Dissezione e isolamento del tessuto polmonare decellularizzato specifico per regione

Riepilogo

Presentato qui è un protocollo per l'isolamento del tessuto polmonare decellularizzato regionale. Questo protocollo fornisce un potente strumento per studiare le complessità nella matrice extracellulare e nelle interazioni cellula-matrice.

Abstract

Il trapianto di polmone è spesso l'unica opzione per i pazienti nelle fasi successive di una grave malattia polmonare, ma questo è limitato sia a causa della fornitura di polmoni donatori idonei che del rigetto acuto e cronico dopo il trapianto. Accertare nuovi approcci di bioingegneria per la sostituzione dei polmoni malati è fondamentale per migliorare la sopravvivenza dei pazienti ed evitare complicazioni associate alle attuali metodologie di trapianto. Un approccio alternativo prevede l'uso di polmoni interi decellularizzati privi di costituenti cellulari che sono tipicamente la causa del rigetto acuto e cronico. Poiché il polmone è un organo così complesso, è interessante esaminare i componenti della matrice extracellulare di regioni specifiche, tra cui la vascolarizzazione, le vie aeree e il tessuto alveolare. Lo scopo di questo approccio è quello di stabilire metodi semplici e riproducibili con cui i ricercatori possono sezionare e isolare il tessuto specifico della regione da polmoni completamente decellularizzati. L'attuale protocollo è stato concepito per i polmoni suini e umani, ma può essere applicato anche ad altre specie. Per questo protocollo, sono state specificate quattro regioni del tessuto: vie aeree, vascolarizzazione, alveoli e tessuto polmonare bulk. Questa procedura consente l'approvvigionamento di campioni di tessuto che rappresentano in modo più accurato il contenuto del tessuto polmonare decellularizzato rispetto ai tradizionali metodi di analisi di massa.

Introduzione

Le malattie polmonari, tra cui la broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO), la fibrosi polmonare idiopatica (IPF) e la fibrosi cistica (FC), rimangono attualmente senza cura 1,2,3,4. Il trapianto di polmone è spesso l'unica opzione per i pazienti nelle fasi successive, tuttavia questa rimane un'opzione limitata sia a causa della fornitura di polmoni donatori idonei che del rigetto sia acuto che cronico dopo il trapianto ^3,5,6. Come tale, c'è un b....

Protocollo

Tutti gli studi sugli animali sono stati eseguiti in conformità con la IACUC dell'Università del Vermont (UVM). Tutti i polmoni umani sono stati acquisiti dai servizi di autopsia UVM e gli studi correlati sono stati eseguiti secondo le linee guida dell'IRB dell'UVM.

NOTA: La decellularizzazione dei polmoni suini e umani è stata precedentemente descritta dal nostro gruppo 7,8,9,10,21. In breve, i lobi polmonari interi vengono decellularizzati attraverso la perfusione sequenziale d....

Discussione

I tessuti decellularizzati provenienti dall'uomo e da altre specie sono frequentemente utilizzati come biomateriali per lo studio della composizione della ECM e delle interazioni cellula-ECM in modelli di coltura ex vivo, inclusi gli idrogel 3D^12,13. Analogamente ad altri organi, i polmoni decellularizzati sono stati precedentemente utilizzati per determinare le differenze di composizione della ECM nei polmoni sani rispetto a quelli malati (cioè enfisem.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bonn Scissors	Fine Science Tools	14184-09
Dumont #5 - Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-02
Forceps, Curved, S/S, Blunt, Serrated - 130mm	CellPath	N/A
Hardened Fine Scissors	Fine Science Tools	14090-11
Moria Iris Forceps	Fine Science Tools	11373-22
Pyrex Glass Casserole Dish	Cole-Parmer	3175-10