Диссекция и выделение регионоспецифической децеллюляризированной ткани легких

Резюме

Здесь представлен протокол выделения регионарной децеллюляризированной легочной ткани. Этот протокол предоставляет мощный инструмент для изучения сложностей во внеклеточном матриксе и взаимодействиях между клетками и матриксом.

Аннотация

Трансплантация легких часто является единственным вариантом для пациентов на поздних стадиях тяжелого заболевания легких, но это ограничено как из-за наличия подходящих донорских легких, так и из-за острого и хронического отторжения после трансплантации. Определение новых биоинженерных подходов для замены больных легких является обязательным условием для повышения выживаемости пациентов и предотвращения осложнений, связанных с текущими методологиями трансплантации. Альтернативный подход включает использование децеллюляризированных целых легких, в которых отсутствуют клеточные компоненты, которые, как правило, являются причиной острого и хронического отторжения. Поскольку легкое является таким сложным органом, представляет интерес изучение компонентов внеклеточного матрикса конкретных областей, включая сосудистую сеть, дыхательные пути и альвеолярную ткань. Целью этого подхода является создание простых и воспроизводимых методов, с помощью которых исследователи могут препарировать и изолировать регионоспецифическую ткань от полностью децеллюляризированных легких. Текущий протокол был разработан для легких свиней и человека, но может быть применен и к другим видам. Для этого протокола были определены четыре области ткани: дыхательные пути, сосудистая сеть, альвеолы и объемная легочная ткань. Эта процедура позволяет получить образцы ткани, которые более точно представляют содержимое децеллюляризированной легочной ткани, в отличие от традиционных методов объемного анализа.

Введение

Заболевания легких, включая хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), идиопатический легочный фиброз (ИЛФ) и муковисцидоз (МВ), в настоящее время остаются неизлечимыми 1,2,3,4. Трансплантация легких часто является единственным вариантом для пациентов на более поздних стадиях, однако она остается ограниченным вариантом как из-за наличия подходящих донорских легких, так и из-за острого и хронического отторжения после трансплантации ^3,5,6. Таким....

протокол

Все исследования на животных были проведены в соответствии с IACUC Университета Вермонта (UVM). Все легкие человека были получены в Службе аутопсии UVM, и соответствующие исследования были проведены в соответствии с рекомендациями IRB UVM.

ПРИМЕЧАНИЕ: Децеллюляризация легких свиньи и человека была ранее описана нашей группой 7,8,9,10,21. Короче говоря, целые доли легких децеллюляризируются путем последовательной перфузии дыхательных путей и сосудистой сети серией из 2 л моющих и ....

Результаты

Общая схема протокола показана на рисунке 1. После освоения регионарная диссекция децеллюляризованной легочной ткани легко воспроизводима. Определение категоризации каждого разорванного образца ткани является обязательным условием успеха процедуры вскрытия. Сосуди.......

Обсуждение

Децеллюляризированные ткани человека и других видов часто используются в качестве биоматериалов для изучения состава ECM, а также взаимодействий между клетками и ECM в моделях культур ex vivo, включая 3D-гидрогели^12,13. Подобно другим органам, децеллюляризи.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bonn Scissors	Fine Science Tools	14184-09
Dumont #5 - Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-02
Forceps, Curved, S/S, Blunt, Serrated - 130mm	CellPath	N/A
Hardened Fine Scissors	Fine Science Tools	14090-11
Moria Iris Forceps	Fine Science Tools	11373-22
Pyrex Glass Casserole Dish	Cole-Parmer	3175-10