تشريح وعزل أنسجة الرئة المنزوعة الخلايا الخاصة بالمنطقة

Summary

يظهر هنا بروتوكول لعزل أنسجة الرئة الخلوية الإقليمية. يوفر هذا البروتوكول أداة قوية لدراسة التعقيدات في المصفوفة خارج الخلية وتفاعلات مصفوفة الخلية.

Abstract

غالبا ما يكون زرع الرئة هو الخيار الوحيد للمرضى في المراحل المتأخرة من مرض الرئة الحاد ، ولكن هذا محدود بسبب توفير رئتي المتبرع المناسبة والرفض الحاد والمزمن بعد الزرع. يعد التحقق من مناهج الهندسة الحيوية الجديدة لاستبدال الرئتين المريضة أمرا ضروريا لتحسين بقاء المريض على قيد الحياة وتجنب المضاعفات المرتبطة بمنهجيات الزرع الحالية. يتضمن النهج البديل استخدام رئتين كاملتين منزوعتين للخلايا تفتقر إلى المكونات الخلوية التي عادة ما تكون سبب الرفض الحاد والمزمن. نظرا لأن الرئة عضو معقد ، فمن المهم فحص مكونات المصفوفة خارج الخلية لمناطق معينة ، بما في ذلك الأوعية الدموية والممرات الهوائية والأنسجة السنخية. الغرض من هذا النهج هو إنشاء طرق بسيطة وقابلة للتكرار يمكن للباحثين من خلالها تشريح وعزل الأنسجة الخاصة بالمنطقة من الرئتين المنزوع الخلايا بالكامل. تم وضع البروتوكول الحالي لرئتي الخنازير والإنسان ، ولكن يمكن تطبيقه على الأنواع الأخرى أيضا. بالنسبة لهذا البروتوكول ، تم تحديد أربع مناطق من الأنسجة: مجرى الهواء والأوعية الدموية والحويصلات الهوائية وأنسجة الرئة السائبة. يسمح هذا الإجراء بشراء عينات من الأنسجة التي تمثل بدقة أكبر محتويات أنسجة الرئة منزوعة الخلايا بدلا من طرق التحليل السائبة التقليدية.

Introduction

أمراض الرئة ، بما في ذلك مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) ، والتليف الرئوي مجهول السبب (IPF) ، والتليف الكيسي (CF) ، لا تزال حاليا بدون علاج¹،²،^3،4. غالبا ما يكون زرع الرئة هو الخيار الوحيد للمرضى في المراحل اللاحقة ، ولكن هذا يظل خيارا محدودا بسبب توفير رئتي المتبرع المناسبة والرفض الحاد والمزمن بعد الزرع³،^5،6. على هذا النحو ، هناك حاجة ماسة لاستراتيجيات علاج جديدة. أحد الأساليب الواعدة في الهندسة الحيوية التنفسية هو تطبيق السقالات المشتقة من الأن....

Protocol

تم إجراء جميع الدراسات على الحيوانات وفقا ل IACUC بجامعة فيرمونت (UVM). تم الحصول على جميع الرئتين البشرية من خدمات تشريح الجثة UVM وتم إجراء الدراسات ذات الصلة وفقا لإرشادات IRB من UVM.

ملاحظة: تم وصف إزالة الخلايا من رئتي الخنازير والإنسان سابقا من قبل مجموعتنا⁷،⁸،⁹،^10،21. باختصار ، يتم إزالة الخلايا من فصوص الرئة الكاملة من خلال التروية المتسلسلة للممرات الهوائية والأوعية الدموية بسلسلة من محاليل المنظفات والإنزيم سعة 2 لتر باستخدام مضخة تمعجية: 0.1٪ Triton-X 100 ، 2٪ ديوكسي ك....

النتائج

يوضح الشكل 1 مخططا عاما للبروتوكول. بمجرد إتقانها ، يمكن بسهولة استنساخ التشريح الإقليمي لأنسجة الرئة منزوعة الخلايا. يعد تحديد تصنيف كل عينة من الأنسجة المقطوعة أمرا ضروريا لنجاح إجراء التشريح. الأنسجة الوعائية أكثر مرونة بكثير من مجرى الهواء ، لذا فإن استخدام الملقط لتم.......

Discussion

كثيرا ما تستخدم الأنسجة المنزوعة الخلايا من البشر والأنواع الأخرى كمواد حيوية لدراسة تكوين ECM وكذلك تفاعلات الخلايا ECM في نماذج الاستزراع خارج الجسم الحي ، بما في ذلك الهلاميات المائية ثلاثية الأبعاد^12،13. على غرار الأعضاء الأخرى ، تم استخدام الرئتين من.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bonn Scissors	Fine Science Tools	14184-09
Dumont #5 - Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-02
Forceps, Curved, S/S, Blunt, Serrated - 130mm	CellPath	N/A
Hardened Fine Scissors	Fine Science Tools	14090-11
Moria Iris Forceps	Fine Science Tools	11373-22
Pyrex Glass Casserole Dish	Cole-Parmer	3175-10