JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu protokolde, Epimedii folium'un (EF) koyun eti yağı işleme teknolojisi, bir Box-Behnken deneysel tasarım-tepki yüzey metodolojisi uygulanarak optimize edildi ve ham ve optimize edilmiş su ekstrakte edilen EF'nin zebra balığı embriyonik gelişimi üzerindeki etkisi önceden araştırıldı.

Özet

Geleneksel bir Çin tıbbı (TCM) olan Epimedii folium'un (EF), tıp ve gıdada > 2.000 yıllık bir geçmişi vardır. Klinik olarak, koyun eti yağı ile işlenmiş EF genellikle bir ilaç olarak kullanılır. Son yıllarda, EF'yi hammadde olarak kullanan ürünlerin güvenlik riskleri ve advers reaksiyonlarına ilişkin raporlar giderek artmıştır. İşleme, TCM'nin güvenliğini etkili bir şekilde artırabilir. TCM teorisine göre, koyun eti yağı işleme, EF'nin toksisitesini azaltabilir ve böbrekler üzerindeki tonlama etkisini artırabilir. Bununla birlikte, EF koyun eti yağı işleme teknolojisinin sistematik araştırma ve değerlendirme eksikliği vardır. Bu çalışmada, birden fazla bileşenin içeriğini değerlendirerek işleme teknolojisinin temel parametrelerini optimize etmek için Box-Behnken deneysel tasarım-tepki yüzey metodolojisini kullandık. Sonuçlar, EF'nin optimum koyun eti yağı işleme teknolojisinin şu şekilde olduğunu göstermiştir: koyun eti yağını 120 ° C'de 10 ° C'± ısıtmak, ham EF'yi eklemek, eşit derecede parlak olana kadar hafifçe 189 ° C'ye ± 10 ° C'ye kızartmak ve sonra çıkarmak ve soğutmak. Her 100 kg EF için 15 kg koyun eti yağı kullanılmalıdır. Sulu bir ham ve koyun eti yağı işlenmiş EF ekstraktının toksisiteleri ve teratojeniteleri, zebra balığı embriyo gelişim modelinde karşılaştırılmıştır. Sonuçlar, ham bitki grubunun zebra balığı deformitelerine neden olma olasılığının daha yüksek olduğunu ve yarı maksimal ölümcül EF konsantrasyonunun daha düşük olduğunu gösterdi. Sonuç olarak, optimize edilmiş koyun eti yağı işleme teknolojisi, iyi tekrarlanabilirlik ile istikrarlı ve güvenilirdi. Belirli bir dozda, EF'nin sulu ekstraktı zebra balığı embriyolarının gelişimi için toksikti ve toksisite, ham ilaç için işlenmiş ilaçtan daha güçlüydü. Sonuçlar, koyun eti yağı işlemenin ham EF'nin toksisitesini azalttığını göstermiştir. Bu bulgular, koyun eti yağı ile işlenmiş EF'nin kalitesini, homojenliğini ve klinik güvenliğini artırmak için kullanılabilir.

Giriş

Epimedii folium (EF), Epimedium brevicornu Maxim., Epimedium sagittatum'un (Sieb. et Zucc.) kurutulmuş yapraklarıdır. Maxim., Epimedium pubescens Maxim. veya Epimedium koreanum Nakai. EF, osteoporoz, menopoz sendromu, meme topakları, hipertansiyon, koroner kalp hastalığı ve diğer hastalıkların tedavisinde kullanılabilir1. Geleneksel bir Çin tıbbı (TCM) olarak EF, tıp ve gıda alanında 2.000 yıldan fazla bir geçmişe sahiptir. Düşük fiyatı ve böbrekleri tonlamanın dikkat çekici etkisi nedeniyle, ilaçlarda ve sağlık gıdalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. EF, koyun eti yağı ile karıştırılarak kızartılarak işlenir, ilk olarak Liu Songdönemi 2'de Lei Xiao tarafından yazılan Lei Gong İşleme Teorisi'nde açıklanan bir işlemdir. Ham EF ve kızartılmış EF'nin etkinlikleri oldukça farklıdır. Ham EF esas olarak romatizmayı ortadan kaldırırken, kızartılmış EF, yang3'ü güçlendirmek için böbrekleri ısıtır. Şu anda, EF yaygın olarak ilaç ve sağlık gıdalarında hammadde olarak kullanılmaktadır; listelenen 399 Çin patentli ilaç, dokuz ithal sağlık gıdası ve EF'yi hammadde olarak kullanan 455 yerli sağlık gıdası bulunmaktadır4. Bu tıbbi malzeme büyük uygulama beklentilerine sahiptir. Bununla birlikte, son yıllarda, EF'yi hammadde olarak kullanan sağlık gıdaları ve Çin patentli ilaçların neden olduğu advers reaksiyonlar ve insan karaciğer hasarı raporları artmıştır ve ilgili toksisite çalışmaları 5,6,7, EF'nin bir hammadde olarak potansiyel güvenlik risklerine sahip olduğunu bildirmiştir.

Çin tıbbi işleme, toksisiteyi etkili bir şekilde azaltabilen veya ortadan kaldırabilen ve TCM'lerin güvenliğini artırabilen farmasötik teknikleri ifade eder. EF'nin geleneksel işleme yöntemi, EF'nin toksisitesini azaltan ve böbrekleri ısıtma ve yang8'i teşvik etme etkisini artıran koyun eti yağı ile kızartmadır. Bu işleme yöntemi, Çin Farmakopesine ve çeşitli işleme spesifikasyonlarına dahil edilmiştir1. EF işlemi sadece şu şekilde belirtilir: her 100 kg EF için, 20 kg amniyotik yağ (rafine edilmiş) eklenir ve düzgün ve parlak olana kadar hafif ateşlenir1. Yukarıdaki standartlarda katı EF işleme yöntemi parametreleri yoktur, bu nedenle yerel işleme spesifikasyonları tutarlılık sağlamak için birleştirilmemiştir. Bu nedenle, EF sürecinin sistematik bir çalışmasının yapılması yararlı olacaktır. Bu yazıda, EF'nin işleme teknolojisini optimize etmek için Box-Behnken deneysel tasarım-tepki yüzey yöntemi kullanılmıştır.

Box-Behnken deneysel tasarımı, tipik olarak bir süreçteki faktörleri optimize etmek için kullanılan bir yöntemdir. Ekstraksiyon parametreleri, çoklu regresyon denklemi uydurma faktörleri ile etki değerleri arasındaki fonksiyonel ilişki kurularak optimize edilebilir. Son zamanlarda, bu yöntem TCM ekstraksiyonu 5,6,7 ve işleme 9,10,11'i incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Çeşitli çalışmalar, tuzla işlenmiş Psoraleae fructus12, şarapla işlenmiş Cnidii fructus13 ve kavrulmuş Cinnamomi ramulus14 gibi bir Box-Behnken tasarımını takiben tuz işleme, şarap işleme ve kızartma içeren TCM hazırlama yöntemlerini bildirmiştir. Bu yöntem test süresini kısaltmış, yüksek test doğruluğuna sahiptir ve çok faktörlü ve çok seviyeli testler için uygundur. Yöntem, ortogonal tasarım test yönteminden daha basittir ve tek tip tasarım yönteminden daha kapsamlıdır15. Elde edilen ilişkiler, test aralığındaki herhangi bir test noktasının tahmin edilen değerini belirleyebilir, bu da büyük bir avantajdır. EF'nin işlemden sonra daha az toksik olup olmadığını test etmek için bir zebra balığı modeli kullanılabilir.

TCM toksisite çalışmalarında, zebra balığı modeli, hücre deneylerinin yüksek veriminin ve kemirgen deneyleriyle benzerliklerin ikili avantajlarına sahiptir16. Bu model küçük boyutu, yüksek yumurtlama oranı, kısa üreme döngüsü ve üreme kolaylığı ile karakterizedir. Model, hücre kültürü plakalarındaki büyük ölçekli senkron deneylerde kullanılabilir ve deneysel ilaç dozu küçüktür, deneysel döngü kısadır, maliyet düşüktür ve tüm deneysel sürecin gözlemlenmesi ve çalıştırılması kolaydır17. Zebra balığı embriyoları şeffaftır ve hızla gelişir. Bu nedenle, ilaçların farklı gelişim evrelerinde viseral dokular üzerindeki toksisitesi ve teratojenik etkileri mikroskop altında doğrudan gözlemlenebilir18. Zebra balığı ve insanlar arasındaki gen homolojisi %85 kadar yüksektir18. Zebra balıklarının sinyal iletim yolu, insanlarınkine benzer18. Zebra balıklarının biyolojik yapısı ve fizyolojik işlevi, memelilerinkine oldukça benzerdir18. Bu nedenle, uyuşturucu testi için bir zebra balığı modeli, insanlar için güvenilir ve tamamen uygulanabilir deney hayvanları sağlayabilir19.

Bu çalışmada, koyun eti yağı miktarını ve sıcaklığını ve EF işleme teknolojisinde kullanılan kızartma sıcaklığını optimize etmek için Box-Behnken tasarım-tepki yüzey metodolojisini kullandık ve değerlendirme indeksleri olarak icariin, epimedin A, epimedin B, epimedin C ve baohuoside I içerikleri kullanıldı. Zebra balığı modeli, bir EF su ekstraktının, işlemin EF üzerindeki zayıflama etkisini değerlendirmek için işlemden önce ve sonra zebra balığı embriyonik gelişimi üzerindeki etkisini önceden araştırmak için kullanılmıştır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm deneyler, TCM Chongqing Enstitüsü Deney Etik Komitesi'nin onayı ile gerçekleştirilmiştir (laboratuvar hayvanları etik inceleme sertifikası numarası: ZJS2022-03).

1. Biyoaktif bileşenlerin belirlenmesi

NOT: Bu araştırmada kullanılan türler Epimedium sagittatum idi ve örnekler Chongqing, Fengdu County'de toplandı. Örneklem, E. sagittatum'un (Sieb. et Zucc.) kuru bir toprak üstü kısmı olarak tanımlandı. Atasözü. Biyolojik Tıp Enstitüsü, Chongqing Geleneksel Çin Tıbbı Enstitüsü araştırmacıları tarafından.

  1. Elektronik analitik terazi kullanarak icariin, epimedin A (EA), epimedin B (EB), epimedin C (EC) ve baohuoside I (BI) olmak üzere her bir referans maddenin uygun miktarını doğru bir şekilde tartarak kontrol ürünü çözeltisini hazırlayın ve metanol içinde çözün. Bunları kullanarak 381,61 μg/mL icariin, 124,14 μg/mL EA, 110,24 μg/mL EB, 1091,75 μg/mL EC ve 184,98 μg/mL BI içeren karışık bir referans stok çözeltisi hazırlayın.
  2. EF'yi 3 numaralı bir elek ile ezerek test ürünü solüsyonunu hazırlayın. Yaklaşık 0,2 g (elektronik analitik terazi kullanarak) ezilmiş EF'yi tıpalı bir Erlenmeyer şişesine yerleştirin, 20 mL seyreltik etanol ekleyin ve ardından 1 saat boyunca 400 W güç ve 50 kHz frekansta ultrasonikat yapın. Test çözeltisini elde etmek için iyice çalkalayın ve 0,22 μm'lik bir membran filtresinden geçirin.
  3. Kromatografiyi aşağıdaki gibi yapın. 4,6 mm x 250 mm boyutlarında ve 5 μm iç çapa sahip C18 kolonlu yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanın. Mobil faz A olarak asetonitril ve mobil faz B olarak ultra saf su kullanın Aşağıdaki gradyan elüsyon parametrelerini kullanın: 0-30 dakika,% 24 A ila% 26 A; 30-31 dakika,% 26 A ila% 45 A; 31-45 dakika,% 45 A ila% 47 A. 220 nm'lik bir algılama dalga boyu kullanın (kullanılan dedektör için Malzeme Tablosuna bakınız). Kolon sıcaklığını 30 °C'de ve akım hızını 1,0 mL/dak'da tutun ve 10 μL'lik bir numune boyutu kullanın.
  4. Doğrusal ilişkiyi araştırmak için, adım 1.1'deki gibi icariin, EA, EB, EC ve BI için sırasıyla 2 kez, 4 kez, 8 kez, 16 kez ve 32 kez seyreltilmiş karma başvuru çözümünü kullanın. Asetonitril'i mobil faz A olarak ve ultra saf suyu mobil faz B olarak kullanın.
  5. Aşağıdaki gradyan elüsyon parametrelerini kullanın: 0-30 dakika,% 24 A ila% 26 A; 30-31 dakika,% 26 A ila% 45 A; 31-45 dakika,% 45 A ila% 47 A. 220 nm'lik bir algılama dalga boyu kullanın (kullanılan dedektör için Malzeme Tablosuna bakınız). Kolon sıcaklığını 30 °C'de ve akım hızını 1,0 mL/dak'da tutun ve 10 μL'lik bir numune boyutu kullanın. Son olarak, en yoğun alanları kaydedin. Doğrusal regresyonu, apsis olarak referans konsantrasyonu (x ekseni, μg / mL) ve tepe alanı (y ekseni) ordinat olarak profesyonel yazılım kullanarak çizin (bkz.
  6. Adım 1.3'te gösterilen kromatografik koşulları kullanarak HPLC tarafından karışık kontrol solüsyonunu art arda altı kez ölçerek hassasiyet testini gerçekleştirin. Her kimyasal bileşimin algılama süresini ve tepe alanlarını kaydedin ve aşağıdaki formülü kullanarak hassasiyeti (tekrarlanabilirlik) değerlendirmek için tepe alanlarının göreceli standart sapmalarını (RSD) hesaplayın:
    RSD% = standart sapma (SD)/hesaplanan sonuçların aritmetik ortalaması (X) x %100
  7. Tekrarlanabilirlik testini gerçekleştirmek için EF tozunu doğru bir şekilde tartın ve adım 1.2'deki yönteme göre test ürünü çözeltisinin altı parçasını paralel olarak hazırlayın. Hazırlanan çözeltileri, adım 1.3'te sunulan kromatografik koşullar altında HPLC'ye tabi tutun. Her kimyasal bileşimin tutma sürelerini ve tepe alanlarını kaydedin ve her bileşiğin miktarlarını standart bir eğriden hesaplayın (pik alanlara karşı konsantrasyonlar). RSD% 'yi yukarıdaki gibi hesaplayın.
  8. Stabilite testini gerçekleştirmek için, test çözeltilerini oda sıcaklığında saklayın ve stabiliteyi değerlendirmek için hazırlandıktan sonra adım 1.3'te 0 saat, 2 saat, 4 saat, 8 saat, 12 saat ve 24 saatte açıklanan HPLC yöntemiyle içeriklerini ölçün. Her kimyasal bileşimin tutma sürelerini ve tepe alanlarını kaydedin ve tepe alanlarının RSD% 'sini yukarıdaki gibi hesaplayın.
  9. Numune geri kazanım testini gerçekleştirmek için, altı kopya için tıpalı bir Erlenmeyer şişesine 0,2 g EF tozu tartın. Uygun miktarda referans çözeltisi ekleyin (numuneye eklenen referans madde miktarı, numunenin bilinen içeriğinin% 100'üne eşdeğerdir) ve test çözeltisini adım 1.2'de sunulan yönteme göre hazırlayın.
  10. Numuneleri kromatografa enjekte edin ve adım 1.3'teki kromatografik koşullara göre analiz edin. Tepe alanlarını kaydedin ve ortalama kurtarma ve RSD% değerlerini aşağıdaki gibi hesaplayın:
    Ani örnek kurtarma oranı = (çivili örnek içeriği − örnek içerik)/örnek miktarı x %100

2. Box-Behnken tasarım-tepki yüzey metodolojisi kullanılarak EF koyun eti yağı işleme teknolojisinin optimizasyonu

  1. EF işlemede koyun eti yağı miktarı (A; %15-%35), koyun eti yağı sıcaklığı (B; 50-120 °C) ve kızartma sıcaklığı (C; 80-300 °C) gibi temel parametreleri etkili faktörler olarak seçin. Değerlendirme dizinleri olarak icariin, EA, EB, EC ve BI içeriğinin kapsamlı puanlarını kullanın. Buradaki koyun eti yağı yüzdesi kütle yüzdesidir.
  2. Box-Behnken tepki yüzeyi deneylerini tasarlamak, ikinci dereceden tepki yüzeyini keşfetmek ve ikinci dereceden bir polinom modeli oluşturmak için yanıt yüzeyi analiz yazılımını (bkz. Yeni Box-Behnken Tasarımı'nı seçin ve Sayısal Faktörler seçeneğini 3 olarak ayarlayın; A, B ve C faktörlerini ayarlayın. Yanıtlar seçeneğini 1 olarak ayarlayın (kapsamlı puandır). Tasarımı tamamlamak için Devam'a tıklayın. Toplam 17 deney planlanmıştır (bakınız Tablo 1).
    NOT: Bağımsız ve bağımlı değişkenler için, düşük, orta ve yüksek düzeyleriyle birlikte, bkz: Tablo 2.
  3. EF'yi Tablo 1'deki belirli parametrelere göre işleyin; Örneğin, 1 numaralı sipariş için, rafine koyun eti yağını %15 V/V olarak tartın ve ardından eritmek için 50 °C'ye ısıtın. Ham EF'yi erimiş koyun etine ekleyin, eşit derecede parlak olana kadar hafif bir ateşte (190 ° C) karıştırın ve ardından çıkarın ve soğutun. 17 deneysel operasyon gerçekleştirdi. Bu çalışmada toplam 17 grup EF işlenmiş ürün elde edilmiştir.
    NOT: Koyun eti yağı oda sıcaklığında (25 °C) katıdır ve ısıtıldığında sıvı halinde erir. Sıvı haldeki koyun eti yağı yardımcı madde olarak kullanılabilir.
  4. İşlenmiş ürünlerin test çözeltilerini adım 1.2'de açıklanan yönteme göre hazırlayın. Ardından, adım 1.3'te açıklanan kromatografik koşullara göre HPLC kullanarak bunları analiz edin. Her kimyasal bileşimin tutma sürelerini ve tepe alanlarını kaydedin ve her bir test çözeltisindeki icariin, EA, EB, EC ve BI içeriğini harici bir standart eğriye göre hesaplayın. 17 deney grubunun kapsamlı puanlarını hesaplamak için aşağıdaki kapsamlı puan hesaplama formülünü kullanın:
    Kapsamlı puan = Z/Z max × 0.5 + BI/BImax × 0.5
    burada Z, icariin, EA, EB ve EC içeriklerinin toplamıdır; Zmax , 17 deney grubundaki icariin, EA, EB ve EC içeriklerinin toplamının maksimum değeridir; BI, BI içeriğidir; ve BImax , 17 deney grubundaki BI içeriğinin maksimum değeridir.
  5. Deneysel verileri analiz etmek için 17 deney grubu için kapsamlı puanlama sonuçlarını veri analiz yazılımına aktarın (bkz. Değerlendirme öğeleri altında, ikinci dereceden işlem sırası seçeneğini ve polinom model türü seçeneğini belirleyin.

3. İşlemenin zebra balığı embriyonik gelişimi üzerindeki etkisinin test edilmesi

  1. Numune hazırlama
    1. Ham ve işlenmiş EF'yi 3 numaralı bir elek ile ezin (bkz. Her EF numunesinin 100 gramına 1.000 mL ultra saf su ekleyin. EF'yi 0,5 saat bekletin, suyu her biri 30 dakika boyunca iki kez kaynatın ve ardından filtre kağıdı ile filtreleyin.
    2. Filtratları birleştirin ve numuneyi ısıtarak konsantre edin. İşlenmiş EF (PEF, 1 g/mL) ve ham EF (CEF,1 g/mL) stok çözeltilerini elde etmek için 100 mL'lik son hacme ultra saf su ekleyin. Her stok çözeltisindeki ham ilaç miktarını ölçün.
    3. 10 mL volümetrik şişelere 1 mL, 1,5 mL, 2,5 mL, 5 mL ve 7,5 mL stok çözeltilerinin alikuatlarını yerleştirin ve ardından zebra balığı embriyotoksisitesi çalışması için 100 mg / mL, 150 mg / mL, 200 mg / mL, 250 mg / mL, 500 mg / mL ve 750 mg / mL konsantrasyonlarında test çözeltilerini hazırlamak için hacme ultra saf su ekleyin.
      NOT: Test çözeltilerinin konsantrasyonları, ilgili literatüre 20,21 atıfta bulunularak ve normal toksikolojide kullanılan10 kat konsantrasyon gradyanını vermek için ön deneyler yapılarak hazırlanmıştır. CEF işlenmemiş bir numuneydi ve PEF, bölüm 2'de açıklanan en iyi işleme teknolojisi ile hazırlanmış bir numuneydi.
  2. Zebra balığı yetiştiriciliği ve embriyo tedavisi21
    1. Vahşi tip zebra balıklarını (Malzeme Tablosuna bakınız) 2 gün boyunca kontrollü bir sıcaklıkta uyarlayın, pH 7.0-7.4'te akan bir akvaryumda tutun ve günde iki kez besleyin.
      NOT: Zebra balıklarında melanin oluşumunun inhibisyonu, vücutlarını morfolojik gözlem için şeffaf tutan kültür ortamına% 0.003'lük bir konsantrasyonda (kütle / hacim) 1-fenil-2-tiyoüre eklenerek elde edildi.
    2. Akşamları yetişkin verimli vahşi tip zebra balıklarını seçin ve çiftleşme kutularında saptırıcılar kullanarak ayırın. Ertesi sabah bölmeleri çıkarın ve balığın 30 dakika yumurtlamasına izin verin. Döllenmiş yumurtaları her 15 dakikada bir damlalık ile topladı. Toplamda, 520 sağlıklı vahşi tip embriyo toplandı. Zebra balığı embriyolarını 24 saat boyunca 28.5 ° C'de bir inkübatörde tutun.
    3. Döllenme sonrası 24 saatte (hpf) sağlıklı embriyoları rastgele 13 gruba atayın ve bir kontrol grubuyla birlikte, bir kültür kabında aşağıdaki çözeltilerin her birinin 10 mL'sine ayrı ayrı batırın: PEF: 100 μg / mL, 150 μg / mL, 200 μg / mL, 250 μg / mL, 500 μg / mL, 750 μg / mL; CEF: 100 μg/mL, 150 μg/mL, 200 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL, 750 μg/mL. Boş kontrol grubuna bir çözüm olarak ortam ile muamele edin. Bu çalışmada her grup 40 embriyo içeriyordu.
      NOT: Orta bileşim 0,15 M NaCl, 5 mM KCl, 0,25 mM Na 2 HPO 4, 0,45 mM KH 2 PO 4, 1,3 mM CaCl 2,1,0 mM MgSO 4 ve4 mM NaHCO3'tür.
    4. Zebra balıklarını 120 hpf'ye kadar sabit bir sıcaklık inkübatöründe kültürleyin. Her gün ölü larvaların sayısını sayın, her deney grubundaki larvaların ana organ morfolojisini stereomikroskop altında gözlemleyin (ölçek çubuğu = 500 μm, Malzeme Tablosuna bakınız) ve zebra balıklarının yarı ölüm konsantrasyonunu (LC50) veri analiz yazılımı kullanarak 72 hpf'de hesaplayın (bkz.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Metodolojik araştırma sonuçları
Icariin, EA, EB, EC, BI konsantrasyonları ile kromatografik tepe alanları arasında doğrusal bir ilişki gözlenmiştir (bakınız Tablo 3). ICARIIN, EA, EB, EC ve BI'nın kromatografik tepe alanlarının RSD% değerleri (n = 6) sırasıyla% 0.28,% 1.22,% 0.65,% 1.67 ve% 1.06 idi ve HPLC ölçümlerinin hassasiyetinin iyi olduğunu gösterdi. ICARIIN, EA, EB, EC ve BI içeriklerinin RSD% değerleri (n = 6) sırasıyla %1.59, %1.46, %1.86, %2.29 v...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bağımsız değişkenler ve seviyelerinin belirlenmesi
EF işleme teknolojisi yalnızca Çin Farmakopesinin 2020 baskısında ve ülke genelinde 26 il, belediye ve özerk bölge tarafından yayınlanan yerel Çin tıbbı işleme spesifikasyonlarında açıklanmıştır1. Açıklama aşağıdaki adımları içerir: koyun eti yağı almak ve eritmek için ısıtmak, EF parçaları eklemek, düzgün ve parlak olana kadar yavaş bir ateşle kızartmak, çıkarmak ve soğumaya bır...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Chongqing Geleneksel Çin Tıbbı Akademisi'nin Temel Bilimsel Araştırma İş Projesi (Proje Numarası: jbky20200013), Chongqing Bilimsel Araştırma Kurumlarının Performans Teşvik Rehberlik Projesi (Proje Numarası: cstc2021jxjl 130025) ve Çin Materia Medica İşleme Chongqing Belediye Sağlık Komisyonu Anahtar Disiplin İnşaat Projesi tarafından desteklenmektedir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileFisher197164
Baohuoside figure-materials-103 (Bfigure-materials-195 ) Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20042402
Chromatographic columnWaters CorporationSymmetry C18
Design Expert softwareStat- Ease Inc., Minneapolis, MNTrial Version8.0.6.1
DetectorWaters Corporation2998
DisintegratorHefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.S-FS553
Electronic analytical balanceMettler-Toledo International Inc.MS205DU
Epimedin A (EA)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-21112118
Epimedin B (EB)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080403
Epimedin C (EC)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080310
EthanolChongqing Chuandong Chemical ( Group ) Co., Ltd.20180801
Graphpad softwareGraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA6.02
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)Waters Corporation2695
IcariinChengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.21091401
MethanolChongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd.20171101
Microporous membraneTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.0.22μm
Mutton oilKuoshan Zhiniu Fresh Food Store20211106
Office Excel office softwareMicrosoftOffice Excel 2021
Pharmacopoeia sieveShaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.R40/3
Pure water machineChongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd.AT Sro 10A
Qualitative filter paperShanghai Leigu Instrument Co., Ltd.18cm
StereomicroscopeCarl Zeiss, Oberkochen, GermanyStemi 2000
Ultrasonic cleanerBranson Ultrasonics (Shanghai) Co.,Ltd.BUG25-12
ZebrafishChina Zebrafish Resource Center (CZRC)The AB strain

Referanslar

  1. Chinese Pharmacopoeia Commission. Chinese Pharmacopoeia. Volume I. , China Medical Science and Technology Press. Beijing, China. (2020).
  2. Wang, X. T. Collection of Traditional Chinese Medicine Processing Methods. , Nanchang Science and Technology Press. Jiangxi, China. (1998).
  3. Chen, L. L., Jia, X. B., Jia, D. S. Advances in studies on processing mechanism of Epimedii Folium. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 12 (12), 2108-2111 (2010).
  4. Zhao, W., et al. Optimized extraction of polysaccharides from corn silk by pulsed electric field and response surface quadratic design. Journal of The Science of Food and Agriculture. 91 (12), 2201-2209 (2011).
  5. Zhao, L. C., et al. The use of response surface methodology to optimize the ultrasound-assisted extraction of five anthraquinones from Rheum palmatum L. Molecules. 16 (7), 5928-5937 (2011).
  6. Mao, W. H., Han, L. J., Shi, B. Optimization of microwave assisted extraction of flavonoid from Radix Astragali using response surface methodology. Separation Science and Technology. 43 (12), 671-681 (2008).
  7. Liu, W., et al. Optimization of total flavonoid compound extraction from Gynura medica leaf using response surface methodology and chemical composition analysis. International Journal of Molecular Sciences. 11 (11), 4750-4763 (2010).
  8. Guo, G. L., et al. Research progress on processing mechanism of Epimedium fried with sheep fat oil based on warming kidney and promoting yang. Journal of Liaoning University of TCM. 22 (07), 1-5 (2020).
  9. Shen, X. J., Zhou, Q., Sun, L. -L., Dai, Y. -P., Yan, X. -S. Optimization for cutting procedure of astragali radix with Box-Behnken design and response surface method. China Journal of Chinese Materia Medica. 39 (13), 2498-2503 (2014).
  10. Wang, L. H., et al. Optimization of processing technology of honey wheat bran based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 52 (12), 3538-3543 (2021).
  11. Zhang, J. B., et al. Study on integrated process of producing area and processing production for Paeoniae Radix Alba based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (18), 5657-5662 (2022).
  12. Li, N., Zhang, X. M., Yao, Y. Y., Chen, Y. L., Fan, Q. Optimization of processing technology for Psoraleae Fructus by D-optimal response surface methodology with UHPLC. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 39 (05), 42-44 (2022).
  13. Jia, Y. Q., et al. Optimization of processing technology with wine of Cnidii Fructus by AHP-entropy weight method combined with response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 10, 2338-2343 (2022).
  14. Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Cinnamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (08), 1838-1842 (2022).
  15. Wang, W. D., et al. Optimization extraction of effective constituents from Epimedii Herba based on central composite design-response surface methodology and orthogonal experimental design. Lishizhen Medicine and Materia Medica. 21 (11), 2766-2768 (2010).
  16. Yang, L., et al. Zebrafish embryos as models for embryotoxic and teratological effects of chemicals. Reproductive Toxicology. 28 (2), 245-253 (2009).
  17. Kanungo, J., Cuevas, E., Ali, S. F., Paule, M. G. Zebrafish model in drug safety assessment. Current Pharmaceutical Design. 20 (34), 5416-5429 (2014).
  18. Jayasinghe, C. D., Jayawardena, U. A. Toxicity assessment of herbal medicine using zebrafish embryos: A systematic review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 7272808(2019).
  19. Scholz, S. Zebrafish embryos as an alternative model for screening of drug induced organ toxicity. Archives of Toxicology. 87 (5), 767-769 (2013).
  20. Ling, J., et al. Analysis of Folium Epimedium toxicity in combination with Radix Morindae Officinalis based on zebrafish toxicity/metabolism synchronization. Acta Pharmaceutica Sinica. 53 (1), 74(2018).
  21. Wang, Y., et al. Tri-n-butyl phosphate delays tissue repair by dysregulating neutrophil function in zebrafish. Toxicology and Applied Pharmacology. 449, 116114(2022).
  22. Sheng, Z. L., Li, J. C., Li, Y. H. Optimization of forsythoside extraction from Forsythia suspensa by Box-Behnken design. African Journal of Biotechnology. 10 (55), 11728-11737 (2011).
  23. Pang, X., et al. Prenylated flavonoids and dihydrophenanthrenes from the leaves of Epimedium brevicornu and their cytotoxicity against HepG2 cells. Natural Product Research. 32 (19), 2253-2259 (2018).
  24. Zhong, R., et al. The toxicity and metabolism properties of Herba Epimedii flavonoids on laval and adult zebrafish. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 3745051(2019).
  25. Zhang, L., et al. Effect of 2" -O-rhamnosyl icariside II, baohuoside I and baohuoside II in Herba Epimedii on cytotoxicity indices in HL-7702 and HepG2 cells. Molecules. 24 (7), 1263(2019).
  26. Chen, Y., Yang, R. J., Yu, M., Ding, S. L., Chen, R. Q. Application of response surface methodology in modern production process optimization. Science & Technology Vision. 2016 (19), 36-39 (2016).
  27. Zhang, Y., et al. Progress in using zebrafish as a toxicological model for traditional Chinese medicine. Journal of Ethnopharmacology. 282, 114638(2022).
  28. Oliveira, R., Domingues, I., Grisolia, C. K., Soares, A. M. V. M. Effects of triclosan on zebrafish early-life stages and adults. Environmental Science and Pollution Research. 16 (6), 679-688 (2009).
  29. Ton, C., Lin, Y., Willett, C. Zebrafish as a model for developmental neurotoxicity testing. Birth Defects Research. Part A, Clinical and Molecular Teratology. 76 (7), 553-567 (2006).
  30. He, Q., et al. Toxicity induced by emodin on zebrafish embryos. Drug and Chemical Toxicology. 35 (2), 149-154 (2012).
  31. Chen, Y., et al. Developmental toxicity of muscone on zebrafish embryos. Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology. (6), 267-273 (2014).
  32. He, Y. L., et al. Effects of shikonin on zebrafish's embryo and angiogenesis. Chinese Traditional Patent Medicine. 38 (2), 241-245 (2016).
  33. Zhou, Y. The transformation research on the chemical compositions in the processing of Epimedium. , Kunming University of Science and Technology. Kunming, China. (2016).
  34. Xiao, Y. P., Zeng, J., Jiao, L. -N., Xu, X. -Y. Review for treatment effect and signaling pathway regulation of kidney-tonifying traditional Chinese medicine on osteoporosis. China Journal of Chinese Materia Medica. 43 (1), 21-30 (2018).
  35. Wang, R. H. Study on modern pharmacological effects of traditional Chinese medicine for tonifying kidney yang. Journal of Hubei University of Chinese Medicine. 13 (04), 63-66 (2011).
  36. Luo, L., et al. Advances in the chemical constituents and pharmacological studies of Epimedium. Asia-Pacific Traditional Medicine. 15 (6), 190-194 (2019).
  37. Liu, S., et al. Effects of icariin on ERβ gene expression and serum estradiol level in ovariectomized rats. Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine. 32 (1), 150-152 (2016).
  38. Liu, Y., et al. Effects of epimedin A on osteoclasts and osteoporotic male mice. Chinese Journal of Veterinary Science. 41 (07), 1359-1364 (2021).
  39. Liu, Y. L., et al. Effects of icariin and epimedium C on microstructure of bone tissue in glucocorticoid osteoporosis model mice based on Micro-CT technique. Drug Evaluation Research. 43 (09), 1733-1739 (2020).
  40. Zhan, Y. Evaluation of antiosteoporotic activity for micro amount icariin and epimedin B based on the osteoporosis model using zebrafish. Chinese Pharmaceutical Journal. (24), 30-35 (2014).
  41. Zhan, Y., Wei, Y. -J., Sun, E., Xu, F. -J., Jia, X. -B. Two-dimensional zebrafish model combined with hyphenated chromatographic techniques for evaluation anti-osteoporosis activity of epimendin A and its metabolite baohuoside I. Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (06), 932-937 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

JoVE de Bu AySay 193

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır