JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этом протоколе технология переработки бараньего масла Epimedii folium (EF) была оптимизирована с применением экспериментальной методологии поверхности Бокса-Бенкена, а также предварительно исследовано влияние сырого и оптимизированного EF, экстрагированного водой, на эмбриональное развитие рыбок данио.

Аннотация

Как традиционная китайская медицина (ТКМ), Epimedii folium (EF) имеет историю в медицине и еде, которая насчитывает > 2000 лет. Клинически EF, обработанный бараньим маслом, часто используется в качестве лекарства. В последние годы сообщения о рисках безопасности и побочных реакциях продуктов, в которых EF используется в качестве сырья, постепенно увеличиваются. Обработка может эффективно повысить безопасность ТКМ. Согласно теории ТКМ, обработка бараньего масла может снизить токсичность ЭФ и усилить его тонизирующее действие на почки. Тем не менее, отсутствуют систематические исследования и оценка технологии переработки бараньего масла EF. В этом исследовании мы использовали экспериментальную методологию Бокса-Бенкена для оптимизации ключевых параметров технологии обработки путем оценки содержания нескольких компонентов. Результаты показали, что оптимальная технология обработки бараньего масла EF была следующей: нагревание бараньего масла при 120 °C ± 10 °C, добавление сырого EF, осторожное обжаривание до 189 °C ± 10 °C до тех пор, пока оно не станет равномерно блестящим, а затем удаление и охлаждение. На каждые 100 кг EF следует использовать 15 кг бараньего масла. Токсичность и тератогенность водного экстракта сырого и бараньего масла, обработанного EF, сравнивали в модели развития эмбриона рыбок данио. Результаты показали, что группа сырых трав с большей вероятностью вызывала уродства рыбок данио, а ее полумаксимальная смертельная концентрация EF была ниже. В заключение, оптимизированная технология переработки бараньего масла была стабильной и надежной, с хорошей повторяемостью. В определенной дозе водный экстракт EF был токсичен для развития эмбрионов рыбок данио, и токсичность была сильнее для сырого препарата, чем для обработанного препарата. Результаты показали, что переработка бараньего масла снижает токсичность сырого EF. Эти результаты могут быть использованы для улучшения качества, однородности и клинической безопасности EF, обработанных бараньим маслом.

Введение

Epimedii folium (EF) — высушенные листья Epimedium brevicornu Maxim., Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim., Epimedium pubescens Maxim., или Epimedium koreanum Nakai. EF можно использовать для лечения остеопороза, климактерического синдрома, опухолей молочной железы, гипертонии, ишемической болезни сердца и других заболеваний1. Как традиционная китайская медицина (ТКМ), EF имеет более чем 2000-летнюю историю в медицине и питании. Благодаря своей низкой цене и замечательному эффекту тонизирования почек, он широко используется в лекарствах и здоровом питании. EF обрабатывается путем обжаривания его с бараньим маслом, процесс, впервые описанный в «Теории обработки Лэй Гун», написанной Лэй Сяо в период2 Лю Сун. Эффективность сырого EF и жареного EF совершенно разная. Сырой EF в основном рассеивает ревматизм, тогда как жареный EF согревает почки, усиливая ян3. В настоящее время EF широко используется в качестве сырья в лекарствах и здоровой пище; В Китае зарегистрировано 399 патентованных лекарств, девять импортных продуктов здорового питания и 455 отечественных продуктов здорового питания с EF в качестве сырья4. Этот лекарственный материал имеет большие перспективы применения. Однако в последние годы появляется все больше сообщений о побочных реакциях и повреждении печени человека, вызванных здоровой пищей и китайскими патентованными лекарствами, использующими EF в качестве сырья, и соответствующие исследования токсичности 5,6,7 сообщили, что EF в качестве сырья имеет потенциальные риски для безопасности.

Китайская лекарственная обработка относится к фармацевтическим методам, которые могут эффективно снизить или устранить токсичность и повысить безопасность ТКМ. Традиционным методом обработки EF является обжаривание с бараньим маслом, что снижает токсичность EF и усиливает его эффект согревания почек и стимулирования yang8. Этот метод обработки включен в Китайскую фармакопею и различные спецификации обработки1. Процесс EF определяется только следующим образом: на каждые 100 кг EF добавляется 20 кг амниотического масла (рафинированного), и оно обжигается мягким огнем до однородной и блестящей1. В приведенных выше стандартах нет строгих параметров метода обработки EF, поэтому локальные спецификации обработки не были унифицированы для обеспечения согласованности. Поэтому было бы полезно провести систематическое исследование процесса ЭФ. В данной работе был использован экспериментальный метод поверхности дизайна и отклика Бокса-Бенкена для оптимизации технологии обработки EF.

Экспериментальный дизайн Бокса-Бенкена — это метод, обычно используемый для оптимизации факторов процесса. Параметры извлечения могут быть оптимизированы путем установления функциональной зависимости между несколькими факторами соответствия уравнений регрессии и значениями эффектов. В последнее время этот метод широко используется для изучения экстракцииТКМ 5,6,7 и обработки 9,10,11. В различных исследованиях сообщалось о методах приготовления ТКМ, включающих обработку соли, обработку вина и жарку в соответствии с дизайном Box-Behnken, например, для обработанного солью Psoraleae fructus 12, обработанного вином Cnidii fructus13 и жареного Cinnamomi ramulus14. Этот метод имеет сокращенное время тестирования, высокую точность тестирования и подходит для многофакторных и многоуровневых тестов. Этот метод является более простым, чем метод испытания ортогонального дизайна, и более всеобъемлющим, чем метод15 однородного проектирования. Полученные соотношения позволяют определить прогнозируемое значение любой контрольной точки в пределах тестового диапазона, что является большим преимуществом. Модель рыбок данио-рерио может быть использована для проверки того, является ли EF менее токсичным после обработки.

В исследованиях токсичности ТКМ модель рыбок данио-рерио имеет двойные преимущества: высокую пропускную способность клеточных экспериментов и сходство с экспериментами на грызунах16. Эта модель отличается небольшими размерами, высокой скоростью нереста, коротким циклом размножения, простотой разведения. Модель может быть использована в крупномасштабных синхронных экспериментах на планшетах для клеточных культур, а экспериментальная дозировка препарата невелика, экспериментальный цикл короткий, стоимость низкая, а весь экспериментальный процесс легко наблюдать и эксплуатировать17. Эмбрионы рыбок данио-рерио прозрачны и быстро развиваются. Таким образом, токсичность и тератогенное действие лекарственных средств на висцеральные ткани на разных стадиях развития можно непосредственно наблюдать под микроскопом18. Гомология генов между рыбками данио-рерио и человеком достигает 85%18. Путь передачи сигнала рыбок данио-рерио аналогичен пути человека18. Биологическая структура и физиологические функции рыбок данио-рерио очень похожи на таковые у млекопитающих18. Таким образом, модель рыбок данио-рерио для тестирования лекарств может предоставить экспериментальных животных, которые являются надежными и полностью применимыми к людям19.

В этом исследовании мы использовали методологию поверхности «дизайн-отклик» Бокса-Бенкена для оптимизации количества и температуры бараньего масла и температуры жарки, используемой в технологии обработки EF, с содержанием икариина, эпимедина А, эпимедина В, эпимедина С и баохуозида I в качестве индексов оценки. Модель рыбок данио-рерио была использована для предварительного изучения влияния водного экстракта EF на эмбриональное развитие рыбок данио-рерио до и после обработки, чтобы оценить эффект ослабления обработки на EF.

протокол

Все эксперименты, связанные с животными, проводились с одобрения Комитета по этике экспериментов Чунцинского института ТКМ (номер сертификата проверки этики лабораторных животных: ZJS2022-03).

1. Определение биологически активных компонентов

ПРИМЕЧАНИЕ: Вид, использованный в этом исследовании, был Epimedium sagittatum, и образцы были собраны в округе Фэнду, Чунцин. Образец был идентифицирован как сухая надземная часть E. sagittatum (Sieb. et Zucc.) Сентенция. исследователями Института биологической медицины, Чунцинского института традиционной китайской медицины.

  1. Готовят раствор контрольного продукта путем точного взвешивания соответствующего количества каждого эталонного вещества, а именно икариина, эпимедина А (ЭА), эпимедина В (ЭБ), эпимедина С (ЕС) и баохуозида I (БИ), используя электронные аналитические весы, и растворяют в метаноле. Используя их, приготовьте смешанный эталонный исходный раствор, содержащий 381,61 мкг/мл икариина, 124,14 мкг/мл EA, 110,24 мкг/мл EB, 1091,75 мкг/мл EC и 184,98 мкг/мл BI.
  2. Приготовьте раствор исследуемого продукта, измельчив EF через сито No 3. Поместите примерно 0,2 г (с использованием электронных аналитических весов) измельченного EF в закупоренную колбу Эрленмейера, добавьте 20 мл разбавленного этанола, а затем ультразвук мощностью 400 Вт и частотой 50 кГц в течение 1 часа. Хорошо встряхните и пропустите через мембранный фильтр 0,22 мкм для получения испытуемого раствора.
  3. Выполните хроматографию следующим образом. Используйте высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) с колонкой C18 с размерами 4,6 мм x 250 мм и внутренним диаметром 5 мкм. Используйте ацетонитрил в качестве подвижной фазы А и сверхчистую воду в качестве подвижной фазы В. Используйте следующие параметры градиентного элюирования: 0-30 мин, от 24% А до 26% А; 30-31 мин, от 26% А до 45% А; 31-45 мин, от 45% А до 47% А. Используйте длину волны детектирования 220 нм (для используемого детектора см. Таблицу материалов). Поддерживайте температуру колонки на уровне 30 °C и скорость тока на уровне 1,0 мл/мин и используйте образец размером 10 мкл.
  4. Чтобы исследовать линейную зависимость, используйте смешанный эталонный раствор, как показано на шаге 1.1, разбавленный в 2 раза, 4 раза, 8 раз, 16 раз и 32 раза, для икариина, EA, EB, EC и BI соответственно. Используйте ацетонитрил в качестве подвижной фазы А и сверхчистую воду в качестве подвижной фазы В.
  5. Используйте следующие параметры градиентного элюирования: 0-30 мин, от 24% А до 26% А; 30-31 мин, от 26% А до 45% А; 31-45 мин, от 45% А до 47% А. Используйте длину волны детектирования 220 нм (для используемого детектора см. Таблицу материалов). Поддерживайте температуру колонки на уровне 30 °C и скорость тока на уровне 1,0 мл/мин и используйте образец размером 10 мкл. Наконец, запишите пиковые области. Постройте линейную регрессию с эталонной концентрацией (ось x, мкг/мл) в качестве абсцисс и площадью пика (ось y) в качестве ордината с помощью профессионального программного обеспечения (см. Таблицу материалов).
  6. Проведите прецизионное испытание, измерив смешанный контрольный раствор шесть раз подряд с помощью ВЭЖХ с использованием хроматографических условий, показанных на шаге 1.3. Запишите время обнаружения и пиковые площади каждого химического состава и рассчитайте относительные стандартные отклонения (RSD) пиковых областей, чтобы оценить точность (воспроизводимость), используя приведенную ниже формулу:
    RSD% = стандартное отклонение (SD)/среднее арифметическое вычисленных результатов (X) x 100 %
  7. Чтобы выполнить испытание на воспроизводимость, точно взвесьте порошок EF и параллельно приготовьте шесть частей раствора испытуемого продукта в соответствии со способом, описанным на шаге 1.2. Приготовленные растворы подвергают ВЭЖХ в хроматографических условиях, представленных на шаге 1.3. Запишите время удержания и пиковые площади каждого химического состава и рассчитайте количество каждого соединения по стандартной кривой (площади пиков в зависимости от концентраций). Рассчитайте RSD%, как указано выше.
  8. Чтобы провести испытание на стабильность, храните испытуемые растворы при комнатной температуре и измеряйте их содержание методом ВЭЖХ, описанным на этапе 1.3, через 0 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч и 24 ч после подготовки для оценки стабильности. Запишите время удержания и пиковые площади каждого химического состава и рассчитайте RSD% пиковых областей, как указано выше.
  9. Чтобы выполнить тест на восстановление образца, взвесьте 0,2 г порошка EF в колбу Эрленмейера с пробкой для шести повторений. Добавляют соответствующее количество эталонного раствора (количество эталонного вещества, добавленного в образец, эквивалентно 100% от известного содержания образца) и готовят испытуемый раствор в соответствии со способом, представленным на этапе 1.2.
  10. Введите образцы в хроматограф и проанализируйте в соответствии с хроматографическими условиями на шаге 1.3. Запишите пиковые области и рассчитайте средние значения восстановления и RSD%, как показано ниже:
    Коэффициент извлечения образца с шипами = (содержимое образца с шипами − содержимое образца)/количество образца x 100%

2. Оптимизация технологии переработки бараньего масла EF с использованием методологии Box-Behnken design-response surface

  1. Выберите ключевые параметры обработки EF, такие как количество бараньего масла (A; 15%-35%), температура бараньего масла (B; 50-120 °C) и температура жарки (C; 80-300 °C), в качестве влияющих факторов. В качестве оценочных индексов используйте комплексные оценки содержимого icariin, EA, EB, EC и BI. Процентное содержание бараньего масла здесь является массовым процентом.
  2. Используйте программное обеспечение для анализа поверхности отклика (см. Таблицу материалов) для разработки экспериментов с поверхностью отклика Бокса-Бенкена, исследования квадратичной поверхности отклика и построения полиномиальной модели второго порядка. Выберите новый дизайн Box-Behnken и установите для параметра «Числовые множители» значение 3; установите множители A, B и C. Нажмите «Продолжить». Установите для параметра «Ответы» значение 1 (это была общая оценка). Нажмите « Продолжить », чтобы завершить проектирование. Всего было запланировано 17 экспериментов (см. табл. 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Независимые и зависимые переменные, а также их низкие, средние и высокие уровни см. в таблице 2.
  3. Обработайте EF в соответствии с конкретными параметрами, указанными в таблице 1; например, для заказа No 1 взвесьте рафинированное баранье масло как 15% об./об., а затем нагрейте до 50 ° C, чтобы растопить его. Добавьте сырой EF к растопленной баранине, обжарьте на слабом огне (190 ° C), пока она не станет равномерно блестящей, а затем выньте и остудите. Выполнил 17 экспериментальных операций. Всего в этой работе было получено 17 групп продуктов, обработанных EF.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Баранье масло твердое при комнатной температуре (25 °C) и плавится в жидкость при нагревании. В качестве вспомогательного вещества можно использовать баранье масло в жидком состоянии.
  4. Готовят испытуемые растворы продуктов переработки в соответствии со способом, описанным в шаге 1.2. Затем проанализируйте их с помощью ВЭЖХ в соответствии с хроматографическими условиями, описанными в шаге 1.3. Запишите время удержания и пиковые площади каждого химического состава и рассчитайте содержание икариина, EA, EB, EC и BI в каждом тестовом растворе по внешней стандартной кривой. Используйте приведенную ниже формулу расчета всеобъемлющих баллов для расчета комплексных баллов 17 экспериментальных групп:
    Совокупный балл =Z /Z макс. × 0,5 + BI/BIмакс. × 0,5
    где Z — сумма содержания икариина, EA, EB и EC; Zmax – максимальное значение суммы содержания икариина, EA, EB и EC в 17 экспериментальных группах; BI — это содержимое бизнес-аналитики; иBI max — максимальное значение содержимого BI в 17 экспериментальных группах.
  5. Импортируйте полные результаты оценки для 17 групп экспериментов в программное обеспечение для анализа данных (см. Таблицу материалов) для анализа экспериментальных данных. В элементах оценки выберите квадратичный порядок процессов и тип полиномиальной модели.

3. Тестирование влияния обработки на эмбриональное развитие рыбок данио-рерио

  1. Пробоподготовка
    1. Сырой и обработанный EF измельчить через сито No 3 (см. Таблицу материалов). К 100 г каждого образца EF добавьте 1,000 мл сверхчистой воды. Замочите EF на 0,5 часа, дважды вскипятите воду по 30 мин, а затем процедите фильтровальной бумагой.
    2. Смешайте фильтраты и сконцентрируйте образец путем нагревания. Добавьте сверхчистую воду в конечный объем 100 мл для получения обработанных исходных растворов EF (PEF, 1 г / мл) и сырого EF (CEF, 1 г / мл). Измерьте количество сырого лекарственного средства в каждом исходном растворе.
    3. Поместите аликвоты 1 мл, 1,5 мл, 2,5 мл, 5 мл и 7,5 мл исходных растворов в мерные колбы объемом 10 мл, а затем добавьте сверхчистую воду до объема для приготовления тестовых растворов с концентрациями 100 мг / мл, 150 мг / мл, 200 мг / мл, 250 мг / мл, 500 мг / мл и 750 мг / мл для исследования эмбриотоксичности рыбок данио.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрации испытуемых растворов были получены путем ссылки на соответствующую литературу 20,21 и путем проведения предварительных экспериментов для получения10-кратного градиента концентрации, используемого в нормальной токсикологии. CEF был необработанным образцом, а PEF был образцом, приготовленным с использованием наилучшей технологии обработки, описанной в разделе 2.
  2. Разведение рыбок данио-рерио и лечение эмбрионов21
    1. Приспосабливайте рыбок данио-рерио дикого типа (см. Таблицу материалов) при контролируемой температуре в течение 2 дней, держите их в проточном аквариуме при рН 7,0-7,4 и кормите два раза в день.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Ингибирование образования меланина у рыбок данио-рерио было достигнуто путем добавления 1-фенил-2-тиомочевины в концентрации 0,003% (масса/объем) в питательную среду, что сохраняло прозрачность их тел для морфологического наблюдения.
    2. Вечером отбирайте взрослых фертильных рыбок данио дикого типа и разделяйте их с помощью перегородок в брачных ящиках. Снимите перегородки на следующее утро и дайте рыбе нереститься в течение 30 минут. Собирают оплодотворенные яйца капельницей каждые 15 мин. Всего было собрано 520 здоровых эмбрионов дикого типа. Хранить эмбрионы рыбок данио-рерио в инкубаторе при температуре 28,5 °C в течение 24 часов.
    3. Случайным образом распределите здоровые эмбрионы через 24 часа после оплодотворения (hpf) на 13 групп и вместе с одной контрольной группой отдельно замочите по 10 мл каждого из следующих растворов в чашке для культивирования: PEF: 100 мкг/мл, 150 мкг/мл, 200 мкг/мл, 250 мкг/мл, 500 мкг/мл, 750 мкг/мл; CEF: 100 мкг/мл, 150 мкг/мл, 200 мкг/мл, 250 мкг/мл, 500 мкг/мл, 750 мкг/мл. Обработайте заготовку контрольной группы средой в качестве раствора. Каждая группа содержала 40 эмбрионов в этом исследовании.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Состав среды составляет 0,15 М NaCl, 5 мМ KCl, 0,25 мМ Na 2 HPO 4, 0,45 мМ KH 2 PO 4, 1,3 мМ CaCl2, 1,0 мМ MgSO4 и4 мМ NaHCO3.
    4. Культивируйте рыбок данио-рерио в инкубаторе с постоянной температурой до 120 л.с. Подсчитайте количество мертвых личинок каждый день, наблюдайте за морфологией основных органов личинок в каждой экспериментальной группе под стереомикроскопом (масштабная линейка = 500 мкм, см. Таблицу материалов) и рассчитайте концентрацию полусмерти (LC50) рыбок данио-рерио при 72 hpf с помощью программного обеспечения для анализа данных (см. Таблицу материалов).

Результаты

Результаты методологического исследования
Наблюдалась линейная зависимость между концентрацией икариина, ЭА, ЭБ, ЭК, БИ и хроматографическими пиковыми площадями (см. табл. 3). Значения RSD% (n = 6) хроматографических пиковых площадей икариина, EA, EB, EC и BI составляли 0,28%, 1,22%...

Обсуждение

Независимые переменные и определение их уровней
Технология обработки EF описана только в издании Китайской фармакопеи 2020 года и местных спецификациях обработки китайских лекарств, опубликованных 26 провинциями, муниципалитетами и автономными районами по всей стране

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа поддерживается Бизнес-проектом фундаментальных научных исследований Чунцинской академии традиционной китайской медицины (номер проекта: jbky20200013), Проектом руководства по стимулированию производительности научно-исследовательских институтов Чунцина (номер проекта: cstc2021jxjl 130025) и Проектом строительства ключевой дисциплины Комиссии по здравоохранению Чунцина по переработке китайской Materia Medica.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileFisher197164
Baohuoside figure-materials-103 (Bfigure-materials-195 ) Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20042402
Chromatographic columnWaters CorporationSymmetry C18
Design Expert softwareStat- Ease Inc., Minneapolis, MNTrial Version8.0.6.1
DetectorWaters Corporation2998
DisintegratorHefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.S-FS553
Electronic analytical balanceMettler-Toledo International Inc.MS205DU
Epimedin A (EA)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-21112118
Epimedin B (EB)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080403
Epimedin C (EC)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080310
EthanolChongqing Chuandong Chemical ( Group ) Co., Ltd.20180801
Graphpad softwareGraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA6.02
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)Waters Corporation2695
IcariinChengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.21091401
MethanolChongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd.20171101
Microporous membraneTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.0.22μm
Mutton oilKuoshan Zhiniu Fresh Food Store20211106
Office Excel office softwareMicrosoftOffice Excel 2021
Pharmacopoeia sieveShaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.R40/3
Pure water machineChongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd.AT Sro 10A
Qualitative filter paperShanghai Leigu Instrument Co., Ltd.18cm
StereomicroscopeCarl Zeiss, Oberkochen, GermanyStemi 2000
Ultrasonic cleanerBranson Ultrasonics (Shanghai) Co.,Ltd.BUG25-12
ZebrafishChina Zebrafish Resource Center (CZRC)The AB strain

Ссылки

  1. Chinese Pharmacopoeia Commission. . Chinese Pharmacopoeia. Volume I. , (2020).
  2. Wang, X. T. . Collection of Traditional Chinese Medicine Processing Methods. , (1998).
  3. Chen, L. L., Jia, X. B., Jia, D. S. Advances in studies on processing mechanism of Epimedii Folium. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 12 (12), 2108-2111 (2010).
  4. Zhao, W., et al. Optimized extraction of polysaccharides from corn silk by pulsed electric field and response surface quadratic design. Journal of The Science of Food and Agriculture. 91 (12), 2201-2209 (2011).
  5. Zhao, L. C., et al. The use of response surface methodology to optimize the ultrasound-assisted extraction of five anthraquinones from Rheum palmatum L. Molecules. 16 (7), 5928-5937 (2011).
  6. Mao, W. H., Han, L. J., Shi, B. Optimization of microwave assisted extraction of flavonoid from Radix Astragali using response surface methodology. Separation Science and Technology. 43 (12), 671-681 (2008).
  7. Liu, W., et al. Optimization of total flavonoid compound extraction from Gynura medica leaf using response surface methodology and chemical composition analysis. International Journal of Molecular Sciences. 11 (11), 4750-4763 (2010).
  8. Guo, G. L., et al. Research progress on processing mechanism of Epimedium fried with sheep fat oil based on warming kidney and promoting yang. Journal of Liaoning University of TCM. 22 (07), 1-5 (2020).
  9. Shen, X. J., Zhou, Q., Sun, L. -. L., Dai, Y. -. P., Yan, X. -. S. Optimization for cutting procedure of astragali radix with Box-Behnken design and response surface method. China Journal of Chinese Materia Medica. 39 (13), 2498-2503 (2014).
  10. Wang, L. H., et al. Optimization of processing technology of honey wheat bran based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 52 (12), 3538-3543 (2021).
  11. Zhang, J. B., et al. Study on integrated process of producing area and processing production for Paeoniae Radix Alba based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (18), 5657-5662 (2022).
  12. Li, N., Zhang, X. M., Yao, Y. Y., Chen, Y. L., Fan, Q. Optimization of processing technology for Psoraleae Fructus by D-optimal response surface methodology with UHPLC. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 39 (05), 42-44 (2022).
  13. Jia, Y. Q., et al. Optimization of processing technology with wine of Cnidii Fructus by AHP-entropy weight method combined with response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 10, 2338-2343 (2022).
  14. Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Cinnamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (08), 1838-1842 (2022).
  15. Wang, W. D., et al. Optimization extraction of effective constituents from Epimedii Herba based on central composite design-response surface methodology and orthogonal experimental design. Lishizhen Medicine and Materia Medica. 21 (11), 2766-2768 (2010).
  16. Yang, L., et al. Zebrafish embryos as models for embryotoxic and teratological effects of chemicals. Reproductive Toxicology. 28 (2), 245-253 (2009).
  17. Kanungo, J., Cuevas, E., Ali, S. F., Paule, M. G. Zebrafish model in drug safety assessment. Current Pharmaceutical Design. 20 (34), 5416-5429 (2014).
  18. Jayasinghe, C. D., Jayawardena, U. A. Toxicity assessment of herbal medicine using zebrafish embryos: A systematic review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 7272808 (2019).
  19. Scholz, S. Zebrafish embryos as an alternative model for screening of drug induced organ toxicity. Archives of Toxicology. 87 (5), 767-769 (2013).
  20. Ling, J., et al. Analysis of Folium Epimedium toxicity in combination with Radix Morindae Officinalis based on zebrafish toxicity/metabolism synchronization. Acta Pharmaceutica Sinica. 53 (1), 74 (2018).
  21. Wang, Y., et al. Tri-n-butyl phosphate delays tissue repair by dysregulating neutrophil function in zebrafish. Toxicology and Applied Pharmacology. 449, 116114 (2022).
  22. Sheng, Z. L., Li, J. C., Li, Y. H. Optimization of forsythoside extraction from Forsythia suspensa by Box-Behnken design. African Journal of Biotechnology. 10 (55), 11728-11737 (2011).
  23. Pang, X., et al. Prenylated flavonoids and dihydrophenanthrenes from the leaves of Epimedium brevicornu and their cytotoxicity against HepG2 cells. Natural Product Research. 32 (19), 2253-2259 (2018).
  24. Zhong, R., et al. The toxicity and metabolism properties of Herba Epimedii flavonoids on laval and adult zebrafish. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 3745051 (2019).
  25. Zhang, L., et al. Effect of 2" -O-rhamnosyl icariside II, baohuoside I and baohuoside II in Herba Epimedii on cytotoxicity indices in HL-7702 and HepG2 cells. Molecules. 24 (7), 1263 (2019).
  26. Chen, Y., Yang, R. J., Yu, M., Ding, S. L., Chen, R. Q. Application of response surface methodology in modern production process optimization. Science & Technology Vision. 2016 (19), 36-39 (2016).
  27. Zhang, Y., et al. Progress in using zebrafish as a toxicological model for traditional Chinese medicine. Journal of Ethnopharmacology. 282, 114638 (2022).
  28. Oliveira, R., Domingues, I., Grisolia, C. K., Soares, A. M. V. M. Effects of triclosan on zebrafish early-life stages and adults. Environmental Science and Pollution Research. 16 (6), 679-688 (2009).
  29. Ton, C., Lin, Y., Willett, C. Zebrafish as a model for developmental neurotoxicity testing. Birth Defects Research. Part A, Clinical and Molecular Teratology. 76 (7), 553-567 (2006).
  30. He, Q., et al. Toxicity induced by emodin on zebrafish embryos. Drug and Chemical Toxicology. 35 (2), 149-154 (2012).
  31. Chen, Y., et al. Developmental toxicity of muscone on zebrafish embryos. Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology. (6), 267-273 (2014).
  32. He, Y. L., et al. Effects of shikonin on zebrafish's embryo and angiogenesis. Chinese Traditional Patent Medicine. 38 (2), 241-245 (2016).
  33. Zhou, Y. . The transformation research on the chemical compositions in the processing of Epimedium. , (2016).
  34. Xiao, Y. P., Zeng, J., Jiao, L. -. N., Xu, X. -. Y. Review for treatment effect and signaling pathway regulation of kidney-tonifying traditional Chinese medicine on osteoporosis. China Journal of Chinese Materia Medica. 43 (1), 21-30 (2018).
  35. Wang, R. H. Study on modern pharmacological effects of traditional Chinese medicine for tonifying kidney yang. Journal of Hubei University of Chinese Medicine. 13 (04), 63-66 (2011).
  36. Luo, L., et al. Advances in the chemical constituents and pharmacological studies of Epimedium. Asia-Pacific Traditional Medicine. 15 (6), 190-194 (2019).
  37. Liu, S., et al. Effects of icariin on ERβ gene expression and serum estradiol level in ovariectomized rats. Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine. 32 (1), 150-152 (2016).
  38. Liu, Y., et al. Effects of epimedin A on osteoclasts and osteoporotic male mice. Chinese Journal of Veterinary Science. 41 (07), 1359-1364 (2021).
  39. Liu, Y. L., et al. Effects of icariin and epimedium C on microstructure of bone tissue in glucocorticoid osteoporosis model mice based on Micro-CT technique. Drug Evaluation Research. 43 (09), 1733-1739 (2020).
  40. Zhan, Y. Evaluation of antiosteoporotic activity for micro amount icariin and epimedin B based on the osteoporosis model using zebrafish. Chinese Pharmaceutical Journal. (24), 30-35 (2014).
  41. Zhan, Y., Wei, Y. -. J., Sun, E., Xu, F. -. J., Jia, X. -. B. Two-dimensional zebrafish model combined with hyphenated chromatographic techniques for evaluation anti-osteoporosis activity of epimendin A and its metabolite baohuoside I. Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (06), 932-937 (2014).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE193

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены