Optimierung der Epimedii Folium Hammelöl-Verarbeitungstechnologie und Prüfung ihrer Wirkung auf die Embryonalentwicklung von Zebrafischen

Zusammenfassung

In diesem Protokoll wurde die Hammelöl-Verarbeitungstechnologie von Epimedii folium (EF) durch die Anwendung einer Box-Behnken-experimentellen Design-Response-Oberflächenmethodik optimiert und der Einfluss von rohem und optimiertem wasserextrahiertem EF auf die Embryonalentwicklung von Zebrafischen vorläufig untersucht.

Zusammenfassung

Als Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) hat Epimedii folium (EF) eine Geschichte in Medizin und Lebensmitteln, die > 2.000 Jahre alt ist. Klinisch wird EF, das mit Hammelöl verarbeitet wird, häufig als Arzneimittel verwendet. In den letzten Jahren haben die Berichte über Sicherheitsrisiken und unerwünschte Reaktionen von Produkten, die EF als Rohstoff verwenden, allmählich zugenommen. Durch die Verarbeitung kann die Sicherheit der TCM effektiv verbessert werden. Nach der TCM-Theorie kann die Verarbeitung von Hammelöl die Toxizität von EF verringern und seine tonisierende Wirkung auf die Nieren verstärken. Es fehlt jedoch an einer systematischen Erforschung und Bewertung der EF-Hammelöl-Verarbeitungstechnologie. In dieser Studie haben wir die experimentelle Design-Response-Oberflächenmethodik von Box-Behnken verwendet, um die Schlüsselparameter der Verarbeitungstechnologie zu optimieren, indem wir den Inhalt mehrerer Komponenten bewertet haben. Die Ergebnisse zeigten, dass die optimale Hammelöl-Verarbeitungstechnologie von EF wie folgt war: Erhitzen des Hammelöls auf 120 °C ± 10 °C, Zugabe des rohen EF, sanftes Braten auf 189 °C ± 10 °C, bis es gleichmäßig glänzt, und dann herausnehmen und abkühlen lassen. Pro 100 kg EF sollten 15 kg Hammelöl verwendet werden. Die Toxizitäten und Teratogenitäten eines wässrigen Extrakts aus Roh- und Hammelöl, das mit EF verarbeitet wurde, wurden in einem Entwicklungsmodell eines Zebrafischembryos verglichen. Die Ergebnisse zeigten, dass die rohe Kräutergruppe mit größerer Wahrscheinlichkeit Zebrafischdeformationen verursachte und ihre halbmaximale tödliche EF-Konzentration niedriger war. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die optimierte Hammelöl-Verarbeitungstechnologie stabil und zuverlässig war und eine gute Wiederholgenauigkeit aufweist. Bei einer bestimmten Dosis war der wässrige Extrakt von EF toxisch für die Entwicklung von Zebrafischembryonen, und die Toxizität war für das Roharzneimittel stärker als für das verarbeitete Arzneimittel. Die Ergebnisse zeigten, dass die Hammelölverarbeitung die Toxizität von rohem EF reduzierte. Diese Erkenntnisse können genutzt werden, um die Qualität, Einheitlichkeit und klinische Sicherheit von mit Hammelöl verarbeitetem EF zu verbessern.

Einleitung

Epimedii folium (EF) sind die getrockneten Blätter von Epimedium brevicornu Maxim., Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim., Epimedium pubescens Maxim., oder Epimedium koreanum Nakai. EF kann zur Behandlung von Osteoporose, Wechseljahrssyndrom, Knoten in der Brust, Bluthochdruck, koronarer Herzkrankheit und anderen Krankheiten eingesetzt werden¹. Als Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) blickt EF auf eine mehr als 2.000-jährige Geschichte in Medizin und Ernährung zurück. Aufgrund seines niedrigen Preises und seiner bemerkenswerten Wirkung auf die Nieren wird es häufig in Medikamenten und gesunden Lebe....

Protokoll

Alle tierbezogenen Versuche wurden mit Genehmigung der Versuchsethikkommission des Chongqing Instituts für TCM durchgeführt (Prüftierethik-Zertifikatsnummer: ZJS2022-03).

1. Bestimmung der bioaktiven Bestandteile

HINWEIS: Bei der in dieser Forschung verwendeten Spezies handelte es sich um Epimedium sagittatum, und die Proben wurden im Landkreis Fengdu, Chongqing, gesammelt. Die Probe wurde als trockener oberirdischer Teil von E. sagittatum (Sieb. et Zucc.) Grundsatz. von Forschern des Instituts für Biologische Medizin, Chongqing Institut für Traditionelle Chinesische Medizin.

....

Ergebnisse

Methodische Untersuchungsergebnisse
Es wurde ein linearer Zusammenhang zwischen der Konzentration von Icariin, EA, EB, EC, BI und chromatographischen Peakbereichen beobachtet (siehe Tabelle 3). Die RSD%-Werte (n = 6) der chromatographischen Peakbereiche von Icariin, EA, EB, EC und BI betrugen 0,28 %, 1,22 %, 0,65 %, 1,67 % bzw. 1,06 %, was darauf hindeutet, dass die Präzision der HPLC-Messungen gut war. Die RSD%-Werte (n = 6) der Gehalte an Icariin, EA, EB, EC und BI betrugen 1,59 %,.......

Diskussion

Unabhängige Variablen und die Bestimmung ihrer Niveaus
Die EF-Verarbeitungstechnologie wird nur in der Ausgabe 2020 des chinesischen Arzneibuchs und in den lokalen Verarbeitungsspezifikationen für chinesische Arzneimittel beschrieben, die von 26 Provinzen, Gemeinden und autonomen Regionen im ganzen Land veröffentlicht wurden¹. Die Beschreibung umfasst die folgenden Schritte: Hammelöl nehmen und zum Schmelzen erhitzen, EF-Schnitzel hinzufügen, mit langsamem Feuer unter Rüh.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Fisher	197164
Baohuoside (B )	Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.	MUST-20042402
Chromatographic column	Waters Corporation	Symmetry C18
Design Expert software	Stat- Ease Inc., Minneapolis, MN	Trial Version8.0.6.1
Detector	Waters Corporation	2998
Disintegrator	Hefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.	S-FS553
Electronic analytical balance	Mettler-Toledo International Inc.	MS205DU
Epimedin A (EA)	Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.	MUST-21112118
Epimedin B (EB)	Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.	MUST-20080403
Epimedin C (EC)	Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.	MUST-20080310
Ethanol	Chongqing Chuandong Chemical ( Group ) Co., Ltd.	20180801
Graphpad software	GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA	6.02
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)	Waters Corporation	2695
Icariin	Chengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.	21091401
Methanol	Chongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd.	20171101
Microporous membrane	Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.	0.22μm
Mutton oil	Kuoshan Zhiniu Fresh Food Store	20211106
Office Excel office software	Microsoft	Office Excel 2021
Pharmacopoeia sieve	Shaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.	R40/3
Pure water machine	Chongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd.	AT Sro 10A
Qualitative filter paper	Shanghai Leigu Instrument Co., Ltd.	18cm
Stereomicroscope	Carl Zeiss, Oberkochen, Germany	Stemi 2000
Ultrasonic cleaner	Branson Ultrasonics (Shanghai) Co.,Ltd.	BUG25-12
Zebrafish	China Zebrafish Resource Center (CZRC)	The AB strain