journal of Chinese Materia Medica. 43 (1), 21-30 (2018).
  35. Wang, R. H. Study on modern pharmacological effects of traditional Chinese medicine for tonifying kidney yang. Journal of Hubei University of Chinese Medicine. 13 (04), 63-66 (2011).
  36. Luo, L., et al. Advances in the chemical constituents and pharmacological studies of Epimedium. Asia-Pacific Traditional Medicine. 15 (6), 190-194 (2019).
  37. Liu, S., et al. Effects of icariin on ERβ gene expression and serum estradiol level in ovariectomized rats. Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine. 32 (1), 150-152 (2016).
  38. Liu, Y., et al. Effects of epimedin A on osteoclasts and osteoporotic male mice. Chinese Journal of Veterinary Science. 41 (07), 1359-1364 (2021).
  39. Liu, Y. L., et al. Effects of icariin and epimedium C on microstructure of bone tissue in glucocorticoid osteoporosis model mice based on Micro-CT technique. Drug Evaluation Research. 43 (09), 1733-1739 (2020).
  40. Zhan, Y. Evaluation of antiosteoporotic activity for micro amount icariin and epimedin B based on the osteoporosis model using zebrafish. Chinese Pharmaceutical Journal. (24), 30-35 (2014).
  41. Zhan, Y., Wei, Y. -. J., Sun, E., Xu, F. -. J., Jia, X. -. B. Two-dimensional zebrafish model combined with hyphenated chromatographic techniques for evaluation anti-osteoporosis activity of epimendin A and its metabolite baohuoside I. Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (06), 932-937 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 193

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved